TRIM蛋白家族在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展

及时进行血运重建以恢复冠状动脉血流,是急性心肌梗死患者治疗的关键,但血流的突然恢复也会给缺血心肌带来更严重的二次损伤,至今尚未找到治疗心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的有效方法。近年的研究发现,三方基序(TRIM)蛋白家族能够介导氧化应激、细胞凋亡及炎症等生物过程,同时还具有调节缺血性处理与促进膜修复的心脏保护功能,在MIRI中起着不可忽视的作用。现就TRIM蛋白家族对MIRI的作用及所涉及的分子调控机制进行综述。

TRIM蛋白家族调节NF-κB信号通路的研究进展

核因子-κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）作为重要的核转录因子参与调节机体的免疫应答,一旦其调节发生异常将会导致免疫疾病、神经退行性病变、新陈代谢疾病、肿瘤等。磷酸化、泛素化等转录后修饰可调节NF-κB信号通路。E3泛素连接酶在泛素化的过程中起重要作用。TRIM（Tripartite motif）蛋白是E3泛素连接酶中RING家族成员,

TRIM蛋白参与天然免疫信号转导的研究进展

天然免疫系统是宿主抵抗病原微生物感染的第一道防线。天然免疫对病原微生物最直接的杀灭和清除作用是通过天然免疫分子和吞噬细胞实现的[1]。病原微生物所特有的能够被天然免疫细胞识别的靶分子称为病原相关分子模式（Pathogen associated molecular patterns,PAMPs）,宿主细胞通过模式识别受体（Pattern recognition receptors,

TRIM家族蛋白结构和功能研究进展

三重基序(tripartite motif-containing,TRIM)蛋白具有典型的RBCC(RING、B-box、Coiledcoil)结构域和多变的羧基端结构域,而羧基端结构域可以介导对底物蛋白的识别。TRIM蛋白具有诸多生物学功能,如细胞生长发育、凋亡、分化、泛素化、自噬、先天免疫、信号转导、抗病毒、致癌等。TRIM蛋白是含有RING泛素连接酶的最大亚家族之一,由于其典型结构和诸多功能近年来受到愈来愈多的重视。文章综述了TRIM蛋白的结构和功能特征方面的研究进展,揭示了不同类型TRIM蛋白的相似性和特异性,以期为疾病诊治和药物开发提供指导。

TRIM家族蛋白在肿瘤中的研究进展

近年来,三结构域(tripartite motif,TRIM)家族蛋白逐渐成为国内外肿瘤研究领域的热门研究方向。该家族蛋白可调控肿瘤细胞的增殖、转移、凋亡和自噬等多种生物学行为,介导泛素化、染色体异位和转录、p53信号通路和NF-κB信号通路等分子调控机制。本文对TRIM家族蛋白在肿瘤发生发展过程中发挥的功能和参与的分子调控机制进行总结,并对TRIM家族蛋白的研究前景进行展望。

下调三结构域蛋白59(TRIM59)阻断NF-κB信号通路抑制人鼻咽癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨三结构域蛋白59(TRIM59)能否通过调控核因子κB(NF-κB)信号通路影响鼻咽癌细胞生物学行为。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库预测TRIM59在鼻咽癌和癌旁组织的表达情况;反转录PCR和Western blot法分别检测鼻咽癌和癌旁组织中TRIM59 mRNA和蛋白相对表达量;以人正常鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)为对照,采用反转录PCR和Western blot法分别检测HNE1和CNE-2Z鼻咽癌细胞TRIM59 mRNA和蛋白相对表达量;采用小干涉RNA技术下调HNE1细胞TRIM59水平,设置对照组、小干涉RNA阴性对照(si-NC)组、TRIM59小干涉RNA(si-TRIM59)组。噻唑蓝(MTT)法检测各转染组细胞增殖抑制率,TranswellTM小室检测各转染组细胞侵袭和迁移能力,Western blot法检测NF-κB、磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)、波形蛋白(vimentin)、存活蛋白(survivin)的蛋白表达,ELISA法检测培养细胞上清液白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果TRIM59在鼻咽癌组织表达异常增高;与HNEpC细胞相比,TRIM59在HNE1相对表达量显著增加;下调HNE1细胞中TRIM59表达后,显著抑制细胞存活以及细胞的侵袭和迁移;下调TRIM59表达后,HNE1细胞NF-κB、vimentin、survivin mRNA以及p-NF-κB、vimentin、survivin蛋白表达均受到抑制,IL-6、IL-8、TNF-α含量显著降低。结论下调TRIM59能够抑制HNE1细胞NF-κB信号通路和肿瘤炎症相关因子进而抑制细胞侵袭和迁移。

