一种用Tripure试剂从冻存组织分离纯化RNA的方法

目的 探索一种使提取的冻存组织RNA纯度和完整性均较高的方法。方法 在Tripure分离试剂说明书基础上 ,结合异硫氰酸胍等提取RNA的方法 ,对提取组织RNA的操作步骤进行调整、改进。结果 用此法提取的冻存组织RNA ,经电泳鉴定及进一步RT PCR检测 ,显示RNA的纯度及模板性较好。结论 用此法提取的冻存组织RNA质量稳定可靠。

改进TRIpure法提取小鼠肝脏组织总RNA

目的改进从新鲜动物组织中提取、鉴定纯度及完整性较高总RNA的技术方法。方法参考1987年ChomczynskiP等人提出的RNA提取方法,对组织RNA提取的操作步骤进行调整改进以获得稳定良好的RNA,并对常规琼脂糖凝胶电泳做适当改进用于鉴定RNA的质量。结果用该法提取的总RNA进行电泳后,可见28S、18S、5S三条清晰的RNA条带,其中28S条带的亮度约为18S条带的2倍,用紫外分光光度计检测RNA的纯度,OD260/OD280值为1.8～2.0,表明RNA没有被蛋白质或苯酚污染。这些结果显示RNA未降解并有较好的完整性,全部操作过程可在2h内完成。结论用改进方法提取的新鲜组织RNA质量稳定,电泳鉴定快速可靠。

铁观音茶树叶片总RNA提取方法研究

铁观音茶树不同生育时期叶片为材料，采用Tripure试剂法、中能博彩试剂盒与Tripure试剂相结合的方法提取茶树叶片总RNA。结果表明，Tripure试剂法比结合法更适宜提取铁观音茶树RNA，该方法提取的RNA28S、18S和5SrRNA条带清晰明亮；OD_260／OD_280值在1．7～2．0之间，说明该方法提取的RNA完整性和纯度好，可用于进行后续分子生物学实验。

驴真皮中主要蛋白的组成及其相互作用的研究

目的:分析阿胶主要原料驴真皮中的主要构成蛋白,研究其相互作用,揭示其分子构成,为阐明阿胶作用机制的研究提供实验依据。方法:分别使用TriPure试剂和通过1%聚丙烯酰胺(SDS)煮沸驴的真皮,提取驴皮中总蛋白质,再使用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,割胶提取蛋白质,使用毛细管色谱进一步分析蛋白组分。结果:发现驴真皮中主要蛋白质不仅含有胶原蛋白α1(Ⅰ)型、α2(Ⅰ)型,而且还含有血清白蛋白,其中,用TriPure试剂提取蛋白质的总蛋白中,血清白蛋白的含量超过25%;用1%SDS煮沸的总蛋白中,血清白蛋白的含量约20%,并且发现在凝胶电泳带中有2条明显的分子质量为20万左右的蛋白质,割胶提取该蛋白质经过毛细管色谱分析,发现是胶原蛋白与血清白蛋白结合的产物。结论:血清白蛋白是驴真皮中的主要蛋白组分,驴血清白蛋白有可能对于阿胶补血的功能起到比普遍认为胶原蛋白更为重要的作用。

快速提取白念珠菌总RNA的新方法研究

目的探讨快速提取理想白念珠菌总RNA的实验方法。方法对静止相和菌丝相的白念珠菌国际标准菌株ATCC90028采用冷酸洗玻璃珠联合Tripure法提取总RNA，用紫外分光光度计测量其OD260、OD280的值，并进行琼脂糖凝胶电泳。结果提取的白念珠菌酵母和菌丝相总RNA产量分别为1．9440、1．9624，且OD260／OD280比值介于1．8～2．0范围内，电泳显示提取的总RNA呈现28srRNA，18srRNA和5srRNA3条清晰的条带。结论冷酸洗玻璃珠联合Tripure新方法快速且完整性好，值得推广。

昆明小鼠不同组织RNA提取方法的比较

利用改良的异硫氰酸胍法、改良的SDS法和改良的TRlpure试剂盒法对昆明小鼠心脏、肝脏以及肾脏进行组织总RNA的提取,比较其提取效果,结果显示,试剂盒提取效果普遍明显优于其它方法且适用于肝脏总RNA的提取,传统方法的改良适用于肾脏总RNA的提取,心脏总RNA的提取效果均不理想。

斜带石斑白细胞cDNA文库的构建

用Tripure试剂盒提取斜带石斑白细胞总RNA ,反转录合成第一链cDNA ,进行长距离PCR ,蛋白酶K消化 ,SfiI酶切 ,通过CHROMASPIN - 40 0柱 ,回收大于 5 0 0bp的cDNA ,与λTripIEx2载体连接 ,体外包装后构建了斜带石斑细胞的cDNA文库。库容 1 .6 5× 1 0 6 ,重组频率 82 % ,扩增后滴度 7.5× 1 0 9pfuml- 1。插入片断长度 5 0 0～ 2 30 0bp ,最多的是在 75 0～ 1 0 0 0bp范围。