miR-27a-3p介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用

目的分析miR-27a-3p介导Toll样受体(TLR)4/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用。方法选取80只SD级雄性大鼠,20只作为正常组,其余60只建立大鼠脑出血模型后随机分为模型组、上调组、下调组各20只,做miR-27a-3p转染,鉴定miR-27a-3p转染率、脑组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量、神经功能缺损情况、TLR4/TRIF信号通路蛋白表达情况。结果与模型组相比,上调组miR-27a-3p表达量升高,下调组miR-27a-3p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-27a-3p转染成功。相比于正常组,模型组、上调组、下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,具有统计学差异(P<0.05);相比于模型组,下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,上调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量降低,具有统计学差异(P<0.05);且下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量高于上调组,具有统计学差异(P<0.05)。结论miR-27a-3p可介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经起到保护作用。减少大鼠脑内炎症反应。

敲除TRIF基因对TLR3介导胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨敲除TRIF基因后,激活Toll样受体3(TLR3)对胰岛β细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法首先利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠胰岛素瘤β细胞NIT-1细胞株中敲除TRIF基因,得到敲除TRIF基因细胞株。再以敲除TRIF基因的NIT-1细胞株为研究对象,用DMEM培养基进行细胞培养,当细胞处于增殖期比例达到80%~90%时进行实验分组,分为空白对照组和实验组,实验组予以不同水平(30、60、90μg/mL)的TLR3特异性激动剂病毒聚肌胞(PIC)刺激,刺激干预48 h后再检测细胞增殖、细胞周期与凋亡蛋白表达,以及核转录因子-κB(NF-κB)的mRNA和蛋白表达。结果与空白对照组相比,PIC刺激敲除TRIF基因后的NIT-1细胞株,细胞停留在G_(0)/G_(1)期细胞的比例明显上调,而在S期和G_(2)/M期的细胞比例出现明显下调,差异均有统计学意义(P<0.05);CyclinD1表达在不同水平的PIC刺激下明显下调(P<0.05);细胞因子NF-κB和凋亡蛋白Caspase-3的表达在不同水平的PIC刺激下则明显上调(P<0.05)。结论PIC刺激敲除TRIF基因后的小鼠胰岛β细胞株的TLR3,与刺激正常小鼠胰岛β细胞株一样,仍可以上调细胞因子NF-κB和凋亡蛋白Caspase-3的表达,以及抑制周期蛋白CyclinD1的表达,最终抑制胰岛β细胞增殖。

鼠李糖乳杆菌GR-1介导TRIF/NF-κB信号通路抗大肠杆菌诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤

为探讨鼠李糖乳杆菌GR-1(Lactobacillus rhamnosus GR-1,L.rhamnosus GR-1)对大肠杆菌(Escherichia coli)诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(Bovineendometrialepithelialcells,BEECs)炎性损伤的保护作用及其机制,本研究建立BEECs细胞炎性损伤模型,利用Real-time qPCR和Western blot技术,观察在BAY11-7082或siRNA干预前后,L.rhamnosus GR-1对E.coli触发的信号通路及炎性因子表达的影响。结果显示,L.rhamnosusGR-1可以显著抑制由E.coli引起的NF-κB和TRIF通路的激活及炎性因子的表达,在BAY11-7082干预后,E.coli诱导的NF-κB通路的激活及炎性因子的表达得到了显著的抑制。同样,在添加TRIF siRNA后,E.coli诱导的TRIF mRNA及炎性因子的表达水平也显著下降,产生和L.rhamnosus GR-1一致的抗炎效果。本研究表明L.rhamnosus GR-1可通过介导NF-κB和TRIF通路调节E.coli诱导的BEECs的炎性损伤,为奶牛子宫内膜炎的防治提供有益参考。