TRIM44蛋白表达与胃癌预后关系的研究

目的探讨TRIM44蛋白在胃癌组织中的表达情况以及其对胃癌发生、发展的影响。方法入组60例确诊并接受根治术的胃癌患者,用免疫组化方法检测60例胃癌组织中TRIM44蛋白的表达情况。结果TRIM44蛋白在胃癌组织中高表达,表达率为28.3%(17/60),且其表达与2~3个区域淋巴结侵犯、高复发率密切有关(P<0.05);TRIM44蛋白高表达组的预后较低表达组差(P<0.05)。结论 TRIM44蛋白在胃癌组织中高表达与肿瘤的淋巴侵犯以及高复发率有关,且TRIM44蛋白高表达的胃癌患者总生存更差。

TRIM家族在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是女性最常见的妇科恶性肿瘤之一,其病死率居妇科恶性肿瘤之首。尽管目前的治疗策略取得了进展,但是卵巢癌的复发、转移与耐药仍然严重威胁全球女性患者的健康。因此,探究卵巢癌的发病机制,挖掘治疗与转移相关分子的潜在靶标迫在眉睫。TRIM家族作为E3泛素连接酶家族的成员之一,通过介导自身或者靶蛋白发生泛素化,活化或抑制多信号通路,靶向调控相应的目的基因,影响卵巢癌细胞的增殖、侵袭转移以及对化疗药物的耐药性,从而参与卵巢癌的发生、发展全过程。本文围绕目前TRIM家族中与卵巢癌作用最为密切的蛋白展开综述,为卵巢癌诊断和治疗提供新的思路。

TRIM22蛋白与A型流感病毒复制的相互关系研究

目的:研究TRIM22蛋白对A型流感病毒复制能力的影响。方法:RT-PCR扩增人TRIM22全长编码序列并制备TRIM22真核表达质粒;通过绘制病毒生长曲线及直接做空斑的方法检测外源性表达TRIM22情况下,两种不同流感病毒株PR8(H1N1)和A/ST/364/2005(H3N2)在MDCK细胞中的复制能力。结果:成功构建TRIM22真核表达质粒;两种不同亚型流感病毒在过表达TRIM22的情况下,其在MDCK细胞中的生长曲线及空斑大小与阴性对照组相似。结论:TRIM22不能有效抑制不同亚型A型流感病毒的复制。

非小细胞肺癌中TRIM25和PKM2蛋白表达

目的检测临床非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)病人组织中TRIM25、PKM2蛋白的表达情况,探讨它们的关联性及意义。方法应用组织免疫荧光法,检测TRIM25、PKM2蛋白在60例NSCLC组织和20例癌旁边正常肺组织(>5 cm)表达情况,同时运用Western blotting方法检测TRIM25、PKM2在10例新鲜NSCLC组织中表达情况,并结合标本的临床病理特征进行分析。结果 TRIM25在60例非小细胞肺癌组织中的阳性表达率45%,而20例癌旁正常肺组织中仅为10%(P=0.005)。TRIM25在腺癌中阳性表达率为28.6%,而在鳞癌中为59.4%(P=0.017)。TRIM25被发现与TNM分期、淋巴结转移之间呈正相关性(P<0.05)。PKM2在60例非小细胞肺癌组织中表达率为73.3%,而在20例癌旁正常肺组织中为30%(P=0.001)。PKM2在腺癌的表达为57.1%,而在鳞癌中为87.5%(P=0.008)。通过关联性分析TRIM25和PKM2存在相关性(P=0.026)。Western blot结果表明当TRIM25表达升高时PKM2表达增长放缓。结论 TRIM25、PKM2蛋白可能同时参与到NSCLC发生发展过程中,存在负相关性。

