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新型免疫分子TRIM23参与斑马鱼抗嗜水气单胞菌免疫应答
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作者 伍冰倩 刘妮妮 +5 位作者 杨鑫豪 张靓 周泽建 张红 匡奕敩 赵珩 《江苏农业科学》 2019年第4期153-156,共4页
为获得纯化的斑马鱼TRIM23(tripartite motif 23)重组蛋白并研究其免疫功能,试验采用逆转录PCR(RT-PCR)技术扩增TRIM23全长序列,将其与原核表达载体pGEX-4T-1连接并转化至E.coli Rosetta感受态细胞,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达... 为获得纯化的斑马鱼TRIM23(tripartite motif 23)重组蛋白并研究其免疫功能,试验采用逆转录PCR(RT-PCR)技术扩增TRIM23全长序列,将其与原核表达载体pGEX-4T-1连接并转化至E.coli Rosetta感受态细胞,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用谷胱甘肽巯基转移酶(GST)蛋白纯化介质纯化目的蛋白后,将其与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)孵育,检测抑菌活性。结果显示,重组表达载体pGEX-TRIM23在宿主菌Rosetta中表达出约91 ku的重组蛋白,且蛋白部分以可溶形式存在于上清中,经体外抑菌试验检测发现,TRIM23蛋白能够抑制嗜水气单胞菌的增殖。基于以上研究,推测TRIM23在斑马鱼抗细菌免疫应答过程中发挥作用。 展开更多
关键词 新型免疫分子 trim23 斑马鱼 原核表达 嗜水气单胞菌
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沉默TRIM23基因抑制骨肉瘤细胞的增殖 被引量:1
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作者 付恂 周园 +2 位作者 潘俊南 王一维 柳椰 《解剖科学进展》 CAS 2021年第1期50-52,共3页
目的探讨TRIM23基因对骨肉瘤细胞增殖能力的影响。方法应用Western blot实验检测TRIM23基因在骨肉瘤细胞中的表达;应用shRNA质粒转染骨肉瘤细胞系U2OS,通过MTT与平板克隆形成实验评估细胞增殖能力;应用Western blot实验检测U2OS细胞Akt/... 目的探讨TRIM23基因对骨肉瘤细胞增殖能力的影响。方法应用Western blot实验检测TRIM23基因在骨肉瘤细胞中的表达;应用shRNA质粒转染骨肉瘤细胞系U2OS,通过MTT与平板克隆形成实验评估细胞增殖能力;应用Western blot实验检测U2OS细胞Akt/P53/P21通路的表达改变。结果 TRIM23蛋白在骨肉瘤细胞中的表达高于成骨细胞;沉默TRIM23基因可以抑制骨肉瘤细胞的增殖能力;沉默TRIM23基因下调p-Akt表达,但总Akt的表达无明显改变,上调P53与P21的表达。结论 TRIM23在骨肉瘤细胞中表达升高,TRIM23能通过调节Akt/P53/P21通路影响骨肉瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 trim23 细胞增殖 AKT P53 P21
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Circ_0072088靶向miR⁃377促进肝癌细胞进展的机制研究
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作者 叶冬宁 李汶静 +5 位作者 刘丹 谢凯 刘素连 李凡滢 陈杰 许静 《热带医学杂志》 CAS 2024年第7期926-931,F0003,共7页
目的研究环状RNA 0072088(circ_0072088)在肝癌细胞及异种移植瘤模型中的生物学功能,并探讨其参与调控肝细胞癌(HCC)发生进展的关键机制。方法培养人正常肝细胞(THLE⁃2)和HCC细胞系(Huh⁃7、Hep G2、Hep 3B),采用RT⁃qPCR方法检测circ_007... 目的研究环状RNA 0072088(circ_0072088)在肝癌细胞及异种移植瘤模型中的生物学功能,并探讨其参与调控肝细胞癌(HCC)发生进展的关键机制。方法培养人正常肝细胞(THLE⁃2)和HCC细胞系(Huh⁃7、Hep G2、Hep 3B),采用RT⁃qPCR方法检测circ_0072088、miR⁃377和含三方基序23基因(TRIM23)mRNA表达水平;Western blot检测TRIM23蛋白表达水平。取Hep G2细胞分为sh⁃NC组、sh⁃circ_0072088组、mimic NC组、miR⁃377 mimic组,Huh⁃7细胞分为mimic NC组、miR⁃377 mimic组和circ_0072088+miR⁃377 mimic组。分别采用CCK8法、克隆形成试验测定各组细胞的增殖能力变化情况;Transwell实验检测迁移能力变化情况;根据circ_0072088与miR⁃377的结合位点设计并合成了circ_0072088⁃WT和circ_0072088⁃MT双荧光素酶报告质粒,并分别与miR⁃377 mimic或mimic NC共转染Hep G2细胞后使用双荧光素酶报告试剂盒测量荧光素酶活性;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)测定Ago2或IgG RIP复合物中circ_0072088和miR⁃377的富集水平。在异种移植瘤裸鼠模型中探讨circ_0072088的体内功能。结果circ_0072088在HCC中较瘤旁组织表达上调。