TRPC 1钙离子通道在骨骼肌收缩功能中的作用及磁诱导激活效应在训练中的应用探索方向

收缩功能作为骨骼肌重要功能之一,对人体日常活动及运动表现都起到关键作用,骨骼肌收缩离不开Ca^(2+)的参与。TRPC 1钙离子蛋白受体通道作为骨骼肌收缩过程重要的Ca^(2+)支持途径,通过CaN-NFAT和Akt-mTOR信号通路对骨骼肌纤维提供增生与重塑,并提升线粒体呼吸能力,促进系统代谢平衡,帮助肌肉在持续的反复收缩时保持其力量。与此同时,在骨骼肌受到张力刺激时,持续的Ca^(2+)内流可保持肌细胞内兴奋性,保证动作电位的有效传导与力持续的产生,提升了肌肉的抗疲劳能力。TRPC 1钙离子蛋白受体通道作为易受物理、化学外源性刺激的特性,可被脉冲磁场进行诱导激活,通过钙-线粒体轴达到运动激活TRPC 1受体通道促进骨骼肌功能提升的同等效果,对人体最大量和力量耐力带来提升。在运动训练领域,可把应用磁诱导TRPC 1的机制尝试解决同期训练矛盾、比赛期的大负荷训练规避问题、损伤期力量保持与康复等问题作为研究与应用探索方向,使该技术在促进提升竞技体育水平中发挥作用。

低频脉冲磁场诱导TRPC1改善COVID-19患者康复期下肢的肌肉无力症状

背景:肌肉无力是新型冠状病毒(COVID-19)感染后的常见症状,影响康复期人体日常活动能力。在强度1.5 mT,频率3300 Hz的低频脉冲磁场刺激下可通过诱导和激活经典瞬时感受器电位通1(classical transient receptor potential channel 1,TRPC1),提升人体骨骼肌的最大自主收缩力与力量耐力,对肌肉组织产生一系列生理支持效应,该手段是否会改善新型冠状病毒肺炎患者康复期的肌无力症状尚无研究。目的:选用低频脉冲磁场对新型冠状病毒肺炎患者下肢肌群进行磁刺激,以观察该刺激对新型冠状病毒肺炎患者康复期下肢肌群肌无力改善的影响。方法:招募胶体金法抗原检测试剂(COVID-19)为阳性并伴有肌肉无力症状的新型冠状病毒(奥密克戎毒株)感染患者14例,将所有受试者随机分成2组,分别为接受磁场刺激的试验组和接受假治疗的对照组。试验总时长3周,试验组每隔48 h对腿部进行低频脉冲磁刺激,对照组与试验组干预流程一致但给予假刺激,两组患者均不被告知磁刺激仪器是否运行,两组患者共进行9次操作,随后观察两组患者下肢局部肌群最大自主收缩力、腿部爆发力与力量耐力的变化情况。结果与结论:①在采集的8个局部肌群中,试验组患者7个局部肌群在经过3周的低频脉冲磁场刺激,最大自主收缩力值均增长。对照组除3个肌群最大自主收缩力自行增长改善以外,其他肌群肌力无提升。②试验组的左腿前群与双腿后群提升率显著高于对照组。③两组的纵跳摸高高度与膝关节峰值角速度相比试验前测均提升,试验组摸高高度提升率高于对照组。④在疲劳状态下,试验组膝关节峰值角速度下降率显著下降,对照组膝关节峰值角速度下降率无显著性变化;试验组摸高高度下降率显著下降,而对照组摸高高度下降率无显著性变化。⑤上述数据证实,在强度1.5 mT,频率3300 Hz的低频脉冲磁场刺激方案下,新型冠状病毒肺炎患者在康复期经过3周的低频脉冲磁场刺激相比人体自愈过程可使更多的下肢局部肌群肌力获得提升,对基于腿部爆发力的全身协调发力能力及功能状态明显改善。因此,低频脉冲磁场刺激可作为一种改善新冠感染患者下肢肌肉无力症状的有效、非运动的康复手段。

