精液中猪细小病毒DNA三种提取方法效果比较

猪精液中含有高浓度的蛋白质,因此提取高纯度DNA较为困难;试验分别用水煮法、异硫氰酸胍法和Trizol法三种方法对连续稀释梯度猪精液提取猪细小病毒DNA,应用Taqman荧光定量PCR技术评价提取效果并加以对比。结果发现Trizol法可以提取出高纯度的DNA,但因Trizol试剂价格昂贵,不适用临床检测;比较另外两种方法,水煮法较异硫氰酸胍抽提法更为有效,是一种迅速、简便、经济、高效的DNA提取方法,适合于临床大量样品的检测。

脂肪组织RNA提取方法的改进

本试验以猪脂肪组织为材料,应用TRIzol、V-gene、H.Q.&.Q三种总RNA提取试剂盒分别提取脂肪组织RNA,发现直接按照试剂盒说明书操作提取的RNA效果不理想。通过反复试验,分别改进了提取过程中的部分操作步骤,结果表明:三种试剂盒操作方法改进后与改进前相比,提取RNA的纯度和得率表现为差异极显著(P<0.01);三种试剂盒操作方法改进后提取RNA的纯度差异不显著(P>0.05),但在得率方面,Trizol比其它两种高,表现为差异极显著(P<0.01)。三种试剂盒操作方法改进后提取的RNA经RT-PCR扩增猪-βactin基因,电泳结果显示,扩增条带清晰、特异,说明提取的RNA完全符合后续的分子生物学实验要求。