聚合酶链反应-微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌

目的评价聚合酶链反应 (PCR) -微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌的价值。方法 :应用结核病细菌学涂片、培养常规检测方法及PCR -微孔板杂交技术检测 138例结核病患者痰标本 ,4 2例非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果 :用常规细菌学方法检测临床标本中结核杆菌敏感度为 37% (5 1/ 138) ,用PCR-微孔板杂交技术检测敏感度为 5 6 % (77/ 138) ,高于常规检测法 19%。用PCR -微孔板杂交技术检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 :PCR -微孔板杂交技术将PCR扩增、核酸杂交的技术及酶免技术相结合 ,简便、快速、敏感度高、特异性强 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。

猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究

以猪附红细胞体和多种血营养菌16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f/HM-r,在反向引物的5′端用生物素标记,以猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的可变区序列设计种特异性寡核苷酸探针,探针的5′端用地高辛标记,成功地建立了猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法。通过测定不同浓度PCR产物对应的微孔板杂交-酶反应显色OD值,用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程为y=2.1012-0.4492×logx,其相关系数R为0.977,显示对未知样品可进行定量检测。该方法与猪的多种细菌性病原、猫血巴尔通氏体CA株和E.wenyonii无交叉反应,其敏感性比常规PCR琼脂糖电泳检测提高了近100倍。用建立的方法对38份临床样品进行检测,结果有12份检测结果为阳性。

聚合酶链反应-微孔板杂交作人乳头瘤病毒新亚型分子流行病学研究

目的 了解人乳头瘤病毒 (HPV)新亚型 (注册号 :AF2 76 910 )的分子流行病学特点。方法 PCR 微孔板杂交检测泌尿生殖道标本、宫颈癌石蜡包埋组织、胃癌组织中HPV新亚型 ,结合临床特征了解其致病特点。结果 2 0 2例经HPV通用引物筛查阳性的泌尿生殖道标本中 ,2例HPV新亚型阳性 ,占 0 .1% ;5 1例宫颈癌石蜡包埋组织中 ,3例HPV新亚型阳性 ,占 5 .9% ;15例胃癌组织 ,未测到HPV新亚型。结论 早在 5年前本地区HPV新亚型就已存在 ;HPV新亚型在宫颈癌组织中被测到 ,可能提示其有致癌作用 ,值得进一步研究。

防污染PCR-微孔板杂交检测布鲁氏菌方法研究

目的 建立防污染 PCR-微孔板杂交 - EIA检测技术 ,并用于布鲁氏菌及其模拟感染组织中细菌的检测。方法 根据布鲁氏菌 31k D热休克蛋白和外膜蛋白 2 B(OMP2 B)基因设计引物 ,筛选合适引物 ,并建立用脲嘧啶糖基化酶防污染的 PCR扩增 -微孔板杂交与酶联显色检测布鲁氏菌的方法 ,并用于模拟污染布鲁氏菌动物脏器标本的检测。结果 根据布鲁氏菌 31k D热休克蛋白和外膜蛋白 2 B基因设计的引物 ,建立了复合 PCR,同时检测 2个基因的存在 ,并发现不同引物序列对 PCR扩增敏感性影响较大 ,可以相差 10 0 0倍。用 0 .5 U的U DG可以防止 10 8产物的污染 ,微孔板杂交 -酶联显色检测比单纯 PCR-电泳敏感 10倍。将该体系用于污染动物脏器的检测 ,可以检测出反应体系中 2～ 2 0 0个细菌的存在。结论 研究的防污染 PCR-微孔板杂交 - EIA试剂克服了目前 PCR试剂运输不便、产物污染所致假阳性和判定结果欠客观的缺点 。

