基于TRP/KYN代谢通路探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元保护作用

目的探讨左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元的保护作用及其机制。方法(i)体内实验中,取60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为6组,每组10只:空白组、模型组、阳性药组(1.8 mg/kg氟西汀+0.18 g/kg二甲双胍)、高剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-H,40.500 g/kg ZGJTJYF)、中剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-M,20.250 g/kg ZGJTJYF)和低剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-L,10.125 g/kg ZGJTJYF)。除空白组外,其余各组均予以高脂乳剂灌胃联合单次尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)及4周慢性不可预见性温和应激(CUMS)建立DD模型。所有给药组在CUMS造模期间分别经灌胃给予对应药物处理,空白组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。处理4周后,通过检测大鼠的血糖、血清中糖化血红蛋白含量判断ZGJTJYF的降糖效果;通过开野实验和Morris水迷宫测试评价ZGJTJYF的抗抑郁作用;采用高效液相色谱联合电化学检测器(HPLC-ECD)检测大鼠海马中5-羟色胺(5-HT)水平;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠海马中色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)及吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的含量变化;采用免疫组织化学染色法(IHC)检测大鼠海马中突触素(SYN)、突触后致密物质95(PSD-95)蛋白的表达水平;采用蛋白印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR)2A和NR2B蛋白的表达水平。(ii)体外实验中,分别取5只SPF级SD孕鼠(E16–18),6只SPF级SD新生鼠用于原代海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)和小胶质细胞(MG)提取,构建Ne-As-MG共培养体系,并将其分为6组:空白组(PBS)、模型组[150 mmol/L葡萄糖+200μmol/L皮质酮(G&P)+PBS]、空白血清组(G&P+10%空白血清)、阳性药组(G&P+10%阳性药含药血清)、ZGJTJYF组(G&P+10%ZGJTJYF含药血清)和1-甲基-D-色氨酸组(1-MT,IDO阻断剂)(G&P+1-MT),给予对应处理18 h后,采用免疫荧光法检测神经元突触相关蛋白SYN、PSD-95、NR2A和NR2B表达水平;采用ELISA法检测炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α及TRP/KYN代谢通路中相关因子[TRP、KYN、犬尿喹啉酸(KYNA)和喹啉酸(QUIN)]水平。结果(i)体内研究结果表明,ZGJTJYF-M和ZGJTJYF-L可显著改善DD大鼠的血糖升高状态(P<0.01,P<0.05),ZGJTJYF-H、ZGJTJYF-M和ZGJTJYF-L均显著增加其自主活动能力和学习记忆能力(P<0.01,P<0.01,P<0.05);同时,ZGJTJYF-M可有效升高大鼠海马中5-HT和TRP水平(P<0.01),降低KYN和IDO水平(P<0.01),并能显著提高海马神经元中SYN和PSD-95的表达水平(P<0.01),抑制海马内NR2A和NR2B异常活化(P<0.01)。(ii)体外研究结果表明,ZGJTJYF含药血清可显著提高海马神经元中SYN和PSD-95的表达水平(P<0.01);有效降低IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.05)、TNF-α(P<0.01)、IDO(P<0.05)、KYN(P<0.05)和QUIN的水平(P<0.01),升高TRP和KYNA的水平(P<0.01);并对DD环境下神经元中的NR2A和NR2B异常活化具有显著的抑制作用(P<0.05)。结论中药复方ZGJTJYF可通过抑制大鼠海马中IDO表达,调节TRP/KYN代谢途径,有效改善海马中的5-HT不足,对DD导致的海马神经元损伤具有良好的保护作用,是防治DD的有效潜在治疗药物。

秀丽隐杆线虫调节渗透平衡机制的研究进展

维持生物体内渗透压平衡对生物生长发育十分重要。秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)被广泛用于研究生物在不利环境的抗性机制;同时,由于其进化的保守性,可为研究高等生物的体内渗透压调节提供参考。对秀丽隐杆线虫感知体外渗透压的相关基因和组织进行了介绍,分析了秀丽隐杆线虫调节体积的相关通路,综述了维持蛋白质稳态对渗透压的调节作用。

基于网络药理学探讨白芍镇痛机制

目的运用网络药理学筛选白芍有效成分及治疗靶标,对其治疗疼痛的分子机制进行科学阐释。方法采用TCMSP选取活性成分及CAS,Pubchem获取其“SMILES”,利用反向分子对接原理,获取潜在靶点。GeenCards获得疼痛相关靶点,利用韦恩图筛选白芍治疗疼痛的靶点蛋白。String构建蛋白间相互关系,DAVID进行GO分析及KEGG分析。结果筛选了11个活性成分及97个潜在的治疗靶点,通过KEGG分析获得可能与疼痛相关的信号通路:Serotonergic synapse,Calcium signaling pathway、Inflammatory mediator regulation of TRP channels;其对应基因:PRKCA.CASP3、ALOX15、SLC6A4,PRKCG、ALOX5、PRKCB,ALOX12.EGFR、ADRB2、RYR3、RYR1.NOS2、PTAFR、PRKCQ.PRKCD.结论白芍可能通过TRP信号通路、Ca"信号通路及5-HT受体缓解疼痛。

经舒颗粒对原发性痛经大鼠TRPV1、TRPM8及相关炎性因子的影响

目的通过实验验证经舒颗粒对原发性痛经的效果及可能作用机制。方法筛选处于动情间期的SD雌性大鼠,随机分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组制备原发性痛经模型,观察并记录扭体反应次数及评分,检验血清中炎性因子PGF2α、BK、NGF含量,以及TRPV1、TRPM8在mRNA水平的表达。结果与空白组相比,各剂量组扭体反应及PGF2α、BK和脊髓中TRPM8 mRNA表达水平的变化差异皆有统计学意义,且扭体反应数值与TRPV1、TRPM8的表达、TRPV1与TRPM8的表达、PGF2α与TRPM8表达分别成正相关。结论经舒颗粒对原发性痛经的止痛效果或许与减少PGF2α释放从而抑制脊髓TRPM8表达有关,此实验进一步确定了经舒颗粒对原发性痛经的治疗效果,初步验证并明确了其部分镇痛机理。