TRIM72蛋白与心衰患者的心肌重塑、病因以及预后关系的临床观察

目的观察TRIM72蛋白在心力衰竭患者血液中的表达情况(平均值以及TRIM72高表达和低表达情况),分析其与心肌重塑、心衰致病因以及与心力衰竭预后的关系。方法收集2018~2019年在巴彦淖尔市就诊的共43例临床诊断为心功能Ⅲ~Ⅳ级(纽约分级)的患者,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定心衰纠正前后两次的外周血TRIM72水平,并收集相关临床化验结果如肝肾功、血脂、离子等及心彩超结果。以有无心肌重塑分为重塑组(37例)与正常组(6例);以不同病因分为心肌疾病组(21例)、心肌负荷异常组(15例)及心律失常组(7例);以不同预后(观察期内是否出现心衰复发)分为复发组(15例)与观察组(28例)。对比所有人心衰纠正前后两次TRIM72的表达情况以及分别对比3种不同分组组间的TRIM72的表达情况是否存在差异。结果所有患者的心衰纠正前和后的TRIM72平均值未见明显差异(P>0.05);重塑组与正常组两次TRIM72的表达情况均未见明显差异(P>0.05);不同病因组两次TRIM72的表达情况均未见明显差异(P>0.05),复发组与观察组的两次TRIM72的表达情况的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRIM72蛋白可能与心衰预后相关。

TRIM19泛素化IGF2BP3对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨三方基序蛋白(TRIM)19对胰岛样生长因子-2 mRNA结合蛋白(IGF2BP)3的影响及对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、过表达TRIM19组(转染TRIM19)、敲减TRIM19组(转染TRIM19-inhibitor),通过Western印迹对IGF2BP3的表达进行检测,通过免疫共沉淀对TRIM19的泛素化情况进行检测,以确定TRIM19与IGF2BP3之间的相互关系,以噻唑蓝(MTT)实验对细胞的增殖情况进行检测,Transwell对VSMC细胞的迁移情况进行测定。结果与对照组及敲减TRIM19组相比,过表达TRIM19组的细胞活力、迁移能力显著下降(P<0.05),内源IGF2BP3的表达量显著减少(P<0.05),与对照组相比,敲减TRIM19组的细胞活力、迁移能力显著上升(P<0.05)。TRIM19与IGF2BP3之间存在一定的相互作用,过表达TRIM19可增加IGF2BP3的泛素化程度。结论TRIM19可增加IGF2BP3的泛素化程度,从而抑制卵巢癌细胞的增殖及迁移。

三结构域包含蛋白29对鼻咽癌细胞生长和迁移的影响

目的研究三结构域包含蛋白(TRIM 29)、死骨片蛋白-1(SQSTM 1)、根蛋白(RDX)基因在不同转移潜能鼻咽癌细胞系中的表达水平,了解其与鼻咽癌细胞侵袭转移的关系,揭示TRIM 29在鼻咽癌细胞侵袭转移中的作用。方法 1采用q RT-PCR(quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction)和蛋白印迹法(Western blot)检测高转移潜能鼻咽癌细胞系5-8F和低转移潜能鼻咽癌细胞系6-10B中TRIM 29、SQSTM 1、RDX基因的m RNA和蛋白表达水平;2脂质体转染法将TRIM 29特异性si RNA载体和空白载体转染5-8F细胞,建立稳定转染细胞系;3采用Western blot检测细胞中TRIM 29蛋白表达水平的变化,MTT法检测细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测细胞周期分布的变化,划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果 15-8F细胞中TRIM 29、SQSTM 1的表达水平明显高于6-10B细胞,而RDX的表达水平低于6-10B细胞;2建立了TRIM 29低表达的5-8F细胞系及其空白载体稳定转染细胞系;3与空白载体转染的5-8F细胞和未转染5-8F细胞比较,特异性si RNA转染的TRIM 29低表达5-8F细胞的增殖能力降低,G0/G1细胞增加,而S期细胞减少,细胞迁移能力降低。结论 1si RNA干扰TRIM 29表达抑制鼻咽癌5-8F细胞的生长和迁移;2TRIM 29、SQSTM 1与鼻咽癌转移密切相关,有望成为预警鼻咽癌转移的分子标志物,但RDX与鼻咽癌转移关系不确定。