芪参益气滴丸通过TRPC1/STIM1通路调节Ca^(2+)稳态发挥抗动脉粥样硬化作用

目的:探究芪参益气滴丸(Qishen-Yiqi dropping pills,QS)治疗动脉粥样硬化(artherosclerosis,AS)的作用机制。方法:利用高脂饮食建立SD大鼠AS模型,随机分为:正常对照组,模型组,芪参益气滴丸低、中、高剂量组,阳性对照组,每组6只。处理12周后收集血清检测各组大鼠血脂及Ca^(2+)水平;HE染色观察动脉组织形态学变化;ELISA法检测血清炎症因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;硝酸还原酶法检测动脉组织中一氧化氮(nitric oxide,NO)水平;Western blot检测动脉组织中瞬时受体电位通道蛋白1(transient receptor potential channel protein 1,TRPC1)、基质交互分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达水平。结果:芪参益气滴丸能减轻AS大鼠动脉内膜增厚及血管狭窄,抑制AS斑块形成;与模型组相比,芪参益气滴丸能显著降低大鼠血液中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平(P<0.05);芪参益气滴丸治疗组大鼠血清炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平与AS大鼠相比显著降低(P<0.05);芪参益气滴丸治疗组大鼠血清Ca^(2+)水平显著低于且动脉组织中NO水平显著高于AS大鼠(P<0.05);与AS大鼠相比,芪参益气滴丸治疗组大鼠动脉组织中TRPC1和STIM1蛋白水平显著降低,且eNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:芪参益气滴丸可以通过TRPC1/STIM1通路调节钙稳态,促进血管舒张因子NO的合成释放,抑制炎症反应,从而发挥抗AS作用。

TRPC1/ORAI1复合体调节HUVECs SOC和ROC介导的Ca^(2+)内流和NO生成

目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca^(2+)内流和NO生成中的作用。方法取2~3代HUVECs,将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒分别转染入HUVECs。用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,real-time PCR和Western blot检测TRPC1、ORAI1 mRNA和蛋白的表达及抑制效率。细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组,未转染组即空白对照组及空质粒组(vehicle组),将上述3组细胞分别与CaR激动剂、ROC模拟剂TPA+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca^(2+)]i和NO。随后将构建的TRPC1和ORAI1干扰质粒同时转染入HUVEC,与CaR激动剂孵育后检测[Ca^(2+)]i和NO,用免疫共沉淀法检测TRPC1和ORAI1的相互作用。结果 1)与对照组相比,TRPC1及ORAI1组,mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);2)在4种不同处理作用下,TRPC1及ORAI1转染组中细胞内Ca^(2+)浓度变化值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);3)与对照组及单转染TRPC1及ORAI1组比,共转染组细胞内Ca^(2+)浓度变化值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);4)TRPC1与ORAI1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下相互作用增强。结论 TRPC1与ORAI1复合体共同调节CaR经SOC和ROC激活介导的Ca^(2+)内流和NO生成。

在神经系统中TRPC1的研究进展

经典瞬时感受器电位通道1(classical transient receptor potential channel 1,TRPC1)是具有六次跨膜结构的非选择性阳离子通道,能通透钙离子和钠离子。它是哺乳类动物中第一个被发现的TRP蛋白,隶属于TRPC亚家族。TRPC1可因受体,细胞内钙库清空或机械刺激激活而开放,引起细胞内钙离子浓度的升高和细胞膜的去极化。TRPC1在神经系统内的分布较为广泛,近年来的研究显示该分子激活后引发的效应与神经系统许多生理病理过程密切相关,因此本文就目前TRPC1在神经系统中的研究进展进行综述。

胸腺五肽联合常规药物治疗对老年慢性阻塞性肺疾病患者血清白细胞介素-17A、CXCL12水平及TRPC1表达的影响

目的探讨胸腺五肽联合常规药物对老年慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者血清IL-17A、CXCL12水平及TRPC1表达的影响。方法我院2014年5月至2016年5月就诊的156例COPD患者,按随机数字表法分为两组各78例,对照组进行常规治疗,观察组在此基础上进行胸腺五肽皮下注射。比较两组免疫功能、肺通气功能及外周血IL-17A、CXCL12水平及肺泡灌洗液中TRPC1水平。结果治疗后,观察组CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+及FEV1、FEV1/FVC、PEF均高于对照组,CD8^+、外周血IL-17A、CXCL12水平及BALF中TRPC1水平均低于对照组(P<0.05)。两组不良反应的总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论胸腺五肽联合常规药物治疗能显著提高老年COPD患者的免疫功能,改善肺通气功能,降低炎症因子,缓解炎症反应,安全有效。

