LC-MS/MS定量检测小鼠尿液RNA氧化标志物8-oxoGsn

目的建立快速高效的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)用于测定小鼠尿液中RNA氧化标志物8-氧化鸟苷(8-oxoGsn)水平。方法小鼠尿液37℃孵育离心后,用70%甲醇溶液(含30%10 mmol/L醋酸铵)1∶10稀释尿液上清,加入同位素内标[13C,15N2]8-oxoGsn,用Agilent ZORBOX SB-Aq色谱柱(100 mm×3 mm,1.8μm)分离,以含0.1%甲酸的10 mmol/L醋酸铵水溶液及甲醇溶液为流动相梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 mL/min,进样量5μL,电喷雾离子源正离子模式,多反应监测。结果8-oxoGsn响应和水平的线性关系良好,R^(2)为0.996,定量检测限为0.25 ng/mL,加标回收率86.21%~112.56%,基质效应为-5.01%,日内和日间变异系数分别为3.38%~7.17%、2.74%~9.52%,满足生物样品的分析要求;小鼠尿液检测结果显示C57小鼠对乙酰氨基酚(APAP)处理组8-oxoGsn水平明显高于C57对照组(P<0.01);乙型肝炎病毒转基因(HBV-Tg)小鼠APAP处理组8-oxoGsn水平明显高于HBV-Tg小鼠对照组(P<0.001)。结论建立的LC-MS/MS灵敏度高,准确可靠,适用于小鼠尿液中8-oxoGsn水平的测定。

1565nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊对斑秃小鼠IFN-γ信号及NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例的影响

目的研究1565 nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊干预对斑秃小鼠干扰素-γ(IFN-γ)信号与NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞的影响。方法将50只雄性C3H/HeJ小鼠随机分为正常组、模型组、点阵激光组、侧柏叶酊组及点阵激光联合侧柏叶酊组,每组10只。除正常组外,其余组小鼠均采用环磷酰胺诱导斑秃。在造模期间,点阵激光组给予1565 nm非剥脱点阵激光治疗;侧柏叶酊组给予5%侧柏叶酊在脱毛部位轻微按摩2~3 min;点阵激光联合侧柏叶酊组给予1565 nm非剥脱点阵激光及5%侧柏叶酊按摩治疗。观察各组小鼠皮肤状态和毛发生长情况;实验第7天取血,流式细胞术检测血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例,Western blot法检测毛囊组织中IFN-γ及其受体IFNGR1和IFNGR2表达情况。结果模型组小鼠斑秃部位的毛发出现断裂、变细,裸露皮肤表面出现黑点;各干预组斑秃情况均较模型组轻,其中点阵激光联合侧柏叶酊组最轻。模型组血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例和毛囊组织中IFN-γ、IFNGR1、IFNGR2蛋白相对表达量均明显高于正常组(P均<0.05)。点阵激光组、侧柏叶酊组仅毛囊组织中IFN-γ蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),点阵激光联合侧柏叶酊组血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例和毛囊组织中IFN-γ、IFNGR1、IFNGR2蛋白相对表达量均明显低于模型组及点阵激光组、侧柏叶酊组(P均<0.05)。结论1565 nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊外用可通过抑制IFN-γ信号通路和NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞的积累,从而有效改善斑秃。

CD8^(+)CD28^(-)T细胞对单倍型造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的:探讨CD8^(+)CD28^(-)T细胞对单倍型造血干细胞移植(haplo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响。方法:回顾性分析60例行haplo-HSCT的血液病患者移植后CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数与aGVHD的关系,并比较不同CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数组间慢性移植物抗宿主病(cGVHD)、感染及预后的差异。结果:60例行haplo-HSCT患者中有40例发生aGVHD,发生率为66.67%,中位发生时间为32.5(20-100)天。Haplo-HSCT后30天,aGVHD组CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数显著低于无aGVHD组(P=0.03)。ROC曲线表明移植后30天CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数在一定程度上可预测aGVHD的易感性。移植后30天低细胞计数组(CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数<0.06/μl)患者的aGVHD发生率显著高于高细胞计数组(CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数≥0.06/μl,P=0.011)。多因素Cox回归分析进一步验证了移植后30天CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数是aGVHD发生的独立风险因素,低细胞计数组aGVHD的发生风险是高细胞计数组的2.222倍(P=0.015)。不同CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数组间cGVHD、真菌感染、EB病毒感染、巨细胞病毒感染的发生无统计学差异。不同CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数组的总生存率、非复发相关死亡率、复发率没有显示出明显的统计学差异。结论:行haplo-HSCT后30天CD8^(+)CD28^(-)T细胞延迟重建的患者更易发生aGVHD,并且CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数在一定程度上可预测其易感性。单倍型造血干细胞移植后CD8^(+)CD28^(-)T细胞绝对计数与cGVHD、真菌感染、EB病毒感染、巨细胞病毒感染无关,且与移植后的生存预后无显著相关。

