顺铂在TRAIL/APO-2L致胶质瘤细胞凋亡作用中影响机制的研究

目的探讨TRAIL对胶质瘤细胞凋亡的影响,并进一步研究DNA破坏药物顺铂(CDDP)在与其联合作用诱导细胞凋亡中影响作用的机制。方法行人脑胶质瘤U251细胞株的培养,应用不同浓度TRAIL和CDDP作用于胶质瘤U251细胞,MTT法检测TRAIL和CDDP分别及联合作用于U251细胞后的存活率,并以亚毒剂量的TRAIL和CDDP联合作用后,流式细胞仪检测其凋亡率。Westernblot方法检测CDDP作用前后TRAIL受体DR5表达量的变化。结果MTT结果:在一定时间范围内,随着药物浓度增加,TRAIL和CDDP分别及联合作用皆使胶质瘤U251细胞存活率逐渐降低,其中两者的联合作用效果明显,与分别作用组差异有统计学意义(P<0.01)。亚毒剂量的TRAIL(50ng·ml-1)、CDDP(4μg·ml-1)分别及联合作用人脑胶质瘤U251细胞24h后,存活率分别为:72.43%,75.56%,23.45%。亚毒剂量的TRAIL(50ng·ml-1)、CDDP(4μg·ml-1)单独或联合作用组致胶质瘤细胞凋亡率分别为25.61%、20.59%、62.33%。单独应用组与联合组之间差异有统计学意义(P<0.01)。Westernblot法检测显示:CDDP作用后较作用前DR5表达有明显增高,随CDDP剂量增多,DR5表达量逐渐增加。结论TRAIL和CDDP联合作用能显著增强其对人U251胶质瘤细胞凋亡的诱导,其机制可能与CDDP能上调TRAIL死亡受体DR5的表达有关。

TRAIL/APO-2L及其受体系统在脑肿瘤中的研究进展

TRAIL/APO - 2L及其受体是TNF家族中的新成员。该系统以其独特的凋亡诱导方式参与抗病毒免疫 ,免疫赦免以及肿瘤细胞的免疫逃逸等生理作用。TRAIL能诱导多种脑肿瘤细胞系发生凋亡而对神经细胞没有毒性 。

选择性杀癌细胞物:TRAIL/Apo-2L

研究发现了一种能选择性诱导癌细胞发生自杀的蛋白-TRAIL,肿瘤细胞对它比正常细胞敏感得多,且其作用独立于P53。关于其选择性杀伤作用机制的研究,近期取得了突破性进展。现将其蛋白、基因及其受体的结构、分布及作用机制进行综述。

Reciprocal expression of TRAIL and CD95L in Th1 and Th2 cells: role of apoptosis in T helper subset differentiation

Upon activation, naive T-helper cells can differentiate into two major distinct subsets, T helper 1 (Th1) and T helper 2 (Th2), as defined by their effector functions and cytokine secretion patterns. Cytokine milieu and costimulatory molecules have been shown to play an essential role in determining T helper differentiation. However, it is still unclear how the effects of signals of co-stimulatory molecules and cytokines are exerted during T helper differentiation. We show evidence suggesting that while cytokine signals initiate differentiation program, the selective action of death effectors determines the endpoint balance of differenti-

TRAIL蛋白的体外活性稳定性初步研究

大肠杆菌发酵表达的TRAIL蛋白经过两步纯化可得到纯度95%以上的活性蛋白,得率为40%。天然TRAIL蛋白为同源三聚体形式,在三聚体中心隐蔽结合Zn^(2+),Zn^(2+)可维持TRAIL蛋白天然结构的稳定性。研究发现在纯化后的重组可溶性TRAIL蛋白中添加Zn^(2+),并且Zn^(2+)与TRAIL单体的摩尔比例达到2:1时,TRAIL蛋白的活性达到最高。本文初步研究了TRAIL蛋白的体外活性稳定性问题,发现在添加了最适Zn^(2+)后的TRAIL蛋白保存溶液中添加25mmol/L LArg与50mmol/L L-Glu有助于抑制TRAIL蛋白活性下降、并可能长期稳定蛋白活性。

WtCosmc质粒转染对Tn^+肿瘤细胞恶性行为的影响

目的：以Tn＋肿瘤细胞为靶标,研究野生型Cosmc（WtCosmc）质粒转染对其恶性行为的影响,以期为肿瘤的诊断及治疗提供新思路.方法：流式细胞术检测肿瘤细胞表面Tn抗原阳性率,免疫磁珠分选Tn＋与Tn-肿瘤细胞;分选后的Tn＋肿瘤细胞经Fugene 6转染WtCosmc质粒,并用免疫荧光检测细胞表面Tn抗原表达状况.分别采用荧光法、CCK-8和Transwell检测转染前后Tn＋肿瘤细胞的T-synthase活性、细胞增殖、迁移能力及对Apo2L/TRAIL的敏感性.结果：与Tn-细胞相比,Tn＋肿瘤细胞T-synthase活性及对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性较低;细胞增殖、迁移能力较强.经WtCosmc质粒转染后,Tn＋细胞T-synthase活性及其对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性明显增高;Tn抗原表达受抑;细胞增殖及迁移能力明显下降.结论：转染WtCosmc可恢复Tn＋细胞T-synthse活性,抑制Tn抗原的表达,进而增强其对Apo2L/TRAIL诱导凋亡的敏感性,降低细胞增殖、迁移能力,有效抑制Tn＋肿瘤细胞的恶性行为.