TRPC1是人气道上皮细胞感受压力的受体

目的探讨机械敏感瞬时受体电位蛋白-1(TRPC1)在人气道上皮细胞感受压力过程中的作用。方法 1)收集人肺癌患者肺癌旁5 cm以外的无病变组织,根据临床表现分为正常组、慢性阻塞性肺病组(COPD)和哮喘组,通过细胞免疫组织化学、Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人气道上皮细胞内TRPC1表达水平。2)TRPC1 siRNA、NC siRNA转染16HBE细胞,细胞免疫荧光技术检测基因沉默效率。3)将16HBE细胞分为对照组、单纯刺激组、刺激+TRPC1 siRNA转染组,以细胞牵张刺激系统给予刺激,激光共聚焦观察细胞内钙离子浓度变化。结果 1)COPD组、哮喘组TRPC1蛋白表达及转录水平明显高于对照组(P<0.05)。2)TRPC1 siRNA转染组细胞内TRPC1荧光强度明显低于对照组(P<0.05),NC siRNA组较正常组无明显差别。3)单纯刺激组细胞内钙离子荧光强度显著高于对照组(P<0.05),而刺激+TRPC1 siRNA转染组钙离子荧光强度与对照组无明显差异。结论 TRPC1是人气道上皮细胞内重要的压力敏感受体。

TRPC1蛋白在乳腺癌中表达及与临床病理参数的相关性

目的观察TRPC1蛋白在乳腺癌组织的表达及与临床病理参数的相关性。方法免疫组化法观察TRPC1蛋白在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达,并分析其表达与临床病理参数的相关性。结果乳腺癌组织TRPC1蛋白表达率明显高于癌旁组织(P<0. 05)。TRPC1蛋白表达率与肿瘤的病理类型、临床分级、淋巴结转移、肿瘤大小、ERα及HER-2表达具有相关性(均P<0. 05),与患者年龄、绝经等无关(P>0. 05)。结论 TRPC1蛋白在乳腺癌组织高表达,并与乳腺癌分级、病理类型、ERα及HER-2表达具有相关性。

TRPC1在儿童肝母细胞瘤中的表达与临床病理特征及预后的关系

目的检测TRPC1在儿童肝母细胞瘤组织中的表达,分析其与临床病理特征及预后的关系。方法收集湖南省儿童医院普外科自2008年1月至2015年12月行肝脏肿块切除的16例肝母细胞瘤患儿的病理资料和临床资料,采用免疫组织化学法检测TRPC1在儿童肝母细胞瘤组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征(肿瘤组织与非肿瘤组织、肿瘤的大小)的关系,随访3～5年分析其与预后的关系。结果 TRPC1在16例肝母细胞瘤患儿癌组织中表达程度不同,高表达占62.5%(10/16),低表达占37.5%(6/16)。TRPC1高表达与肝母细胞瘤临床病理特征中的肿瘤组织与非肿瘤组织、肿瘤大小比较差异有统计学意义(P<0.05);患儿3年生存率为72.73%(8/11),5年生存率为50%(3/6)。TRPC1表达与3年、5年生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TRPC1表达可能与儿童肝母细胞瘤的发生、发展有关,但不一定与预后有关。

TRPC1通道蛋白在缺氧诱导肝癌细胞迁移侵袭中的作用

目的探讨TRPC1通道蛋白在缺氧条件下肝癌HCCLM3细胞迁移侵袭中的作用。方法用实时定量PCR和免疫印记法检测缺氧肝癌HCCLM3细胞TRPC1 mRNA和蛋白的表达,并应用将经化学修饰的TRPC1特异性小干扰性RNA(siRNA)转染HCCLM3细胞,实验分三组:TRPC1-siRNA转染组,阴性siRNA转染组及未转染对照组。采用Transwell实验,观察对缺氧条件下HCCLM3细胞迁移和侵袭能力的影响。结果缺氧条件下肝癌HCCLM3细胞TRPC1 mRNA和及TRPC1蛋白的表达均明显增加。TRPC1-siRNA转染HCCLM3细胞可明显下调TRPC1 mRNA和蛋白的表达。与未转染组及阴性si RNA转染组比较,TRPC1-siRNA转染组的HCCLM3细胞缺氧条件下细胞迁移力及侵袭能力明显下降。结论 HCCLM3细胞缺氧条件下,TRPC1通道蛋白表达增加并且可能促进HCCLM3细胞的迁移和侵袭的恶性生物学行为。