黄芪-莪术对Lewis肺癌小鼠肿瘤血管及肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞的影响

目的 通过观察黄芪-莪术对肿瘤血管及肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞及IFN-γ的影响,探讨黄芪-莪术促进肿瘤血管正常化的作用及其与调控CD8^(+)T细胞分化和IFN-γ释放的关系。方法 采用Lewis肺癌移植瘤小鼠模型,分为模型组、贝伐单抗组、PD-1抗体组与黄芪-莪术组共4组,每组各10只,分别给予无药溶剂或相应药物,连续14 d。第14天给药后超声造影观测各组小鼠肿瘤组织血流灌注情况,第15天取材经免疫荧光观测肿瘤组织血管结构,流式细胞术检测肿瘤组织中CD8^(+)T细胞情况,酶联免疫吸附试验检测肿瘤组织内免疫因子干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白介素-2(Interleukin-2,IL-2)及血管内皮生长因子A(Vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、促血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloprotein-9,MMP-9)和整合素αvβ3(Intergrin αvβ3)含量,进行统计学分析。结果 与模型组比较,各用药组肿瘤体积增长较为缓慢(P<0.05),而黄芪-莪术组与贝伐单抗组相当,均优于PD-1抗体组(P<0.05)。超声检测显示,与模型组比较,各用药组肿瘤组织内造影剂呈现快进快出,黄芪-莪术组及贝伐单抗组与模型组比较上升支斜率大、达峰时间短,差异有统计学意义(P<0.05),说明血流灌注增速;黄芪-莪术组较PD-1抗体组上升支斜率大、达峰时间短(P<0.05),贝伐单抗组较PD-1抗体组达峰时间短(P<0.05)。免疫荧光检测显示,与模型组比较,各用药组肿瘤组织微血管密度降低、周细胞覆盖率提升(P<0.05)。流式细胞术检测显示,与模型组比较,黄芪-莪术组与PD-1抗体组CD28^(+)TCF^(+)细胞和CD8^(+)IFN-γ^(+)细胞比例均增加(P<0.05),贝伐单抗组较模型组CD28^(+)TCF^(+)细胞和CD8^(+)IFN-γ^(+)细胞比例增加,但差异无统计学意义(P>0.05);与贝伐单抗组比较,黄芪-莪术组升高CD8^(+)IFN-γ^(+)细胞比例更多(P<0.05),PD-1抗体组升高CD28^(+)TCF^(+)细胞比例更多(P<0.05);与PD-1抗体组比较,黄芪-莪术组CD28^(+)TCF^(+)细胞比例较低,CD8^(+)IFN-γ^(+)细胞比例较高,但差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测结果显示,与模型组比较,除贝伐单抗组IL-2水平外差异无统计学意义(P>0.05),各用药组肿瘤组织内VEGFA、Ang-2、整合素αvβ3、MMP-9水平均降低(P<0.01),免疫因子IFN-γ、IL-2水平均升高(P<0.05)。结论 黄芪-莪术能促进肿瘤血管正常化,抑制肿瘤生长,其机制可能与其促进肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞向CD28^(+)TCF^(+)细胞分化、增加CD8^(+)IFN-γ^(+)细胞比例和IFN-γ含量有关。

