大鼠睾丸前促甲状腺激素释放激素及其受体cDNA的克隆和序列测定

目的 研究促甲状腺激素释放激素 (thyrotrophin- releasing hormone,TRH)及其受体 (TRH recep-tor,TRH- R)在大鼠睾丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用。 方法 以大鼠睾丸组织总 RNA为模板 ,依据大鼠下丘脑中的前 TRH和垂体中的 TRH- R c DNA设计引物 ,进行反转录聚合酶链式反应 (reverse tran-scription- polymerase chain reaction,RT- PCR) ,对特异性片段进行序列测定。 结果 从大鼠睾丸组织中获得了前 TRH和 TRH- R的 c DNA片段 ,其核苷酸序列与大鼠下丘脑中的前 TRH和垂体中的 TRH- R c DNA序列完全一致。 结论 首次用 RT- PCR的方法从大鼠睾丸组织中获得了前 TRH和 TRH- R的 c DNA克隆。

大鼠睾丸发育过程中促甲状腺激素释放激素受体mRNA的表达

为研究促甲状腺激素释放激素受体(TRH-R)在大鼠睾丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用,依据大鼠垂体中的TRH-R cDNA设计引物,采用RT-PCR法从大鼠睾丸组织中获得了TRH-R的cDNA克隆,测序表明其核苷酸序列与大鼠垂体中的TRH-R cDNA序列完全一致。应用非放射性原位杂交(NR-ISH)技术观察TRH-R mRNA在大鼠睾丸中的定位,结果显示杂交信号集中在间质细胞中,生精细胞无杂交信号。利用实时动态定量RT-PCR法观察了TRH-R在不同发育阶段大鼠睾丸中的表达变化,发现在睾丸间质细胞发育的初期阶段(第8天),没有TRH-R的表达,但从第15天起能观察到TRH-R的表达,并且表达量在20天、35天、60天、90天逐渐增加。这些结果表明,大鼠睾丸组织间质细胞能特异性表达TRH-R,并且表达量与发育过程相关。