基于iTRAQ技术的肝细胞生长因子促进乳腺癌细胞侵袭的蛋白质组学研究

目的基于i TRAQ多重标记串联质谱技术系统性筛选乳腺癌患者血清蛋白表达的差异。方法提取血清蛋白,采用i TRAQ标记和ESJ-QTOF-QⅡ质谱检测,搜库和Scqffold软件分析得到各组间血清差异表达蛋白,采用蛋白质印迹法即免疫印迹法(Western Blot)对差异蛋白进行验证。结果 i TRAQ标记图谱显示乳腺癌组与健康对照组之间血清肝细胞生长因子(HGF)表达水平比较差异有统计学意义,Western Blot验证结果证实,乳腺癌患者血清中HGF表达水平同健康对照组比较,明显较高(P<0.05)。结论通过i TRAQ技术系统性筛选乳腺癌患者血清蛋白表达的差异,发现乳腺癌细胞高表达HGF。

应用iTRAQ技术联合PRM验证技术筛选肝硬化患者急性肾损伤的早期预测生物标志物

目的筛选肝硬化并发急性肾损伤(AKI)的早期预测新型生物标志物。方法前瞻性入组肝硬化患者90例,收集患者出现AKI高危因素后第1天尿液,并检测高危因素出现前及出现后第1、2天血肌酐(Scr)水平。应用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选出肝硬化并发AKI患者(AKI组)与未发生AKI患者(对照组)尿液中差异蛋白。根据丰度水平,从差异蛋白中选择靶蛋白作为早期预测肝硬化并发AKI的潜在新型生物标志物,并用平行反应监测(PRM)技术进一步验证其表达情况。结果 11例肝硬化发生AKI。AKI组与对照组在高危因素出现后第1天尿液中共筛选出289个差异蛋白,其中上调蛋白64个,下调蛋白225个。在上调的差异蛋白中,AKI组谷氧还蛋白-1(GRX1)与S100钙结合蛋白A7(S100A7)在高危因素出现后第1天分别升高至对照组的1.76倍及1.51倍,早于Scr变化。PRM技术验证结果显示,AKI组GRX1与S100A7水平分别升高至对照组的2.51及2.17倍。结论尿蛋白GRX1与S100A7可能是肝硬化患者并发AKI的早期预测新型生物标志物。

烟蚜茧蜂脂代谢相关的滞育相关蛋白差异表达分析

利用滞育特性可显著延长烟蚜茧蜂扩繁产品的货架期,探究烟蚜茧蜂滞育相关蛋白的表达特点,可促进对天敌昆虫滞育机理的了解。本文利用以i TRAQ为核心的蛋白定量技术,对提取的烟蚜茧蜂全蛋白进行酶解、标记、质谱检测、查库鉴定及定量分析,并结合生物信息学对烟蚜茧蜂滞育前期和滞育期的差异蛋白进行分析。定量鉴定蛋白1268个,其中滞育组差异表达蛋白601个,上调表达蛋白278个,鉴定肽段物种主要集中在膜翅目,占56.5%;下调表达蛋白323个,鉴定肽段物种主要集中在双翅目,占52.9%。对差异表达倍数分析发现,滞育烟蚜茧蜂有4个上调表达8倍以上的蛋白与脂代谢相关:脂质运载/胞质脂肪酸结合蛋白(gi_322794737)、C型凝集素(gi_607305114)、肽基脯氨酰顺反异构酶(W4X351_ATTCE)、芳基贮存蛋白α亚基(gi_332018934)。i TRAQ技术结合LC-MS/MS作为一种快速准确的定量蛋白质组学研究方法,能有效地分析烟蚜茧蜂滞育相关蛋白;烟蚜茧蜂滞育相关蛋白差异表达较为复杂,可针对上调表达倍数高的蛋白进行后续功能分析,深入开展昆虫滞育机理研究。

人类巨细胞病毒感染的特异性血清蛋白差异表达

目的应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,筛选在人类巨细胞病毒(HCMV)血清差异表达蛋白。方法收集HCMV感染者与正常人的血清各10例,去除高丰度蛋白,iTRAQ试剂标记后采用液相色谱-串联质谱技术鉴定特异性蛋白,并比较蛋白的表达差异。结果共鉴定出362种蛋白质。对比发现有49种血清蛋白的表达差异超过两倍,其中蛋白表达显著上调的有19种,显著下调的有30种;这些差异蛋白中有6种与HCMV感染具有较高的相关性,分别是:脂联素、α-1抗胰蛋白酶、载脂蛋白E、C反应蛋白、结合珠蛋白和血清淀粉样蛋白A1。结论定量的血清蛋白质组学分析,可有效地获得HCMV感染者与正常人的血清蛋白质组差异表达图谱,筛选出与HCMV感染相关的特异性蛋白,为HCMV的早期诊断与治疗提供依据。

差异蛋白质组学在肝纤维化疾病中的应用

差异蛋白质组学作为一种新兴的蛋白质研究技术,逐渐在肝纤维化(HF)疾病的研究中广泛应用。该文主要对差异蛋白组学的理论基础、在肝纤维化疾病的诊治和研究技术上的应用以及目前存在的问题等方面作一简要综述,从而阐明在肝纤维化疾病中差异蛋白组学现阶段的研究现状,旨在为探讨如何更全面完整地研究肝纤维化提供参考。随着科学技术及科研条件的不断完善,差异蛋白组学的多种技术手段应用于肝纤维化疾病将具有更广阔的研究前景和发展空间。

灯盏乙素调节APPswe/PS△E9双转基因小鼠模型脑组织中差异蛋白的作用研究

目的观察灯盏乙素(Scu)对模型小鼠脑组织中差异蛋白表达的影响,为深入研究其治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用机制奠定基础。方法以3月龄背景品系小鼠作为正常对照组,将3月龄APPswe/PS△E9双转基因阳性小鼠随机分为模型组和治疗组,用灌胃方法对治疗组实施给药处理;用Morris水迷宫行为学方法测试小鼠学习记忆能力;用iTRAQ技术进行蛋白质组学分析。结果 Scu改善了模型小鼠下降的学习记忆能力,发现了药物调控的9条通路和12种靶标蛋白。结论有效筛选出药物产生疗效的β淀粉样蛋白毒性相关的差异蛋白,提供了药物防治AD作用靶点上的新信息。