Tim-3靶向CD8^(+)T细胞调控TNF-α/IL-22/STAT3通路加重自身免疫性肝炎小鼠肝损伤

目的探讨T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域的分子3(Tim-3)对自身免疫性肝炎的影响及其机制。方法将30只小鼠分为3组:空白组、模型组和模型+Tim-3阻断组,每组10只。空白组经尾静脉注射等量生理盐水;其他两组尾静脉注射10 mg/kg刀豆蛋白A建立自身免疫性肝炎小鼠模型,造模成功后模型+Tim-3阻断组每天1次腹腔内注射液0.1 mg/ml Tim-3,注射7 d。HE染色观察小鼠肝组织病理改变;全自动生化分析仪检测血清AST、ALT;酶联免疫吸附法检测IL-22、TNF-α水平;流式细胞分析肝组织CD8^(+)T比例;实时荧光定量PCR检测肝组织Tim-3、IL-22、TNF-α、STAT3 mRNA相对表达;免疫印迹试验检测肝组织Tim-3、IL-22、TNF-α、STAT3蛋白相对表达。结果空白组小鼠肝脏组织无变化;模型组肝脏组织大面积性肝炎;模型+Tim-3阻断组见显著淋巴细胞浸润与大量空泡。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组ALT、AST、IL-22、TNF-α水平均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组ALT、AST、IL-22、TNF-α水平升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组CD8^(+)T细胞比例表达均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组CD8^(+)T细胞比例下降(P<0.05)。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组Tim-3、IL-22、TNFα、STAT3 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组Tim-3 mRNA及蛋白表达下降,IL-22、TNF-α、STAT3 mRNA及蛋白相对表达升高(P<0.05)。结论阻断Tim-3可下调CD8^(+)T细胞,促进TNF-α/IL-22/STAT3炎症信号表达,加重自身免疫性肝炎小鼠肝损伤。

PD-1抗体调节糖尿病大鼠CD8^(+)T细胞和Treg平衡促进糖尿病足溃疡愈合的疗效研究

目的:探讨PD-1抗体治疗糖尿病大鼠足溃疡的疗效及其作用机制。方法:将30只6~8周龄健康Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只,三组大鼠足部人为造成溃疡创口。采用流式细胞术计数三组大鼠脾脏中CD8^(+)T细胞和调节性T细胞;Image J对创口照片进行分析计算伤口愈合率;HE染色和组织病理学分析溃疡创口处皮肤愈合情况;ELISA测定大鼠足部溃疡创口组织中TNF-α和IL-1β的水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠CD8^(+)T细胞计数明显下调,Treg细胞计数明显升高(P<0.05);模型组大鼠足部溃疡创口愈合不佳,没有形成完整的新生表皮组织和肉芽组织,未见胶原沉积;模型组大鼠创口处组织中TNF-α和IL-1β的水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,治疗组大鼠CD8^(+)T细胞计数明显回升,Treg细胞计数明显回落(P<0.05);治疗组大鼠足部溃疡创口愈合良好,有较为完整的新生表皮组织、肉芽组织和一定的胶原沉积;治疗组大鼠创口处组织中TNF-α和IL-1β的水平明显降低(P<0.05)。结论:应用人源化PD-1抗体治疗糖尿病大鼠足溃疡具有明显的疗效。

中医寒气对高脂饮食诱导肥胖模型小鼠脂肪组织TRPM8通路的影响

目的通过观察中医寒气对高脂饮食诱导肥胖型小鼠脂肪组织TRPM8的影响,探讨寒气减肥效应的作用机制。方法30只6~8周龄的雄性C57BL/6J野生型小鼠和TRPM8^(-/-)小鼠随机分为3组,分别为C57BL/6J 30℃组、C57BL/6J 4℃组、TRPM8^(-/-)4℃组。采用高脂饲养的方法复制肥胖型小鼠模型。所有小鼠首先饲养在温度为30℃、相对湿度为(55±15)%、室内风速0.1~0.2 m/s、光照周期12 h的笼子中4周,然后将C57BL/6J 4℃组、TRPM8^(-/-)4℃组小鼠转移至18℃的温度下适应性饲养1周,接着转移至4℃的低温饲养箱中饲养4周。作为对照组,C57BL/6J 30℃组小鼠始终在30℃环境下饲喂。9周后,取各组小鼠肩胛、附睾、腹膜脂肪组织并用HE染色法、免疫组织化学染色及Western blot法检测其TRPM8蛋白的表达。结果与C57BL/6J 4℃比较,TRPM8^(-/-)4℃组和C57BL/6J 30℃组肩胛和腹膜脂肪细胞数量显著减少(P<0.001),TRPM8蛋白的表达明显减少。结论中医寒气可诱导肥胖小鼠脂肪细胞TRPM8蛋白的高表达,影响脂肪代谢,有望成为减肥药物研发的新策略,TRPM8有望成为减肥药物研发的新靶点。