TRPC1通道参与调节肾小球系膜细胞的收缩

目的探讨离体和在体情况下TRPC1通道是否参与肾小球系膜细胞的收缩。方法通过计算细胞表面积来观察肾小球系膜细胞的收缩情况。分别利用荧光标记的菊粉和对氨基马尿酸（PAH）的血浆清除率计算大鼠肾小球滤过率（GFR）和肾血浆流量。结果在肾小球系膜细胞的培养液中加入血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）10min后，细胞表面积减少（37．2％±4．0％），系膜细胞的收缩反应可因TRPC1基因敲除而受到显著抑制（20．1％±3．0％）。给大鼠注射AngⅡ（1．7ng·min^-1·100g^-1BW）可引起GFR下降，注射TRPC1抗体（300μg／L）显著抑制AngⅡ引起GFR下降（P〈0．05）。但与TRPC1抗体相同浓度的免疫球蛋白，不能抑制AngⅡ引起的GFR下降。另外，TRPC1抗体不影响AngⅡ引起的血压改变和肾血流量的下降。结论本实验表明TRPC1通道在调节肾小球系膜细胞收缩功能方面发挥了重要的作用。

短期低频脉冲磁场诱导经典瞬时感受器电位通道1对肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力的影响

背景:力量素质是人类进行身体活动的必备要素,短暂的低频脉冲磁场刺激可诱导和激活经典瞬时感受器电位通道1(classical transient receptor potential channel 1,TRPC1),并引发小鼠骨骼肌生长与重塑,从而对肌组织产生一系列生理支持效应,该机制是否会引发人体骨骼肌生理结构与工作能力的变化,并作为一种全新的人体肌力提升手段尚无研究。目的:选用可激活TRPC 1的特定低频脉冲磁场作为外源性刺激,以观察并验证短期刺激对人体肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力的影响。方法:选择普通成年健康受试者27例,随机分为训练组、照射组、训练+照射组,每组9例。训练组采用抗阻训练,训练+照射组每次接受10 min低频脉冲磁场刺激(强度1.5 mT,频率3300 Hz)后即刻进行抗阻训练,照射组只进行10 min低频脉冲磁场刺激,试验周期9 d,间隔48 h进行1次训练或照射,为了观察低频脉冲磁场与抗阻训练结合是否会产生增益效果,训练组与训练+照射组在5次训练前后采集最大自主收缩力的肌电信息,照射组只在第1,3,5次进行最大自主收缩力测试,跟踪肌力变化情况。试验后观察3组受试最大自主收缩力值、1次重复最大力量、耐力持续时间、中值频率的变化。结果与结论:①在试验过程中,所有被试的最大自主收缩力值变化与时间交互效应显著(P<0.01),随时间的推进均出现显著变化,各组内最大自主收缩力值变化与时间交互显著(P<0.05),组间无交互效应;②各组被试后测最大自主收缩力值、1次重复最大力量、耐力持续时间、中值频率相比前测均显著提升,其中训练组各指标提升率依次为19%,23%,28%,18%,训练+照射组提升率依次为11%,10%,53%,18%,照射组各指标提升率依次为28%,18%,27%,6%;③训练+照射组的中值频率显著高于照射组(P<0.05),与训练组无显著性差异;④通过对训练组与训练+照射组每次训练前后的最大自主收缩力肌电均方根振幅平均值对比发现,训练组前2次训练后最大自主收缩力肌电均方根振幅平均值显著下降(P<0.05)。⑤结果证实:在强度1.5 mT,频率3300 Hz的脉冲磁场短期刺激方案下,人体肱二头肌最大自主收缩力值和力量耐力显著提升,低频脉冲磁场诱导TRPC1促进肌组织工作能力提升这一机制在人体上得到有效验证;在最大力量提升效果上,低频脉冲磁场刺激与该试验进行传统抗阻训练的两组最终力量水平一致;抗阻训练结合脉冲磁场刺激在训练过程中可体现出更好的抗疲劳能力,以及保持肌力稳定增长的功效,这种结合在训练初期可在相同负荷下使局部肌群更多的运动单位获得训练刺激,提升整体训练效率;在力量耐力提升效果上,低频脉冲磁场刺激可使肌肉等长收缩时间延长,抗疲劳能力提升,低频脉冲磁场刺激结合抗阻训练相比单纯进行低频脉冲磁场刺激可带来更加有效的力量耐力增益效果。