艾灸预处理天枢穴对溃疡性结肠炎大鼠结肠TLR4/TRIF信号通路调节作用的研究

目的观察艾灸预处理天枢穴对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠TLR4/TRIF信号通路的影响,探讨艾灸预处理防治UC的作用机制.方法将28只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸预处理组和温和灸预处理组.采用4%葡聚糖硫酸钠水溶液连续饮用7 d制备UC模型.隔药灸预处理组、温和灸预处理组先干预7 d后,模型组、隔药灸预处理组、温和灸预处理组再制备UC模型.采用HE染色法,观察大鼠结肠组织病理学变化;应用免疫组化、免疫印记技术检测大鼠结肠TLR4、TRIF、TRAF6、IRF3、IKK的蛋白表达.结果模型组大鼠结肠黏膜结构损伤较正常组明显加重;隔药灸预处理组和温和灸预处理组,结肠黏膜结构损伤较模型组明显改善.与正常组比较,模型组结肠TLR4、TRIF、TRAF6、IRF3、IKK蛋白表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,隔药灸预处理组、温和灸预处理组结肠TLR4、TRIF、TRAF6、IRF3蛋白表达均显著降低(P<0.05),隔药灸预处理组结肠IKK蛋白表达显著降低(P<0.05).结论艾灸预处理天枢穴能下调UC大鼠结肠TLR4、TRIF、TRAF6、IRF3蛋白表达;下调TLR4/TRIF信号通路相关分子的蛋白表达可能是艾灸预处理防治UC的作用机制之一.

β_2GPI/抗β_2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径

目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用。方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况;进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达。结果:β2GPI/抗β2GPI抗体复合物(100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1 h和2 h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰。TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达。结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用。

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞TLR 4介导的TRIF依赖性途径的影响

探讨中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4信号转导通路下游TRIF依赖性途径主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终质量浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低、对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测TRIF、IRF3、IFN-β基因mRNA的表达。结果显示:(1)与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TRIF、IRF3、IFN-βmRNA的表达量(P<0.05)。(2)中、低剂量中药复方多糖组AA基因型鸡TRIF、IRF3基因mRNA的表达量各个时间段均高于高剂量组,IFN-β在24、32、48h高于高剂量组,高剂量中药复方多糖组BB基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组,低剂量中药复方多糖组中BC基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组。表明中药复方多糖可能与淋巴细胞表面TLR4结合,可以通过下游TRIF依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,并且对促进其信号通路主要元件mRNA的表达的最适cCHMPS剂量有一定的影响。

白藜芦醇在PD小鼠模型中对TLR3/TRIF信号通路及脑内炎症微环境的影响

目的建立1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的小鼠PD模型,探究白藜芦醇(resveratrol,Res)对PD小鼠TLR3/TRIF信号通路及中脑黑质炎症微环境的影响。方法雄性C57/BL6小鼠30只,按照随机数字表法分为对照组、MPTP组和MPTP+Res组,每组各10只。对照组腹腔注射相同体积生理盐水;MPTP组腹腔注射生理盐水新鲜配制的MPTP 30mg/(kg·d),连续7d,结束注射7d后取材;MPTP+Res组:Res用乙醇溶解为50mg/mL,用PBS以1∶4的体积比进行稀释,连续注射MPTP 7d后,腹腔注射Res 28d,结束注射7d后取材。采用免疫组化及免疫荧光分别观察小鼠中脑黑质中多巴胺能神经元的变化及小胶质细胞、星形胶质细胞的活化状态。采用实时荧光定量PCR技术检测中脑黑质相关炎症因子mRNA的表达。结果免疫组化结果显示:与MPTP组相比,MPTP+Res组小鼠中脑黑质TH标记的多巴胺能神经元的数量及形态未发生明显变化;CD11b标记的小胶质细胞胞体相对变小,呈圆形及椭圆形,突起减少,变细、变长;而GFAP标记的星形胶质细胞胞体变小,胞体呈圆形,突起变短。qPCR实验结果表明:与MPTP组相比,MPTP+Res组小鼠中脑黑质部位TLR3、IFN-β的mRNA表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),但TRIF的mRNA表达量未见明显变化,促炎因子iNOS、TNF-α的mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而抗炎因子Arg^(-1)的mRNA表达量明显增加。结论 Res可能通过抑制小胶质细胞及星形胶质细胞活化及激活TLR3/TRIF信号通路,降低中脑黑质的促炎因子的释放,从而改善MPTP诱导的小鼠PD模型中的炎症微环境。