hKDR^(+/+)人源化及Rag1^(-/-)基因缺陷新型双靶点遗传修饰荷瘤小鼠模型的建立

目的通过增强血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)人源化小鼠(hKDR^(+/+))接纳不同来源的小鼠肿瘤细胞系的潜力,建立能支持多种肿瘤细胞系成瘤的、可评价针对VEGFR靶点药物的新型荷瘤小鼠模型。方法首先建立基于hKDR^(+/+)人源化小鼠模型评价针对VEGFR靶点抗体体内活性的方法,同时采用CRISPR/Cas9技术构建重组激活基因1(recombination activating gene 1,Rag1)敲除的C57BL/6N小鼠(命名为Rag1^(-/-)小鼠)。然后将Rag1^(-/-)小鼠与hKDR^(+/+)小鼠交配,筛选获得双基因纯合、双靶点基因修饰的hKDR^(+/+)/Rag1^(-/-)小鼠。最后在hKDR^(+/+)、Rag1^(-/-)、hKDR^(+/+)/Rag1^(-/-)和C57BL/6N小鼠上测试不同小鼠品系来源肿瘤细胞系的体内肿瘤生长差异。结果针对VEGFR靶点设计的抗体在hKDR^(+/+)小鼠体内表现出明显的抗肿瘤活性,与PBS组相比,肿瘤体积明显减小(P<0.01),肿瘤质量明显减轻(P<0.05)。Rag1^(-/-)小鼠、hKDR^(+/+)/Rag1^(-/-)小鼠的外周血B细胞和T细胞数量均明显减少(P<0.05,P<0.001)。C57BL/6小鼠来源的MC38细胞接种7 d后,在hKDR^(+/+)/Rag1^(-/-)、Rag1^(-/-)、C57BL/6N和hKDR^(+/+)四组小鼠体内均可见肿瘤生长。BALB/c小鼠来源的CT26细胞接种10 d后,仅在hKDR^(+/+)/Rag1^(-/-)和Rag1^(-/-)小鼠体内见到肿瘤生长,在C57BL/6N及hKDR^(+/+)小鼠中均未见肿瘤生长;接种后3周,hKDR^(+/+)/Rag1^(-/-)小鼠的成瘤体积明显大于Rag1^(-/-)小鼠(P<0.01)。结论获得了Rag1基因敲除小鼠,并进一步筛选获得新型hKDR^(+/+)/Rag1^(-/-)双靶点基因修饰小鼠模型;Rag1基因缺失时,不同品系小鼠来源的肿瘤细胞系更易成瘤。这提示可以通过降低hKDR^(+/+)人源化小鼠的免疫反应能力,增强或扩大该模型小鼠接纳肿瘤细胞系的范围,构建多种可用于评价VEGFR靶点药物的荷瘤小鼠模型。

BRAF、TP53、Pax8-PPARγ在甲状腺癌中的表达及疗效预测价值

目的探讨肿瘤蛋白P53(TP53)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BRAF)、配对盒基因8-过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Pax8-PPARγ)在甲状腺癌中的表达及疗效预测价值。方法将2020年4月至2022年4月该院收治的150例甲状腺癌患者纳入研究。检测患者甲状腺癌组织及癌旁组织中TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA的表达水平,分析其与临床病理因素的关系,基于受试者工作特征(ROC)曲线及决策曲线分析TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA表达水平预测^(131)I治疗效果的价值。结果甲状腺癌组织中的TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。甲状腺癌患者淋巴结转移、肿瘤最大径、包膜浸润与TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA表达水平有关(P<0.05)。采用放射性^(131)I清除术后残留的甲状腺组织(简称清甲)失败患者组织TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA表达水平均高于清甲成功患者(P<0.05)。ROC曲线分析显示,TP53、BRAF、Pax8-PPARγmRNA联合预测甲状腺癌患者清甲失败的曲线下面积优于三者单独预测(P<0.05)。决策曲线显示,三者联合预测甲状腺癌清甲失败发生的净收益率优于单一预测(P<0.05)。结论TP53、BRAF、Pax8-PPARγ在甲状腺癌组织中呈高表达,联合检测有助于预测^(131)I治疗效果,为临床确定合理治疗方案及时机提供参考。

