组蛋白去甲基化酶KDM5A通过LncRNA TRIM52-AS1调控急性髓系白血病的发生和发展

目的初步探索组蛋白去甲基化酶赖氨酸特异性去甲基化酶5(KDM5A)通过长链非编码RNA(LncRNA)TRIM52-AS1调控急性髓系白血病(AML)发生、发展的机制。方法通过逆转录定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测白血病患者血清和各种白血病细胞中的KDM5A、TRIM52-AS1的表达。采用双荧光素酶报告实验检测KDM5A和TRIM52-AS1的靶向关系。通过CCK8实验检测KDM5A和TRIM52-AS1对HL-60细胞增殖的影响。通过Transwell实验检测KDM5A和TRIM52-AS1对HL-60细胞迁移的影响。结果KDM5A在白血病患者血清和各种白血病细胞中高表达,TRIM52-AS1在白血病患者血清和各种白血病细胞中低表达(P<0.05)。KDM5A可以靶向抑制TRIM52-AS1。过表达TRIM52-AS1可以抑制白血病细胞的增殖和迁移,KDM5A可以通过抑制TRIM52-AS1进而抑制白血病细胞的增殖和迁移(P<0.05)。结论组蛋白去甲基化酶KDM5A可通过抑制LncRNA TRIM52-AS1进而抑制AML的发生、发展。

miR-562下调LncRNA-TRIM52-AS1抑制肝癌细胞恶性增殖

目的 筛选肝细胞癌(HCC)中有临床意义的潜在药物靶点并研究此靶点在HCC发生发展中的功能和潜在分子机制。方法 通过临床数据库GEPIA找到在HCC中高表达的基因(肿瘤组织/正常组织>2)并将其进行分类,将其中的LncRNA按表达差异倍数进行排序并根据高表达预后差原则筛选到目的靶基因;通过30组临床样本研究目的LncRNA在HCC及其邻近正常组织中的表达特征;通过siRNA介导敲低目的LncRNA的表达,利用细胞增殖实验、克隆形成实验和划痕迁移实验验证目的基因在HCC发生发展中的重要性;分析与目的LncRNA共结合的microRNA,验证其相互调控关系;研究共结合的microRNA在HCC中的表达特征,并通过细胞增殖实验验证其功能;最后通过细胞增殖实验验证microRNA对目的LncRNA的调控作用,从而得到目的LncRNA在HCC中发挥功能的方式。结果 TRIM52-AS1在HCC中显著高表达,且高表达患者预后不良,TRIM52-AS1在30组HCC临床组织中较正常组织显著高表达(P<0.05);敲低TRIM52-AS1抑制HCC细胞的生长增殖、克隆形成及迁移(P<0.05);miR-562与TRIM52-AS1结合并负向调控其表达(P<0.05);miR-562在HCC中显著低表达,且低表达患者预后不良,敲低miR-562表达后HCC细胞增殖速率显著加快(P<0.05);在敲低miR-562的HCC细胞中共转染敲低TRIM52-AS1表达后,显著促进细胞增殖速率回归正常水平。结论 TRIM52-AS1高表达是由miR-562的低表达所致,从而促进HCC细胞生长加快,参与HCC发展进程。

lncRNA TRIM52-AS1在非小细胞肺腺癌组织中的表达及其增殖抑制作用

目的探讨lncRNA TRIM52-AS1在非小细胞肺腺癌组织中的表达及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR和WST-1等方法检测lncRNA TRIM52-AS1在肺腺癌组织与癌旁组织以及肺腺癌细胞株与正常支气管细胞株中的表达差异。在体外肺腺癌细胞中过表达lncRNA TRIM52-AS1,WST-1法及克隆形成实验检测其对细胞生长的影响。结果lncRNA TRIM52-AS1在肺腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.01);lncRNA TRIM52-AS1高表达患者的总生存期(OS)显著长于低表达患者(P<0.05);lncRNA TRIM52-AS1在肺腺癌细胞株中的表达水平显著低于正常支气管细胞株(P<0.05);过表达lncRNA TRIM52-AS1可抑制肺腺癌细胞的增殖与克隆能力(P<0.05)。结论lncRNA TRIM52-AS1具有抑制肺腺癌细胞生长的作用,可能作为治疗肺腺癌的潜在靶点之一。