与THLE⁃2细胞比较,HCC细胞系(Huh⁃7、Hep G2、Hep 3B)circ_0072088的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(t=13.77、30.11、33.27,P均<0.001)。与sh⁃NC组比较,Hep G2转染sh⁃circ_0072088后细胞中circ_0072088 mRNA表达降低,差异有统计学意义(t=23.31,P均<0.001),细胞增殖活力(48、72 h)、克隆形成能力和迁移能力降低,差异均有统计学意义(t=11.78、8.42、12.64,P均<0.01),TRIM23蛋白表达水平明显降低。RIP检测结果显示,相对于lgG,circ_0072088(t=60.59)和miR⁃377(t=35.68)在Ago2免疫沉淀中富集,差异均有统计学意义(P均<0.001)。双荧光素酶检测结果显示,与转染mimic⁃NC组比较,转染miR⁃377 mimic组含有circ_0072088⁃WT质粒细胞的荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(t=21.88,P<0.001)。RT⁃qPCR及Western blot结果显示,与mimic NC组相比,miR⁃377 mimic组中TRIM23 mRNA(t=8.45,P<0.001)和蛋白表达水平明显降低。在异种移植瘤裸鼠模型中,与sh⁃NC组相比,sh⁃circ_0072088组移植的肿瘤体积减小,肿瘤组织中circ_0072088和TRIM23 mRNA表达降低,而miR⁃377 mRNA表达升高,差异有统计学意义(t=8.63、5.56、5.52、11.97,P均<0.001),TRIM23的蛋白水平下降。结论circ_0072088通过结合miR⁃377,间接上调TRIM23的表达,从而促进HCC细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 肝细胞癌 环状RNA 0072088 微小RNA⁃377 trim23
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三基序蛋白23在树突状细胞分化成熟中的调控作用 被引量:2
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作者 丁骏 段雪含 +5 位作者 谢叶文 潘洁 夏蕾 宁永玲 何树燕 戚春建 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期285-293,共9页
目的探讨三基序蛋白23(tripartite motif-containing 23, Trim23)对树突状细胞分化成熟的影响及相关作用机制。方法采用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt3L)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derive... 目的探讨三基序蛋白23(tripartite motif-containing 23, Trim23)对树突状细胞分化成熟的影响及相关作用机制。方法采用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt3L)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs), 经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激发后, 荧光定量PCR及Western blot检测BMDCs中Trim23的表达。构建Trim23过表达载体并转染BMDCs, pcDNA3.1空载体作为对照组。经LPS激发后, 流式细胞术检测BMDCs表面分子CD80、CD86、CD40以及MHCⅡ的表达, ELISA检测培养上清中细胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量;磁珠分选出OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠脾脏和淋巴结中的CD8^(+)和CD4^(+)T细胞, 加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin, OVA), 与LPS激发的BMDCs共培养。流式细胞术检测不同转染组BMDCs诱导CD8^(+)或CD4^(+)T细胞增殖分化的方向。Western blot检测BMDCs内p38、ERK1/2、AKT蛋白的磷酸化水平。构建缺失RING结构域或ARF结构域的两个Trim23短截体(Trim23 ΔRING和Trim23 ΔARF), 将Trim23、Trim23 ΔRING、Trim23 ΔARF载体分别转染BMDCs, 经LPS激发后, 流式细胞术及ELISA检测BMDCs表面分子及细胞因子的表达水平。结果经LPS激发后, BMDCs中Trim23表达水平显著下调;过表达Trim23后, 其表面分子MHCⅡ、CD86、CD80的表达及细胞因子TNF-α、IL-6的分泌均显著下降;与T细胞共培养结果显示, 过表达Trim23可显著抑制BMDCs诱导CD4^(+)T细胞增殖分化以及诱导CD8^(+)T细胞增殖的能力;Western blot结果显示, 过表达Trim23的BMDCs中p38和ERK1/2的磷酸化水平明显降低。与Trim23组比较, RING结构域的缺失显著逆转了过表达Trim23对LPS诱导的BMDCs表面分子MHCⅡ、CD86及细胞因子TNF-α、IL-6表达水平的抑制作用。结论过表达Trim23能够抑制BMDCs的分化成熟及免疫活化功能, 其作用机制可能依赖于MAPK信号通路及Trim23的RING功能域, 本研究将为靶向Trim23提高肿瘤树突状细胞疫苗的免疫应答效应提供实验参考。 展开更多
关键词 树突状细胞 trim23 功能域 免疫功能
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