补阳还五汤对Cav-1^(-/-)小鼠脑缺血后m^(6)A修饰和血管新生的影响

目的观察补阳还五汤对小窝蛋白1基因敲除(Cav-1^(-/-))小鼠脑缺血后N6-甲基腺苷(m^(6)A)修饰和血管新生的影响,探讨其可能的作用机制。方法将72只雄性野生型(WT)小鼠及Cav-1^(-/-)(KO)小鼠分别随机分为对照组、模型组和补阳还五汤组,采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,补阳还五汤组予补阳还五汤(18.5 g/kg)灌胃,对照组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续7 d。对小鼠进行神经行为学评分,试剂盒检测缺血侧皮质m^(6)A水平,HE染色观察缺血侧皮质病理变化,免疫荧光双标法检测缺血侧皮质血管新生情况,RT-qPCR检测缺血侧皮质甲基转移酶样3(METTL3)、甲基转移酶样14(METTL14)、肾母细胞瘤1相关蛋白(WTAP)、肥胖相关蛋白(FTO)及AlkB同系物5(ALKBH5)mRNA表达。结果与同基因型对照组比较,WT、KO模型组小鼠神经行为学评分及缺血侧皮质m^(6)A水平明显升高(P<0.01),缺血侧皮质出现病理形态损伤,血管性血友病因子(VWF)/Ki-67双标阳性细胞数明显增加(P<0.01),KO模型组小鼠缺血侧皮质WTAP mRNA表达明显升高(P<0.01),FTO和ALKBH5 mRNA表达明显下降(P<0.01);与同基因型模型组比较,WT、KO补阳还五汤组小鼠神经行为学评分及m^(6)A水平明显降低(P<0.01,P<0.05),缺血侧皮质病理形态损伤改善,VWF/Ki-67双标阳性细胞数目明显增加(P<0.05),KO补阳还五汤组小鼠缺血侧皮质WTAP mRNA表达明显降低(P<0.01),FTO和ALKBH5 mRNA表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。WT模型组和WT补阳还五汤组各项指标优于KO组(P<0.01,P<0.05)。结论补阳还五汤可能通过Cav-1调控脑缺血小鼠m^(6)A修饰和血管新生,从而发挥保护脑缺血损伤作用。

MOF-1和Tb@MOF-1荧光探针的设计、合成及对痕量Cr_(2)O_(7)^(2-)、S_(2)O_(8)^(2-)离子的识别

采用5-((4-吡啶基)甲氧基)-异烟酸(H2PLIA)、1,3,5-三(1-咪唑基)-苯(TIB)合成了金属有机骨架[Cd(PLIA)(TIB)]n(MOF-1)。MOF-1是具有理想一维孔道的二维结构化合物,其一维孔道由柔性三角形PLIA^(2-)配体和刚性三角形TIB配体间隔形成。利用MOF-1易掺杂的优势,采用后修饰合成策略制备了Tb@MOF-1。对MOF-1和Tb@MOF-1进行了基本表征及荧光探针性能研究。2种探针材料具有相同的结构。MOF-1和Tb@MOF-1分别对水溶液中的Cr_(2)O_(7)^(2-)和S_(2)O_(8)^(2-)离子具有较强荧光识别能力,均有响应时间快,稳定性、选择性、灵敏度高的特点。研究了MOF-1和Tb@MOF-1对Cr_(2)O_(7)^(2-)和S_(2)O_(8)^(2-)的荧光识别机理,其不同可能与Tb^(3+)离子掺杂有关。

^(125)I-白细胞介素-8在小鼠体内的分布研究

为了解白细胞介素 - 8的体内行为 ,用 Bolton- Hunter法对 IL- 8进行 1 2 5I标记 ,并测定它在小鼠体内的分布 ;得到了 1 2 5I- IL- 8在小鼠血、心、肝、肺、肾、骨、脾等脏器中的分布以及它在血液中的快相半排期 T1 /2α为 0 .3 2 h和慢相半排期 T1 /2β为 8.0 1h。1 2 5I- IL-