受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)调控人结肠癌HT-29细胞程序性坏死的分子机制

目的研究受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting protein kinase 1,RIPK1)在人结肠HT-29细胞程序性坏死过程中的作用,并探讨E3泛素连接酶三重结构域包含蛋白16(tripartite domain containing protein 16,Trim16)对其作用的潜在调控机制。方法用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)建立HT-29细胞的程序性坏死模型,采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测其对凋亡、坏死细胞数目的影响。分别用Western blot和qRT-PCR检测RIPK1在细胞程序性坏死中的表达。构建稳定表达Flag标记的RIPK1的HT-29细胞株,采用Flag标记的pulldown试验结合质谱检测发现与RIPK1有相互作用的新蛋白。应用NiNTA pulldown试验检测筛选出的E3泛素连接酶对RIPK1泛素化的调控。结果 TNFα能够成功诱导HT-29细胞程序性坏死。HT-29细胞在TNFα和半胱天蛋白酶抑制剂z-VAD处理后,表现出RIPK1、RIPK3、混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)表达水平显著增加,并伴随着炎性因子白介素1α(IL1α)和白介素6(IL6)水平明显升高。Flag标记的pulldown试验结合质谱检测发现一个与RIPK1有相互作用的E3泛素连接酶Trim16,体外实验表明Trim16可以增强RIPK1的泛素化程度,其可能调节RIPK1在程序性坏死过程中的作用。结论 RIPK1在TNFα和z-VAD诱导人结肠癌HT-29细胞的程序性坏死过程中起重要作用,E3泛素连接酶Trim16对此过程可能有重要调控作用。

沉默TRIM27基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的:检测TRIM27蛋白在鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中的表达水平,观察沉默TRIM27对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:通过免疫组化技术检测鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中TRIM27的表达水平,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot法分别检测5-8F细胞和NP69细胞中TRIM27的mRNA和蛋白表达水平;利用脂质体2000将TRIM27干扰序列转入5-8F细胞中;采用real-time PCR检测转染后细胞中TRIM27 mRNA表达水平的变化,Western blot法检测转染后细胞中TRIM27蛋白水平的变化;CCK-8法检测细胞活力的变化;细胞平板集落形成实验观察转染后细胞增殖能力的变化;Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果:免疫组化结果显示TRIM27在鼻咽癌组织中的表达率高于鼻咽部正常组织;TRIM27基因沉默后5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显受到抑制(P<0.05)。结论:TRIM27在鼻咽癌5-8F细胞中可能充当癌基因的角色。沉默TRIM27基因可以明显抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

三重基序蛋白家族与心血管疾病相关性的研究进展

心血管疾病是影响人类生命和健康的重要疾病。不同的蛋白家族在心血管疾病发生发展中起促进或抑制作用,对心脏和血管起损伤或保护作用。其中三重基序蛋白(TRIM)是由三个稳定结构域构成的蛋白家族,具有蛋白泛素化、先天免疫等作用。该研究对TRIM家族与心血管疾病相关关系的研究进展简要概述。

沉默TRIM29对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)靶向三联基序蛋白29(TRIM29)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测骨肉瘤细胞株(MG63和U2OS)的TRIM29水平,采用脂质体法将两条靶向TRIM29的siRNA片段(si TRIM29-1和si TRIM29-2)高效转染至MG63和U2OS细胞,经QPCR法检测后选取抑制效率最高的siRNA进行后续实验,并设转染si Control的MG63和U2OS细胞为对照;分别采用MTT、流式细胞术及Transwell法检测转染后MG63和U2OS细胞的增殖、凋亡及侵袭情况。结果 QPCR检测结果显示MG63和U2OS细胞的TRIM29 mRNA水平较正常成骨细胞株h FOB1.19均升高(P<0.05);MG63和U2OS细胞转染si TRIM29-1和si TRIM29-2片段72 h后的TRIM29 mRNA水平均低于转染si Control的细胞,差异均有统计学意义(P<0.05),同时选取沉默率较高的si TRIM29-1进行后续实验;与转染siControl的MG63和U2OS细胞相比,两种细胞转染si TRIM29-1后的存活率及穿膜细胞数目减少,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论骨肉瘤细胞中TRIM29高表达,且靶向沉默TRIM29可抑制骨肉瘤细胞增殖及侵袭并诱导细胞凋亡,对骨肉瘤靶向治疗有一定参考价值。

三结构域家族蛋白在子宫内膜癌中的研究进展

子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)是一种常见的妇科恶性肿瘤,其发病率及病死率近年来呈升高趋势,探究EC精准诊断的分子标志物及治疗靶点尤为重要。三结构域(tripartite motif,TRIM)家族蛋白近年来成为恶性肿瘤分子机制的研究热点,被证实与多种恶性肿瘤的发生、发展联系密切。本篇综述将讨论TRIM家族蛋白及其与EC发生、发展的关系,以期为EC的诊断及发现新的肿瘤治疗靶点提供理论依据。