TRIM52-AS1通过调控miR-28-5p减轻缺氧/复氧诱导的大鼠脑皮层神经元损伤

目的探讨TRIM52反义RNA1(TRIM52-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠脑皮层神经元损伤的影响及其可能机制。方法(1)将体外培养的大鼠皮层神经元分为对照组和模型组,模型组制备H/R诱导的细胞损伤模型,采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测2组神经元TRIM52-AS1、微小RNA(miR)-28-5p的表达。(2)将皮层神经元分为对照组、模型组、TRIM52-AS1小干扰RNA(si-TRIM52-AS1)转染组和无义序列转染组,后2组细胞分别转染si-TRIM52-AS1及其无义对照序列,转染6h后,制备H/R诱导的细胞损伤模型。采用RT-qPCR、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞仪分别检测4组神经元TRIMS2-AS1的表达及细胞增殖、凋亡情况;采用酶联免疫吸附实验(ELISA),Westerm blotting分别检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量和Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达。(3)将皮层神经元分为miR-28-Sp转染组和无义序列转染组,分别转染miR-28-5p模拟物及其无义对照序列、转染6h后,均制备H/R诱导的细胞损伤模型。采用RT-qPCR、CCK-8、流式细胞仪分别检测2组神经元miR-28-5p的表达及细胞增殖、调亡情况;采用ELISA及Western boting分别检测培养上清中LDH、细胞中MDA、SOD含量和Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达。(4)将皮层神经元分别分为野生型TRIM52-ASI+miR-28-5p模拟物转染组野生型TRIM52-AS1+miR-28-5p无义对照序列转染组和突变型TRIM52-AS1+miR-28-5p模拟物转染组.突变型TRIM52-AS1+miR-28-5p无义对照序列转染组。转染6h后换新鲜培养液继续培养12h后,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组细胞的荧光素酶活性。(5)将皮层神经元分为无义序列转染组、miR-28-5p抑制物转染组、无义序列+si-TRIM52-AS1转染组、miR-28-5p抑制物+si-TRIM52-AS1转染组,分别转染miR-28-Sp抑制物无义对照序列、miR-28-5p抑制物、miR-28-5p抑制物无义对照序列+si-TRIM52-ASI、miR-28-5p抑制物+si-TRIM52-AS1.转染6h后,制备H/R诱导的细胞损伤模型。采用RT-qPCR、CCK-8、流式细胞仪分别检测4组神经元miR-28-5p的表达及细胞增殖、凋亡情况;采用ELISA及Westermblotting分别检测培养上清中LDH、细胞中MDA.SOD含量和Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果(1)与对照组比较,模型组神经元TRIM52-AS1的表达升高,miR-28-5p的表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,模型组和无义序列转染组神经元培养上清中LDH含量升高,细胞中MDA、SOD含量降低.细胞A值和Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达降低.凋亡率和Bax蛋白的表达升高。与模型组和无义序列转染组比较,si-TRIM52-ASI转染组神经元TRIM52-ASI的表达降低,培养上清中LDH含量和细胞中MDA含量降低,SOD含量升高,细胞A值和Cyclin D1、Bel-2蛋白的表达升高,调亡率和Bax蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与无义序列转染组比较,miR-28-5p转染组神经元miR-28-Sp的表达增高,培养上清中LDH含量和细胞中MDA含量降低,SOD含量升高,细胞A值及Cyelin D1、Bcl-2蛋白的表达升高,凋亡率及Bax蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)野生型TRIM52-AS1+miR-28-5p模拟物转染组细胞的荧光素酶活性显著低于野生型TRIM52-AS1+miR-28-5p无义对照序列转染组(0.43±0.04 vs.1.00±0.09),差异有统计学意义(P<0.05)。(5)与无义序列转染组比较,miR-28-5p抑制物转染组细胞miR-28-5p的表达明显降低,培养上清中LDH和细胞中MDA含量升高,SOD含量降低,细胞A值及Cyclin D1、Bel-2蛋白的表达降低,凋亡率及Bax蛋白的表达升高。与无义序列+si-TRIM52-ASI转染组比较,miR-28-5p抑制物+si-TRIM52-ASI转染组神经元中miR-28-5p的表达明显降低,培养上清中LDH含量和细胞中MDA含量明显升高,SOD含量降低,A值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达降低,凋亡率及Bax蛋白的表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论下调TRIM52-ASI可能通过靶向负调控miR-28-5p的表达抑制H/R诱导的大鼠脑皮层神经元的氧化应激和凋亡,从而减轻神经元的损伤。