肺癌细胞外泌体miR-24-3p调控CD8^(+)T细胞抗肿瘤的功能及机制研究

目的:探究肺癌细胞外泌体miR-24-3p调控CD8^(+)T细胞抗肿瘤的功能及机制。方法:将16HBE exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo、miR-NC exo、miR-24-3p exo与CD8^(+)T细胞共孵育(16HBE exo组、A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组、miR-NC exo组、miR-24-3p exo组),与PBS共孵育组(PBS组)作为对照,CD8^(+)T与miR-24-3p exo共孵育后转染FGF11质粒(miR-24-3p exo+FGF11组)。CCK8法检测CD8^(+)T细胞的增殖能力。双荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p和FGF11的靶向关系。将各组CD8^(+)T细胞与A549细胞以20∶1的比例共孵育4 h(16HBE exo/CD8^(+)T组、A549 exo/CD8^(+)T组、H522 exo/CD8^(+)T组、H460 exo/CD8^(+)T组、miR-NC exo/CD8^(+)T组、miR-24-3p exo/CD8^(+)T组、PBS/CD8^(+)T组、miR-24-3p exo+FGF11/CD8^(+)T组),Elisa检测共孵育后细胞上清中INF-γ和IL-2的浓度,LDH法检测CD8^(+)T细胞对A549细胞的杀伤能力。结果:相比于PBS组,A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组CD8^(+)T细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。A549 exo/CD8^(+)T组、H522 exo/CD8^(+)T组、H460 exo/CD8^(+)T组细胞上清中INF-γ和IL-2的浓度显著下降(P<0.001),CD8^(+)T细胞杀伤能力亦显著下降(P<0.001)。双荧光素报告基因检测结果显示FGF11为miR-24-3p的靶基因。miR-24-3p exo组CD8^(+)T细胞增殖能力显著低于miR-NC exo组,miR-24-3p exo+FGF11组CD8^(+)T细胞增殖能力显著高于miR-24-3p exo组(P<0.05)。miR-24-3p exo/CD8^(+)T组细胞上清中INF-γ和IL-2浓度及CD8^(+)T细胞杀伤能力均显著低于miR-NC exo/CD8^(+)T组(P<0.001), miR-24-3p exo+FGF11/CD8^(+)T组细胞上清中INF-γ和IL-2浓度及CD8^(+)T细胞杀伤能力显著高于miR-24-3p exo/CD8^(+)T组(P<0.001)。结论:肺癌细胞外泌体miR-24-3p可通过靶向抑制FGF11而抑制CD8^(+)T细胞的抗肿瘤功能。

大黄素对口腔鳞癌模型大鼠中TRPM8、LRG-1、SPHK1表达影响实验研究

目的:观察大黄素对口腔鳞癌模型大鼠中TRPM8、LRG-1、SPHK1表达影响的实验。方法:将42只健康WISTAR大鼠分为正常对照组、模型对照组、大黄素组各14只,模型对照组以及大黄素组以给予5 g/L 4-NQO涂于口腔腭黏膜以建立口腔鳞癌模型大鼠,正常对照组不涂抹,正常饲养。大黄素组于模型建立后开始给予大黄素2.5 mg/100 g腹腔注射,每6 h 1次,连续给药48 h。其余两组给予生理盐水腹腔注射,剂量与使用频率和大黄素组相同至实验结束。比较各组大鼠情况,癌症组织中TRPM8、LRG-1、SPHK1表达情况。结果:实验过程中正常对照组无大鼠死亡,模型对照组大鼠4只死亡,死亡发生率为28.57%;大黄素组1只死亡,死亡发生率为7.14%。治疗后,与正常对照组相比,模型对照组TRPM8、LRG-1、SPHK1阳性表达率较高(P<0.05);与模型对照组相比,大黄素组TRPM8、LRG-1、SPHK1阳性表达率较低(P<0.05),正常对照组与大黄素组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大黄素治疗口腔鳞癌具有良好的效果,可能与下调癌症组织TRPM8、LRG-1、SPHK1阳性表达有关,有望为临床治疗方面提供新的干预方法。

CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病合并纯红细胞再生障碍性贫血1例并文献复习

本文回顾性分析2021年3月山东大学附属威海市立医院收治的1例CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病(T-cell large granular lymphocyte leukemia,T-LGLL)合并纯红细胞再生障碍性贫血(Pure red cell aplasia,PRCA)患者的临床资料,并复习相关文献,以提高对CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T-LGLL合并PRCA的认知,从而减少临床中的误诊及漏诊。

LncRNA CCAT1调节miR-155表达增强CD8^(+)T细胞对食管癌抗肿瘤活性的机制研究

目的 研究长链非编码RNA结肠癌相关转录本1(long non-coding RNA colon cancer-associated transcript-1,LncRNA CCAT1)对CD8^(+)T细胞抗食管癌肿瘤活性的影响及其作用机制。方法 分离食管癌患者和健康受试者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),用qRT-PCR法分别检测PBMC中CCAT1和miR-155的表达。分别下调CCAT1和miR-155表达,采用流式细胞术检测CD8^(+)T细胞凋亡率,Western blot检测Cleaved Caspase 3蛋白表达,qRT-PCR检测IL-2 mRNA和IFN-γ mRNA基因表达,分析CD8+T细胞对食管癌细胞的杀伤作用。采用miRanda和双荧光素酶实验研究CCAT1与miR-155之间的相互作用。分析上调LncRNA CCAT1靶向miR-155对CD8^(+)T细胞凋亡率、杀伤作用及其Eca-109细胞增殖和迁移的影响。结果 食管癌患者PBMCs中CCAT1表达(2.58±0.28)高于健康受试者(1.35±0.34),miR-155表达(0.53±0.09)低于健康受试者(1.54±0.29),差异具有统计学意义(t=12.04,21.05,均P <0.05)。下调CCAT1后,CD8^(+)T细胞凋亡率(12.05%±0.28%)明显低于si-control组(19.86±0.45)%,CD8^(+)T细胞的细胞杀伤活性(0.49±0.05)%明显高于si-control组(0.34%±0.02%),差异具有统计学意义(t=9.82,-17.54,均P<0.05)。si-CCAT1组细胞内Cleaved Caspase 3蛋白表达(0.32±0.09)低于si-control组(1.37±0.72),IL-2 mRNA(2.38±0.47)和IFN-γ mRNA(3.28±0.26)表达高于si-control组(1.12±0.23,1.28±0.37),差异具有统计学意义(t=-20.05,-18.29,-19.86,均P<0.05)。CCAT1和miR-155之间存在互补碱基对,双荧光素酶实验结果显示CCAT1野生型和mi R-155模拟物共转染后miR-155 mimics组细胞荧光素酶活性(0.41±0.08)显著低于对照组(1.24±0.18),差异具有统计学意义(t=17.92,P<0.01)。下调miR-155后CD8^(+)T细胞凋亡率(24.87%±0.95%)明显高于inhibitor control组(18.24%±1.25%),CD8+T细胞的细胞杀伤活性(0.26%±0.06%)明显低于inhibitor control组(0.43%±0.05%),差异具有统计学意义(t=10.03,20.06,均P<0.05)。miR-155 inhibitor组细胞内Cleaved Caspase 3蛋白表达(1.07±0.23)高于inhibitor control组(0.42±0.02),IL-2 mRNA(0.73±0.26)和IFN-γ mRNA(0.54±0.18)表达低于inhibitor control组(1.39±0.08,1.16±0.24),差异具有统计学意义(t=18.75,19.27,18.35,均P<0.01)。上调CCAT1通过miR-155促进CD8^(+)T细胞凋亡并降低细胞杀伤活性,且促进了Eca-109细胞增殖和迁移。结论 LncRNA CCAT1在食管癌患者中表达显著上调,敲低CCAT1通过调节miR-155表达可抑制CD8^(+)T细胞凋亡,增强细胞的抗肿瘤活性。