针刺负调控TLR4/TRIF信号通路关键因子对脑出血大鼠炎性反应表达的影响

目的探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠TLR4/TRIF信号通路关键因子Toll样受体4(TLR4)、TRIF(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-βTRIF)、TRAM(TRIF-related Adaptor Molecule,TRAM)、NF-κB(核因子κB)表达的影响。方法将72只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺+模型组(简称针刺组)、TAK242组,每组按1 d、3 d、7 d时间节点分为3个亚组,每组6只。自体血注入法建立脑出血大鼠模型。采用针刺“百会”透“曲鬓”穴干预,Longa评分法对脑出血后大鼠神经功能进行评估;Western-blot法检测血肿组织TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达。结果神经行为学:与模型组比较,针刺组于3 d、7 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.05);TAK242组于3 d、7 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.01);与针刺组比较,TAK242组于3 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.05)。Western-blot结果:针刺组、TAK242组各时间节点TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达水平均显著低于模型组(P<0.01);TAK242组各时间节点TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达水平均显著低于针刺组(P<0.01)。结论针刺可能通过负调控TLR4/TRIF信号通路中TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白的表达,减轻脑出血后炎性损伤,改善大鼠神经功能缺损症状,发挥脑保护作用。

TRIF在Buerger’s病患者腰交感神经节中的表达及其意义

目的观察β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(Toll/IL-1 receptor domain containing adaptor inducing IFN-β,TRIF)在Buerger’s病患者腰交感神经节中的表达,探讨TRIF在Buerger’s病发病中的作用机制。方法收集2012年8月至2013年5月我院行腰交感神经节切除术的Buerger’s病患者手术标本30例为Buerger’s病组,同期肝移植供体者腰交感神经节6例为对照组。应用免疫组化、反转录PCR(RT-PCR)技术及蛋白质印迹(Western blot)技术测定2组腰交感神经节中TRIF的表达水平并且比较组间差异。进一步采用激光共聚焦技术,检测TRIF在Buerger’s病患者神经元中的表达特点。结果 Buerger’s病患者腰交感神经节中TRIF的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01)。并且,在Buerger’s病患者腰交感神经节组织中,TRIF主要分布于神经细胞之中。结论 TRIF与Buerger’s病的发生和发展关系密切;Toll样受体信号通路激活可能是Buerger’s病发病的重要因素。

信号分子TRIF的研究进展

Toll样受体（TLRs）作为连接天然免疫和获得性免疫的桥梁,其介导的信号转导通路及其作用一直是人们研究的焦点。由髓样分化因子88（myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88）承接的转导途径称为MyD88依赖途径,是几乎所有TLRs信号转导的共同通路（TRL3除外）。

TRIF在秋水仙素致小鼠纹状体-黑质轴突退变模型中的作用

目的通过秋水仙素(colchicine,COL)构建小鼠纹状体-黑质轴突退变模型,探究TRIF对纹状体及中脑黑质炎症微环境的影响。方法选取TRIF基因敲除小鼠(TRIF小鼠)为实验组,具有相同遗传背景的C57BL/6小鼠(WT小鼠)为对照组,每组5只。用脑立体定位仪在纹状体部位注射秋水仙素,建立轴突退变模型。分别于建模成功后1、3、7、14d,比较两组动物的行为学改变;采用高效液相色谱(HPLC)检测该模型4个时间点纹状体中神经递质多巴胺(DA)及二羟苯乙酸(DOPAC)含量的变化。结果两组小鼠均出现震颤、肌肉僵直、转圈、运动迟缓等行为,成功构建小鼠纹状体-黑质轴突退变模型。实验组体重和游泳能力方面与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组小鼠建模后的1、7d纹状体神经递质DA及DOPAC含量较对照组低(P<0.05)。结论TRIF小鼠比WT小鼠的纹状体-黑质神经元退变加重,提示TRIF可能具有神经保护作用。