短期低频脉冲磁场诱导经典瞬时感受器电位通道1对局部肌肉肌力提升后的保持与衰减变化轨迹

背景:短暂的低频脉冲磁场刺激可诱导和激活经典瞬时感受器电位通道1,并可提升人体局部肌肉(如肱二头肌)的最大自主收缩力与力量耐力。目的:通过可激活经典瞬时感受器电位通道1的特定低频脉冲磁场作为肌力提升手段,并观察短期刺激对人体肱二头肌最大自主收缩力与力量耐力提升后的变化衰减过程。方法:选取普通成年健康受试者27例,随机等分为训练组、照射组、训练+照射组。训练+照射组每次接受10 min低频脉冲磁场刺激后即刻进行抗阻训练,照射组只进行10 min低频脉冲磁场刺激,训练组采用抗阻训练,试验时间为8周,在正式试验的第1-12天进行短期肌力提升方案及力量水平后测,随后6周观察各组最大自主收缩力与力量耐力的衰减变化过程。结果与结论:(1)所有被试者随着试验时间的不断推进,最大自主收缩力值变化显著(P <0.01),时间交互效应明显,组间无交互效应,时间与分组交互效应不显著。(2)与初测值相比,照射组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,2,3,4周均显著高于初测值;训练组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,4周均显著高于初测值;与后测值相比,照射组最大自主收缩力值肌力衰减跟踪的第5,6周显著低于后测值;训练组最大自主收缩力肌力衰减跟踪的第5,6周显著低于后测值;训练+照射组肌力衰减最大自主收缩力跟踪的第1,5,6周显著低于后测值。(3)通过对3组最大自主收缩力变化曲线进行相关性分析可以看出,照射组整体最大自主收缩力肌力变化与训练组及训练+照射组最大自主收缩力变化趋势高度正相关,变化趋势高度一致。与照射组相比,训练组与训练+照射组最大自主收缩力具有更强的正相关性。(4)各组被试随着时间的推进,中值频率值均发生显著性变化(P <0.01),时间交互效应明显,时间点和分组交互作用对中值频率值变化具有显著性影响(P <0.05)。(5)与初测值相比,照射组肌力衰减中值频率值跟踪的第2周显著高于初测值;训练+照射组所有肌力衰减中值频率值跟踪的第2周显著高于初测值;与后测值相比,照射组肌力衰减中值频率值跟踪均与后测无显著性差异;训练组肌力衰减中值频率值跟踪的第1,4周显著低于后测值;训练+照射组肌力衰减中值频率值跟踪的第1,2周显著低于后测值。(6)3组受试者力量耐力中值频率值变化曲线进行相关性分析可以看出,照射组与训练组和训练+照射组之间具备较低的正相关性,与训练组相比,训练+照射组与照射组之间的相关程度略高。(7)结果显示,在强度1.5 mT、频率3 300 Hz的脉冲磁场短期刺激方案使肌力增强后,最大自主收缩力衰减到初测值的周期为6周,与该试验抗阻训练的衰减周期及提升后的衰减速度一致,在衰减过程中相比进行抗阻训练的2组变化波动较小,无疲劳累积的影响,肌力保持水平较佳。力量耐力提升后至少可保持6周。相比抗阻训练的力量耐力变化,低频脉冲磁场刺激可免于疲劳累积的影响,抗疲劳能力持续增长与保持水平较好,抗阻训练结合脉冲磁场可观察到对耐力水平带来一定影响与增益效果,减少衰减过程的波动,利于耐力水平的保持。