17β-雌二醇对成年大鼠脑缺血区VCAM-1和CD_8^+淋巴细胞的影响

目的研究17β-雌二醇(E_2)对切除双侧卵巢(OVX)大鼠脑缺血区VCAM-1的表达和CD_8^+淋巴细胞活化、浸润的影响。方法利用42只SD大鼠制作大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型,缺血90min后再灌注并用E_2治疗3d或7d时制作冰冻切片,行HE染色、TTC染色、VCAM-1和CD_8抗原的免疫组化染色,显微镜下观察染色结果。结果E_2可以减少OVX大鼠脑梗死体积比,减轻缺血后神经组织损害的程度,使残存细胞数目增加,并能抑制VCAM-1和CD_8分子的表达。结论E_2对缺血脑组织具有一定的保护作用,抑制VCAM-1的表达和CD_8^+淋巴细胞的活化、浸润可能是其机制之一。

MIP-1α联合IL-8对小鼠CD34^+细胞体外增殖的影响

目的 了解巨噬细胞炎症蛋白 1α(macrophageinflammatoryprotein 1α ,MIP 1α)联合白细胞介素 8(interleukin 8IL 8)体外对小鼠CD34+ 细胞增殖的影响。方法 采用免疫磁珠吸附法分离小鼠CD34+ 细胞 ,将标本分为MIP 1α和IL 8各 1ng/ml组 ,10ng/ml组 ,5 0ng/ml组和空白组 ,建立液体培养体系及半固体培养体系 ,体系中分别加入相应浓度的MIP 1α和IL 8(空白组不加 ) ,培养一定时间后 ,观察各组的细胞生长情况 ,并作液体培养体系中细胞的周期分布检测。结果 1ng/ml浓度的MIP 1α与相同浓度的IL 8联合使用 ,对小鼠CD34+ 细胞的体外增殖没有明显的影响 ,与空白组比较P >0 .0 5 ;10ng/ml和 5 0ng/ml浓度下 ,两者联合使用 ,则能明显抑制小鼠CD34+ 细胞的体外增殖 ,与空白组比较P <0 .0 1。但这两个浓度组相互比较却无显著差异 ,P >0 .0 5。周期分析结果表明 ,10ng/ml组和 5 0ng/ml组的G0 /G1期细胞均明显多于空白组和 1ng/ml组 ,P <0 .0 1,10ng/ml组与 5 0ng/ml组、1ng/ml组与空白组之间无显著差异 ,P >0 .0 5。结论 较低浓度下的MIP 1α联合IL 8,在体外能明显抑制小鼠CD34+ 细胞的增殖。

脓毒症大鼠应激性高血糖与IL-10及CD4^+、CD8^+ T细胞相关性研究

目的探讨脓毒症大鼠血糖与抗炎-免疫调节因子白细胞介素-10(IL-10)及CD4^+、CD8^+T细胞的相关性。方法 46只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(n=18)、脓毒症组(n=28)。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型,制模后脓毒症组分为6、12、18 h 3个亚组。采用ELISA法检测血清IL-10、TNF-α水平;葡萄糖脱氢酶法快速检测大鼠尾静脉血糖,流式细胞仪测定全血中CD4^+、CD8^+T细胞比例;全自动血细胞分析仪检测外周血白细胞计数(WBC)、中性粒细胞绝对值(Neu)、淋巴细胞绝对值(Lym)变化;对不同时间点血糖与IL-10、TNF-α水平及CD4^+、CD8^+T细胞之间进行Pearson直线相关性分析,并进行多元线性回归分析。结果与假手术组相比,脓毒症组制模后各时间点血糖、IL-10、TNF-α、WBC、Neu绝对值均显著升高(P <0. 05); Lym绝对值及CD4^+、CD8^+T细胞比例明显降低(P <0. 05);脓毒症组血糖、Lym绝对值及CD4^+、CD8^+T细胞比例均随制模时间延长降低,IL-10则持续升高(P <0. 05),而TNF-α、WBC、Neu绝对值于12 h升至峰值后逐渐降低(P <0. 05);脓毒症组血糖与IL-10及CD4^+、CD8^+T细胞均存在相关性;进一步多元线性回归分析显示血糖与CD4^+、CD8^+T细胞呈独立相关(P <0. 05)。结论抗炎-免疫调节因子IL-10对脓毒症相关应激性高血糖具有双向调节作用。脓毒症应激性高血糖与T淋巴细胞功能密切相关,在脓毒症应激早期,增高的血糖对免疫细胞有一定的保护作用;随着脓毒症的发展,IL-10参与介导了血糖与免疫细胞的相互抑制。