人参皂苷Rb1介导TLR3/TRIF信号通路对哮喘大鼠的抗炎作用机制

目的探讨人参皂苷Rb1介导Toll样受体(TLR)3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路对哮喘大鼠模型抗炎作用的影响。方法80只SD大鼠随机分成5组:对照组、模型组、地塞米松组(1 mg/kg)、人参皂苷Rb1低剂量组(100 mg/kg)、人参皂苷Rb1高剂量组(200 mg/kg),每组16只。模型组、地塞米松组、人参皂苷Rb1低、高剂量组建立哮喘大鼠模型,建模成功后地塞米松组、人参皂苷Rb1低、高剂量组给予相应药物灌胃,对照组及模型组给予等量的生理盐水灌胃,每天1次,连续给药14 d。末次给药后24 h,测定大鼠血液淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、动脉血氧分压(PaO_(2))水平,计算大鼠肺/体比值,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法测定大鼠肺组织中TLR3、TRIF mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠肺/体比值、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞水平、TLR3、TRIF mRNA和蛋白表达水平明显升高,PaO_(2)水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、人参皂苷Rb1低、高剂量组大鼠肺/体比值、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞水平、TLR3、TRIF mRNA和蛋白表达水平降低,PaO_(2)水平升高(P<0.05);且人参皂苷Rb1高剂量组大鼠肺/体比值、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞水平、TLR3、TRIF mRNA和蛋白表达水平低于人参皂苷Rb1低剂量组,PaO_(2)水平高于人参皂苷Rb1低剂量组(P<0.05);与地塞米松组比较,人参皂苷Rb1低剂量组大鼠肺/体比值、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞水平、TLR3、TRIF mRNA和蛋白表达升高,PaO_(2)水平降低(P<0.05);人参皂苷Rb1高剂量组与地塞米松组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参皂苷Rb1能够减轻哮喘模型大鼠肺部炎症反应,其机制可能与人参皂苷Rb1抑制哮喘大鼠肺部TLR3、TRIF mRNA和蛋白表达水平进而抑制TLR3/TRIF信号通路的激活有关。

益气活血复方对内皮细胞TLR4及其下游MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF mRNA表达的影响

目的研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只。以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7d。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用Real ti me PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用。

Toll样受体TRIF信号因子在乳腺癌中的表达与临床关系

目的观察Toll样受体信号TRIF(TIR结构域接头分子,TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β,TRIF)在不同分期乳腺癌中及癌旁组织中的表达,为进一步深入研究先天免疫下游信号因子与乳腺癌发病机制中的关系提出初步依据。方法收集35例乳腺癌患者的一般情况和临床病理特征等资料,应用RT-PCR、Western blot方法检测TRIF在乳腺癌及癌旁组织中的基因和蛋白表达水平。同时应用免疫组化检测TRIF在乳腺癌及癌旁组织结构中的分布,以观察在该组织中的表达特点。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与癌旁组织中相比,乳腺癌组织中TRIF基因和蛋白表达水平具有显著差异(P<0.01);Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期相比,TRIF的表达水平差异也具有显著性,且分期越晚表达越强(P<0.01);癌细胞及炎性细胞、浆细胞、纤维母细胞等在细胞核和细胞浆中均有强烈高表达和分布,不同细胞类型差异性表达TRIF,且与肿瘤的TNM分期、肿瘤大小、淋巴侵袭转移密切相关。结论 TRIF的表达与乳腺肿瘤的增殖和分化密切相关。

固有免疫信号因子TRIF在肝纤维化中的表达

目的初步探讨TOLL样受体下游重要信号因子TRIF与肝纤维化发生发展的病理机制关系。方法以四氯化碳皮下注射+低蛋白高脂饮食+酒精饮料的方法复制大鼠肝纤维化模型。将SD大鼠随机分成正常对照组和模型组,在完成制备模型实验后进行取材。部分实验鼠进行心脏生理盐水和多聚甲醛灌注后,取肝脏组织制备石蜡切片,进行常规HE染色和免疫组化实验;另一部分实验鼠脱颈安乐死后,取新鲜肝组织进行电镜标本的制备和Western Blot实验检测。结果 HE染色结果显示与而正常对照组大鼠相比,模型组大鼠肝小叶结构明显破坏,肝细胞数量明显减少和肝纤维化程度等特点明显;电镜结果也显示,肝纤维化组可见大量胶原纤维沉积现象,胞质可见明显的溶解现象,在狄氏腔内,肝星状细胞的细胞核溶解,血窦内皮细胞胞质、胞核皆溶解;免疫组化模型组大鼠肝组织均显示内皮细胞、星形细胞等TRIF都有强烈高表达,并且以胞核表达为主,亦见胞质表达,而正常组呈现弱阳性表达;与正常对照组相比,模型组大鼠肝组织TRIF蛋白表达都明显升高,呈显著性差异(P<0.01),与形态学的表达特点相一致。结论 TRIF在肝纤维化中表达显著增强,说明在肝纤维化过程中,TOLL样受体明显激活,并且通过下游信号转导途径,在机体内产生一系列的免疫应答反应。通过该现象的观察,我们初步证实了TOLL样受体固有免疫信号因子TRIF在纤维化形成中起着重要的作用。

