诃子配伍铁棒锤对戊巴比妥钠诱导的H9c2心肌细胞毒效关系的影响及机制

目的综合评价诃子(Terminalia chebula Retz.,TCR)-铁棒锤(Aconitum pendulum Busch.,APB)不同配比对H9c2心肌细胞毒效关系的影响,寻找两者的配比规律,并探究TCR-APB药对心肌的保护机制。方法以APB为参照,按照1∶1,2∶1,3∶1及4∶1的比例配比TCR与APB药材并提取总提物,以戊巴比妥钠构建大鼠H9c2心肌细胞心力衰竭模型,计算4种配比总提物作用于H9c2心肌细胞的IC_(50)与EC_(50)值,比较其安全治疗指数(treatment indices,TI=IC_(50)/EC_(50));并进一步探究TCR-APB药对H9c2心肌细胞活力、心肌指标[乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及肌酸激酶(creatine kinase,CK)]水平、线粒体膜电位(ΔΨ)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、钙离子(Ca2+)浓度及TRP基因、钙调节相关基因的mRNA水平。结果TI计算结果显示,TCR与APB以2∶1比例配比时安全范围最好;100 ng·mL^(–1)的APB可显著上调TRPV1、TRPV2及TRPM8mRNA水平,使TRPV4与TRPA1的mRNA水平显著下调,毒性浓度范围下的调节则相反;分子对接结果发现TRPM8对各成分的亲和力均比其他靶点强;最佳配比提取物及其活性单体均可显著提高细胞活力,改善戊巴比妥钠损伤导致的H9c2心肌细胞LDH渗漏、CK水平上升、ΔΨ降低、细胞内ROS水平上升、胞内Ca^(2+)浓度增加以及FKBP1B和TRPM8的mRNA水平下调、RyR2和NOX2的mRNA水平上调等。结论TCR与APB配伍均可缓解H9c2心肌细胞损伤,起到减毒增效的作用,其最佳配比为2∶1,二者配伍可以通过影响TRP基因,特别是TRPM8,调节肌质网中FKBP1B与RyR2基因以及线粒体中ROS水平,纠正Ca^(2+)紊乱,从而保护心肌免受损伤。