聚合酶链反应—微孔板杂交技术检测人乳头瘤病毒

目的 建立HPV诊断及分型技术。方法 用HPV通用型引物和型特异性探针作PCR 微孔板杂交检测法(PCR ELISA)。结果 特异性探针只与HPV阳性标本显色 ,A值为 0 32 7± 0 0 2 9;阴性标本均不显色 ,A值为 0 0 0 3± 0 0 0 1,与性传播性疾病相关的病原微生物 (淋球菌、解脲支原体、沙眼衣原体、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒 )均不显色。该法能检出 3 6个HeLa细胞含HPV 18型 144个拷贝 ,A值 0 2 37～ 0 2 0 6 ;空白对照A值为 0 0 0 5～ 0 0 15。结论 PCR ELISA方法快速、敏感、特异且可用自动化酶标仪多量标本检测 ,适合临床实验使用。

端粒重复序列扩增法结合微孔板杂交法定量检测端粒酶活性

目的探讨定量检测端粒酶活性的非放射性检测方法。方法将端粒重复序列扩增测定法（ＴＲＡＰ）与微孔板杂交 相结合建立了非放射性检测方法，对３例正常肝组织和４例肝癌患者治疗前后的肝癌组织、瘤旁组织、肝癌凋亡组织 进行检测。结果肝癌组织具有比较高的端粒酶活性，而正常肝组织和瘤旁组织无此酶活性，肝癌凋亡组织端粒酶活性 显著降低。结论 该定量分析方法简单、灵敏、特异性强，可以比较准确地反映组织的端粒酶活性状态。

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的 :对 PCR-微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法 :取临床标本 2 6 8份分别进行抗酸染色、培养、PCR扩增产物电泳、PCR微孔板杂交四种方法的比较。结果 :在 2 16份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中 ,PCR-微孔板杂交法检出阳性为 98例 ,其检出率高于 PCR-电泳法 (91/ 2 18)、培养法 (81/ 2 18)和抗酸染色法(5 6 / 2 18)。5 0份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本 ,四种方法均未能检出结核分枝杆菌。结论 :PCR-微孔板杂交法是高度敏感。

建立检测嗜肺军团菌mip基因的PCR-微孔板反向探针杂交法

近年来随着对军团菌基因水平的深入研究和聚合酶链反应（ＰＣＲ）及其相关技术的不断发展，为军团菌检测提供了一个快速、敏感、特异的诊断方法，并已用于环境水和临床标本中的军团菌检测，具有较好的检测效果［１］。但是，要使之成为常规的临床诊断方法，尚需不断完善和...

PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA

目的 采用PCR ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA。方法 采用PCR技术扩增结核杆菌DNA ,并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板 ,再加入结核杆菌显色探针 ,同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色。共检测肺部疾病患者痰标本 5 10例。结果 该法的灵敏度为 5 9.3% ,特异性为 95 .0 % ;阳性预测值为 96 .3% ,阴性预测值为 5 1.4 %。结论 PCR ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA ,是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法。

PCR-微孔板杂交-ELISA法检测巨细胞病毒感染

建立PCR-微孔板杂交-ELISA法检测人血清标本中巨细胞病毒DNA。将5’端标记生物素的PCR扩增产物与5’端标记地高辛的探针呈液相混合,90℃ 2min,55℃,1min杂交。杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定,经酶标记抗地高辛标记抗体结合显色。本试剂检测灵敏度为2.5×104 copies/mL,比传统PCR和ELISA敏度性高,特异性强,与单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型,风疹病毒、EB病毒、腺病毒核酸无交叉反应,批内CV为8.9%,批间CV为10.5%。该法可用于定性和定量检测HCMV DNA。

微孔板杂交法检测肺癌端粒酶活性的研究

目的 :研究肺癌端粒酶活性及其临床应用价值。方法 :采用端粒重复序列扩增—微孔板杂交法 ,对 10 0例切除肺癌标本 ,分别取癌中央组织、癌旁 1cm、远癌组织 3块组织 ,进行端粒酶活性分析 ,同时送病理检查。结果 :端粒酶在肺癌组织中央部位的阳性检出率为 10 0 % ,癌旁 1cm为 84% ,远癌组织为 8% ,不同病理类型的肺癌端粒酶活性水平 ( A/mg蛋白 )分别为 :鳞癌 2 8例 0 .12 2 ,腺癌 6 8例 0 .12 5 ,小细胞癌 4例 0 .12 7,无显著性差异。结论 :端粒酶活性在切除肺癌标本中的测定 。

