稳定表达TRPA1通道的HEK-293T细胞模型的建立

目的建立稳定表达TRPA1的HEK-293T细胞模型,并鉴定模型构建是否成功。方法构建TRPA1真核表达质粒,采用脂质体转染法将其转入HEK-293T细胞中,经G418筛选稳定表达株,采用RT-PCR、免疫组化技术,检测HEK-293T细胞TRPA1基因的转录和蛋白的表达。结果经酶切、测序证明,TRPA1基因的真核重组表达质粒已成功构建;PCR、免疫组化检测结果表明,将此重组质粒转入HEK-293T细胞可稳定表达TRPA1基因。结论成功构建了能稳定表达TRPA1通道的HEK-293T细胞株,为体外研究TRPA1生理病理功能和筛选相关TRPA1通道调节剂奠定了基础。

靶向TRPA1通道治疗有机磷导致的神经损伤

有机磷是很多杀虫剂、除草剂和神经性毒剂的有效成分,急性中毒可导致病人死亡,主要是由于体内一种被称为乙酰胆碱酯酶的蛋白活性被抑制所导致。对于急性中毒,临床上目前已有成熟的治疗手段和药物。然而部分有机磷中毒的患者在急性中毒缓解后可发生以肢体感觉异常、共济失调性步态和瘫痪为特征的临床症状,病理检测可见典型的神经损伤,被称为有机磷致迟发性神经病(OPIDN)。迄今为止,OPIDN的发病机制一直未被阐明,临床上亦无治疗方法和药物。本项研究中,科研人员证明有机磷致TRPA1通道激活是OPIDN的主要致病机制,并发现了2个已上市药物可通过抑制该通道缓解OPIDN的症状和病理损伤,为紧急情况下治疗有机磷中毒致神经损伤提供了潜在的选择。

靶向TRPA1通道的药物开发研究进展

瞬时受体势(Transient Receptor Potential,TRP)通道是一种非选择性阳离子通道,广泛分布于神经和非神经细胞中。TRPA1作为TRP通道的一个亚型,是一种温度敏感型的TRP通道,其温度激活阈值与物种有关。在小鼠体内,TRPA1可以被低温(<17℃)激活,然而在绿安乐蜥体内TRPA1的温度激活阈值却达到了35.8℃。TRPA1除了可以响应温度刺激之外,还可以被化学刺激、机械刺激等多种理化方式激活。TRPA1基因的功能获得性突变会导致家族性发作性疼痛综合征。由于TRPA1在温度感知、痛觉产生、哮喘、瘙痒等众多生理与病理过程中发挥着重要作用,因而TRPA1受到了广泛关注。文章总结TRPA1通道的生理特性,并对其参与的机体生理调节及靶向TRPA1通道的药物开发现状和前景进行综述,以期为临床上治疗相关疾病提供理论基础。

基于TRPA1调控泡沫细胞胆固醇代谢作用探讨枳实薤白桂枝汤治疗AS的作用机制

目的:基于主动脉瞬时受体电位通道锚蛋白1(TRPA1)调控泡沫细胞胆固醇代谢作用探讨枳实薤白桂枝汤对动脉粥样硬化(AS)小鼠疾病进展的影响与作用机制。方法:采用高脂饲料在载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠上建立AS模型,随机分为枳实薤白桂枝汤低、中、高剂量组(2.97、5.94、11.88 g·kg^(-1))与辛伐他汀组(0.002 g·kg^(-1)),每组织喂食高脂饲料同时给药,C57BL/6J小鼠作为正常组使用普通饲料喂养,每组10只。上述过程结束后,取小鼠主动脉与血清。采用苏木素-伊红(HE)染色法观察主动脉根部病理变化;大体油红观察主动脉脂质斑块情况;检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,并用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)与免疫组化分析TRPA1、三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运体A1(ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ABCG1)及甘露糖受体(CD206)表达情况。结果:从药效上看,与正常组比较,模型组主动脉出现斑块、大量泡沫细胞与胆固醇晶体等病理变化,血清TC、LDL-C、IL-1β、IL-18水平均显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01),主动脉组织CD206水平显著下降(P<0.01);与模型组比较,各给药组均能改善主动脉上的脂质沉积状况,并且除枳实薤白桂枝汤高剂量组外,各给药组均能显著降低TC、LDL-C水平(P<0.01),炎症方面,除枳实薤白桂枝汤中剂量组外,各给药组的IL-1β、IL-18水平均明显降低(P<0.05),此外,枳实薤白桂枝汤可上调CD206水平,且枳实薤白桂枝汤中、高剂量组差异明显(P<0.05)。从作用机制上看,与正常组比较,模型组的主动脉TRPA1、ABCA1、ABCG1表达水平均明显降低(P<0.05);与模型组比较,各给药组均明显提高了主动脉TRPA1表达量(P<0.05),可提高ABCA1、ABCG1的表达量,其中枳实薤白桂枝汤中、高剂量组和辛伐他汀组差异明显(P<0.05),免疫组化结果的趋势与其基本一致。结论:枳实薤白桂枝汤可有效降低血脂与炎症水平,抑制主动脉斑块的形成,其作用机制可能是通过TRPA1引发下游的ABCA1、ABCG1表达升高,促进泡沫细胞中胆固醇流出,从而调控胆固醇代谢并在一定程度上干预炎症水平,最终达到治疗AS的作用。

天麻素对神经病理性痛大鼠脊髓AMPK/TRPA1信号通路的影响

目的评价天麻素对神经病理性痛大鼠脊髓腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/瞬时受体电位通道A1(TRPA1)信号通路的影响。方法SPF级健康雄性SD大鼠36只,6~8周龄,体质量200~230 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术+生理盐水组(SHAM组)、神经病理性痛+生理盐水组(NP组)和神经病理性痛+天麻素组(GAS组)。2%异氟烷麻醉下,采用坐骨神经慢性结扎损伤法制备大鼠神经病理性痛模型,SHAM组未结扎。造模后连续14 d,GAS组腹腔注射天麻素100 mg/kg,SHAM组和NP组注射等量生理盐水。分别于造模前1 d(T0)、造模后第1、3、5、7、10和14天(T1-6)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。在T4和T6时测完痛阈后,2%异氟烷麻醉处死大鼠取L4-6脊髓组织,采用qRT-PCR法检测TRPA1 mRNA表达,Western blot法检测脊髓TRPA1、AMPK和p-AMPK表达,免疫荧光染色法检测脊髓TRPA1表达;免疫组织化学染色法观察TNF-α、IL-1β和c-fos的表达。结果与SHAM组相比,NP组T1-6时MWT和TWL降低,脊髓TRPA1 mRNA、TRPA1、TNF-α、IL-1β和c-fos表达上调,p-AMPK表达下调(P<0.05),AMPK表达差异无统计学意义(P>0.05);与NP组相比,GAS组T3-6时MWT和T2-6时TWL升高,脊髓TRPA1 mRNA、TRPA1、TNF-α、IL-1β和c-fos表达下调,p-AMPK表达上调(P<0.05),AMPK表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论天麻素减轻大鼠神经病理性痛的机制可能与调控AMPK/TRPA1信号通路有关。