实时定量PCR检测镉对人肝癌细胞SMMC-7721中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的影响

目的:观察氯化镉(CdCl2)处理后人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨镉对肝癌细胞钙通道的影响。方法:以人肝癌细胞株SMMC-7721为研究模型,细胞暴露于氯化镉终浓度为0、5、10、20、30及40μmol.L-1的培养液中24 h。采用SYBR荧光实时定量PCR法检测TRPC1和TRPC4 mRNA表达,相对定量采用比较CT值法。结果:随着剂量的增加,TRPC1 mRNA表达有降低的趋势,除20μmol.L-1组外,各组mRNA表达均高于对照组(P<0.01);TRPC4 mRNA表达有先增高后降低的趋势,5、10和30μmol.L-1组mRNA表达均高于对照组(P<0.01)。2个基因均在低剂量(5和10μmol.L-1)组表达增加幅度较大(P<0.01)。结论:低剂量镉可显著增加人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4的表达,镉可在mRNA水平对SMMC-7721细胞钙通道产生影响。

TRPC1基因缺失对小鼠空间学习记忆的影响

目的:探讨TRPC1基因对小鼠空间学习和记忆的影响。方法:取4月龄野生S129小鼠(对照)和TRPC1基因敲除的S129小鼠(TRPC1 KO)各10只,采用Morris水迷宫检测其学习和记忆能力。小鼠进行连续5 d的空间探索训练以找到平台位置(定位航行实验),记录每组小鼠每天4个象限的潜伏期。在学习结束后的第7天进行长期记忆的检测(空间探索实验),记录小鼠第1次到达平台位置的时间(探索时间)和游泳轨迹、穿越平台次数、总路程、平均速度、目标象限活动时间百分比和目标象限活动路程百分比等体现小鼠记忆能力的参数,采用t检验比较两组实验结果的差异。结果:在维持5 d的学习阶段,野生对照小鼠和TRPC1 KO小鼠的潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。在长期记忆检测阶段,野生对照小鼠和TRPC1 KO小鼠的潜伏期、穿越平台的次数、平均速度、总路程、目标象限活动时间百分比和目标象限活动路程百分比的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:TRPC1基因敲除未影响4月龄小鼠的学习和记忆能力。

miR-338-5p调控TRPC1对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨miR-338-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成的影响以及对TRPC1的调控作用。方法体外分离培养正常皮肤成纤维细胞NFB与瘢痕疙瘩成纤维细胞KFB,miR-NC、miR-338-5p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-TRPC1、miR-338-5p mimics与pcDNA-NC、miR-338-5p mimics与pcDNA-TRPC1转染入KFB细胞;采用qRT-PCR实验与Western blot实验分别检测miR-338-5p、TRPC1的表达量;采用MTT实验检测细胞活力;双荧光素报告基因实验检测miR-338-5p与TRPC1的靶向关系;Western blot实验检测CyclinD1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达量。结果与NFB细胞比较,KFB细胞中miR-338-5p的表达水平降低(P<0.05),TRPC1的表达水平升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-338-5p组细胞活力降低(P<0.05),CyclinD1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白水平降低(P<0.05);与pcDNA-NC组比较,pcDNA-TRPC1组细胞活力升高(P<0.05),CyclinD1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白水平升高(P<0.05);双荧光素报告基因实验证实TRPC1是miR-338-5p的靶基因;与miR-338-5p+pcDNA-NC组比较,miR-338-5p+pcDNA-TRPC1组细胞活力升高(P<0.05),CyclinD1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白水平升高(P<0.05)。结论miR-338-5p过表达可通过负向调控TRPC1的表达而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成从而抑制瘢痕疙瘩的形成。

TRPC1 Regulates Mechanical Stretch-Induced Proliferation of Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells via Calcium-Dependent Signaling

Objective Compelling evidence shows that mechanical stimulation regulates the proliferation of mesenchymal stem cells(MSCs),but the underlying mechanism is still unknown.Transient receptor potential channel classic subfamily members 1(TRPC1)is mechanosentive and engaged in MSC proliferation.