多种PCR-微孔板核酸杂交法同时检测三种病原体DNA的临床应用

目的 :应用一种同时检测沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法对临床标本进行检测。方法 :采用多重PCR 核酸探针杂交技术 ,对泌尿生殖系统传播疾病 (STD)有症状者分泌物 ,用同一份处理标本与常规PCR法比较。结果 :检测 186分标本 ,沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌检出率分别为 2 4 1%、5 0 0 %和2 9 0 % ,并有 2 5 2 %的双重感染和 6 6 %的三重复合感染。结论 :本法快捷、简便、特异性好 。

PCR-微孔板杂交检测端粒酶活性方法的建立及初步应用

目的 建立聚合酶链反应 -微孔板杂交法检测端粒酶活性的方法及应用于临床。方法 利用 Kim法处理样品及扩增端粒酶产物 ,引物 TS标记生物素 ,扩增产物与包被有亲合素的微孔板结合 ,并与标记地高辛特异探针杂交 ;与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应 ,经 PNPP显色。结果 该方法最佳实验条件为探针浓度 2 .5μmol/L,杂交时间 1 h,批内变异系数为 9.5% ,批间变异系数为 1 6.5%。在 2 9例各种恶性肿瘤组织 ,端粒酶活性总检出率为 89.6% ,而在 1 7例炎性包块与良性增生组织为 1 1 .8% ,7例正常组织中未发现有端粒酶活性。结论 该法灵敏度与重复性较好 ,简便快速 ,成本低 。

应用探针微孔板杂交技术检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

寻找一种检测孕妇血浆中胎儿 DNA新方法。采用 SRY探针微孔板杂交法 ,通过 PCR产物与 SRY探针杂交 ,然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色 ,读取光密度值。结果发现 :探针微孔板杂交检测法的灵敏性和特异性均高于电泳检测方法。提示 :探针微孔板杂交检测技术的灵敏性和特异性较高 。

聚合酶链反应-微孔板杂交法检测结核杆菌的临床应用及其评价

目的 对聚合酶链反应 ( PCR) -微孔板杂交法检测结核杆菌的临床适用性和可行性进行评价。方法 收集 1130份临床标本 ,分别用抗酸染色、培养、PCR电泳及 PCR微孔板杂交法进行结核杆菌检测 ,并结合临床诊断和疗效观察对实验结果进行分析。结果 10 0份临床证实无结核病的体液标本经抗酸染色和 PCR电泳 ,分别有 1例和 2例假阳性 ,但经培养和 PCR微孔板杂交法未查出阳性 ;其余 10 30份高度怀疑含有结核杆菌的体液标本的检测结果 ,以 PCR微孔板杂交阳性检出例数最高 ( 481/ 10 30 ) ,其次为 PCR电泳 ( 40 6 / 10 30 )、培养 ( 36 5 /10 30 )以及抗酸染色 ( 2 5 6 / 10 30 ) ;χ2 检验结果显示 ,PCR微孔板杂交的结核杆菌阳性检出例数与其它三种方法比较均呈显著或极显著性差异 ( P<0 .0 0 83及 P<0 .0 0 17)。结论 PCR-微孔板杂交方法是特异、灵敏、准确、快速的结核杆菌检测方法 。

聚合酶链反应——微孔板杂交技术用于乙型肝炎病毒DNA的检测

目的 :建立乙肝病毒DNA的聚合酶链反应 (PCR)—微孔板杂交法 ,使PCR结果判定更加客观。方法 :我们使用煮沸裂解法提取模板DNA ,将PCR引物 5′端标记生物素 ,用PCR产物与包被有亲和素的微孔板结合 ,并与含荧光素特异探针杂交 ,酶标记抗荧光素抗体与之结合进行显色反应 ,通过测定其吸光度来判断结果。结果 :所建立的PCR-微孔板杂交法的阳性检出率 (6 8/16 0 )比PCR -电泳法 (6 0 /16 0 )高 ,检测时间约是Keller法的 1/10。结论 :该法较敏感。