TLR4对脑缺血再灌注小鼠海马TRIF表达的影响

目的探讨Toll样受体4(TLR4)对脑缺血再灌注小鼠海马TRIF表达的影响。方法采用TLR4抗体封闭阻断TLR4,Western blot和RT-PCR检测海马TLR4蛋白、IFN-β蛋白和TLR4 mRNA表达量,免疫组化方法检测TRIF表达变化。小鼠随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)、TLR4阻断组(T组),各组又分1、2、3及4d4个时间点组。结果缺血再灌注组TLR4蛋白、TLR4 mRNA、IFN-β和TRIF表达水平明显高于假手术组表达水平(P<0.05),而TLR4阻断组TLR4蛋白、TLR4 mRNA、IFN-β和TRIF表达水平明显少于缺血再灌注组(P<0.05)。结论缺血再灌注可激活TLR4,并引起TRIF和IFN-β表达量增加,而采用TLR4抗体封闭阻断TLR4后,TRIF和IFN-β表达量减少。本研究提示,TLR4通过上调TRIF表达参与脑缺血再灌注的反应机制。

薯蓣皂苷元对缺血性脑卒中大鼠神经运动功能及TLR4-MyD88/TRIF信号通路调节作用研究

目的:研究薯蓣皂苷元对缺血性脑卒中大鼠神经运动功能及TLR4-MyD88/TRIF信号通路的调节作用。方法:将大鼠随机分为假手术组、缺血性脑卒中模型组、薯蓣皂苷元低、中、高剂量组及阳性对照组,每组12只。采用四血管阻断法建立缺血性脑卒中大鼠模型,薯蓣皂苷元各剂量组分别灌胃给予12.5 mg/kg、25 mg/kg及50 mg/kg的薯蓣皂苷元,阳性对照组给予大鼠尼莫地平,1次/d,连续21 d。测定给药前后大鼠神经功能缺损评分,使用Morris水迷宫测定大鼠逃避潜伏期及90 s内穿过平台的次数;酶联免疫吸附(ELISA)法测定脑组织Toll样受体(TLR)-2、白介素(IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;苏木精—伊红(HE)染色法测定脑组织病理改变;实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(Western blotting)测定大鼠脑组织TLR4、MyD88、TRIF mRNA及蛋白水平。结果:与缺血性脑卒中模型组比较,薯蓣皂苷元各剂量组及阳性对照组大鼠神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织TLR-2、IL-1β、IL-6及TNF-α水平,脑组织TLR4、MyD88及TRIF mRNA及蛋白水平均明显降低(均P<0.05),90 s内穿越平台次数显著增加(P<0.05),大鼠脑组织病理性变化明显恢复,且各项指标变化与薯蓣皂苷元的剂量表现出依赖性。结论:薯蓣皂苷元能够修复缺血性脑卒中大鼠神经运动功能及神经损伤,抑制脑组织炎症反应,其机制可能与调节TLR4-MyD88/TRIF信号通路有关。

鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因荧光定量PCR检测方法的建立

为对鸡髓样分化因子88(MyD88)、包含TIR结构域的IFN诱导连接蛋白(TRIF)和包含Toll/IL-1的接头蛋白(TIRAP)基因的进行定量检测,本研究参考鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因序列,设计并合成特异性引物,以β-actin为内参基因,建立检测对应基因的实时荧光定量PCR方法。结果表明,4个基因的扩增效率为96.7%～102%,相关系数均在0.997以上;特异性强,扩增产物均形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,可以检测到对应基因达10-13 g/mL;重复性好,变异系数均在1.5%以下。本研究所建立的荧光定量PCR方法可用于鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因表达研究。

Toll样受体4对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达的影响

目的探讨Toll样受体4(TLR4)对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达的影响。方法小鼠随机分为3组,分别为假手术组和缺血再灌注组、TLR4阻断组,各组又分1、2、3、4d4个时间点组。采用TLR4抗体封闭阻断TLR4,Western印迹检测皮质TLR4蛋白、干扰素-β(IFN-β)蛋白表达量,免疫组化方法检测TRIF表达变化。结果缺血再灌注组TLR4蛋白、IFN-β和TRIF表达水平明显高于假手术组表达水平(P<0.05),而TLR4阻断组TLR4蛋白、IFN-β和TRIF表达水平明显少于缺血再灌注组(P<0.05)。结论缺血再灌注可激活TLR4,并引起TRIF和IFN-β表达量增加,而采用TLR4抗体封闭阻断TLR4后,TRIF和IFN-β表达量减少,提示TLR4通过上调TRIF表达参与脑缺血再灌注的反应机制。