TRPC1与硝苯地平及环孢素A诱导的牙龈增生的相关性研究

目的探讨经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)与硝苯地平(Nif)及环孢素A(CsA)单独及联合诱导的牙龈增生的相关性。方法一定浓度的Nif和CsA单独及联合作用于体外培养的人牙龈成纤维细胞(HGF),1 、3 、5 、7 d后,CCK8法检测药物作用下HGF增殖活性的变化,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测各组细胞TRPC1、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡标记分子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2) mRNA和蛋白表达水平的变化及差异,免疫细胞化学染色法检测各组细胞TRPC1的表达变化及差异情况。结果 CCK8结果显示,Nif、CsA和Nif+CsA均可促进HGF的增殖;实时荧光定量PCR和Western blot结果表明,Nif和CsA单独及联合作用于HGF后均可显著上调Bcl-2和TRPC1的表达,但PCNA的表达并没有显著变化;免疫细胞化学染色法结果提示,TRPC1在Nif和CsA单独及联合刺激的细胞中其表达量明显升高。结论 HGF在Nif和CsA单独及联合作用下,其TRPC1的表达量均明显上升,提示TRPC1可能在药物性牙龈增生的发病过程中发挥一定的作用。

加味大柴胡汤对阻塞性黄疸老年大鼠TRPC1表达的影响

目的探讨加味大柴胡汤在临床上辅助治疗老年阻塞性黄疸的理论机制。方法通过结扎胆总管的外科手术方法建立阻塞性黄疸老年大鼠模型,实验分为假手术组、模型组、加味大柴胡汤组,予以相应干预,分3、7、10 d共3个时间段,每组10只SPF级老年SD大鼠,在各时间段取老年大鼠肝组织及心脏血,检测AST、ALT及TBA;采用钙离子试剂盒检测老年鼠肝组织匀浆钙离子浓度;采用Western Blot法检测老年鼠肝组织TRPC1蛋白的表达,采用Tunel法观察肝细胞凋亡情况。结果造模成功后各时间点模型组、加味大柴胡汤组与假手术组比较,ALT、AST、TBA和Ca2+浓度均升高,且模型组上升更明显(P<0.01),模型组、加味大柴胡汤组的TRPC1的蛋白含量也均高于假手术组(P<0.01),且加味大柴胡汤组肝细胞的凋亡率低于模型组(P<0.01)。结论梗阻性黄疸老年大鼠TRPC1表达明显升高,加味大柴胡汤下调TRPC1的表达,可能是其降低钙超载,减少肝细胞凋亡的机制之一。

TRPC1/C4/C5通道调节胸主动脉平滑肌收缩作用研究

目的研究胸主动脉平滑肌瞬时受体电位离子通道(TRPC)家族C1/C4/C5三个亚型与大电导钙激活钾通道(BK Ca)蛋白相互作用差异,阐明TRPC1/C4/C5通道在激动剂引起的胸主动脉平滑肌收缩中的作用。方法采用瞬时转染小干扰RNA(siRNA)敲低昆明小鼠胸主动脉平滑肌组织中TRPC1、TRPC4、TRPC5蛋白表达并用免疫蛋白印迹实验检测其表达水平改变情况;通过离体血管实验检测内皮素1引起的血管收缩改变;采用免疫共沉淀实验检测TRPC1/C4/C5通道蛋白与BK Ca蛋白相互作用情况。结果瞬时转染特异性TRPC1/C4/C5 siRNA显著敲低昆明小鼠胸主动脉平滑肌中TRPC1/C4/C5蛋白表达;在内皮素1引起的胸主动脉环收缩中,TRPC1或TRPC5 siRNA处理组较对照组血管收缩显著增强,但TRPC4 siRNA处理组较对照组血管收缩显著减弱;免疫共沉淀结果显示,TRPC1可以共沉淀TRPC4、TRPC5和BKCa,同时,TRPC4可以共沉淀TRPC1,TRPC5可以共沉淀TRPC1、BKCa,但TRPC4不能共沉淀BKCa。结论TRPC1可以与TRPC4或TRPC5蛋白在小鼠胸主动脉平滑肌中组成异聚体通道,并且TRPC1-TRPC5两种蛋白组成的异聚体通道和BK Ca形成钙信号复合物调节血管平滑肌收缩。