长链非编码RNA波形蛋白反义RNA1(VIM-AS1)促进C4-2去势抵抗性前列腺癌细胞增殖与侵袭

目的评估长链非编码RNA波形蛋白反义RNA1(VIM-AS1)在前列腺癌组织中的表达及临床相关性,探索其对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)C4-2细胞增殖和侵袭能力的影响及潜在机制。方法利用生物信息学数据库分析VIM-AS1在前列腺癌组织中的表达水平及其与TNM分期、生存周期的相关性;应用反义寡核苷酸(ASO)沉默C4-2细胞中VIM-AS1的表达,5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶(EdU)实验检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化,CCK-8法检测比卡鲁胺杀伤敏感性的变化,Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭和迁移以及细胞数目的变化,划痕实验检测迁移距离的变化。生物信息学分析VIM-AS1与含三联基元蛋白24(TRIM24)表达的相关性,实时定量PCR和Western blot法分别检测VIM-AS1对TRIM24 mRNA和蛋白表达的影响。结果前列腺癌组织VIM-AS1表达上调,并与患者TNM分期正相关,与总体生存率呈负相关。敲低VIM-AS1表达后,C4-2细胞增殖能力、S期细胞比例、侵袭细胞数和迁移距离、迁移细胞数降低,而比卡鲁胺杀伤敏感性、凋亡细胞百分比和G2期细胞比例升高。TRIM24与VIM-AS1表达正相关,沉默VIM-AS1将导致TRIM24表达下调。结论VIM-AS1在CRPC组织中上调,可能通过上调TRIM24表达促进C4-2细胞增殖与侵袭。

三重基序-44蛋白联合超声检查预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移研究

目的:探讨三重基序-44(TRIM44)蛋白联合超声检查对乳头状甲状腺癌(PTC)中淋巴结转移(LNM)促进癌细胞的迁移和侵袭的鉴别诊断价值,评估TRIM44蛋白在PTC细胞中的生物学功能。方法:选择在医院就诊且行甲状腺手术的72例PTC患者,将发生LNM的患者纳入LNM组(37例),未发生LNM的患者纳入非LNM组(35例)。应用免疫组织化学方法检测PTC样本中TRIM44蛋白的表达。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析TRIM44蛋白联合超声检查PTC患者LNM的诊断效能。另采用甲状腺癌细胞(KTC-1)通过小干扰RNA(siRNA)技术来敲低TRIM44蛋白表达。KTC-1细胞分为阴性对照(si-NC)组及针对TRIM44蛋白的小干扰RNA组(si-TRIM44),用Lipofectamine2000转染试剂进行转染,将si-NC和si-TRIM44分别转染入相应组中,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)计算细胞的存活率,采用流式细胞术分析细胞周期和Transwell侵袭实验法进行KTC-1细胞迁移和侵袭测定。采用单因素回归分析PTC患者LNM的诊断因素。结果:LNM组TRIM44蛋白高表达率(83.8%,31/37)与非LNM组(17.1%,6/35)相比,显著增加(χ^(2)=10.930,P<0.05)。LNM组和非LNM组的TRIM44蛋白染色评分分别为(5.50±3.26)分和(2.43±1.64)分,差异有统计学意义(t=4.012,P<0.05)。单因素Logistic回归分析中,TRIM44蛋白高表达是PTC患者LNM的一个独立的诊断因素(OR=1.042,P<0.001)。超声联合TRIM44蛋白对LNM的诊断价值最高,ROC曲线下面积(AUC)为0.874,95%CI为0.671~0.907,灵敏度为91.89%,特异度为82.85%,准确率为87.50%。TRIM44的小干扰RNA(si-TRIM44)表达下调与阴性空白对照(si-NC)相比,显著降低了KTC-1细胞增值能力以及迁移和侵袭细胞的数量,差异有统计学意义(t=1.561,t=0.447,t=0.896;P<0.05)。在细胞周期分析中si-TRIM44的G1期的细胞比例高于si-NC,而S和G2/M期则较低,差异有统计学意义(t=0.994,t=2.339,t=1.774;P<0.05)。结论:当超声联合检测TRIM44蛋白时,超声检查对区分有无LNM的PTC的诊断价值极大提高。TRIM44蛋白可促进PTC的迁移和侵袭,是有价值的辅助诊断生物标志物,并可联合超声检查用于预测PTC中的LNM。