TRPV亚型mRNA在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠膀胱的表达

目的研究在链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型的膀胱中瞬时感受器电位V型(TRPV)亚型的mRNA水平是否发生改变,并探究改变的TRPV亚型的mRNA水平是否对糖尿病引起的膀胱功能障碍有影响。方法雄性Wistar大鼠随机分成STZ诱导的糖尿病组,5%蔗糖水诱导的多尿组以及正常对照组。于诱导糖尿病后2,4,8,16和24周进行相关检查。通过尿流动力学检查对膀胱功能进行评价;应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测膀胱组织中TRPV亚家族mRNA的表达水平。结果与其他2组相比,除了糖尿病诱导后2周外,其他时间点糖尿病组TRPV1和TRPV4的mRNA水平明显降低;糖尿病组的TRPV2mRNA水平明显高于其他2组,糖尿病诱导后的24周除外;糖尿病诱导后的4,8周的糖尿病组TRPV3mRNA水平以及诱导后2,4,8周的糖尿病组TRPV5mRNA水平明显高于其他2组,在诱导后16,24周糖尿病组TR-PV3和TRPV5mRNA水平明显低于其他2组;在大鼠膀胱中没有TRPV6mRNA的表达。结论由于糖尿病的影响,大鼠膀胱中TRPV亚型的mRNA水平发生了显著变化,这些变化很可能促成了糖尿病大鼠的膀胱功能障碍的发生。

瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)在心血管系统中的作用

TRPV1是辣椒素特异性受体,与配体结合后被激活,导致以钙离子为主的跨膜离子流动,使细胞内Ca^(2+)浓度改变,进而参与痛觉整合、心血管系统调节、抗炎症反应、听力调节、胃肠功能等多种病理生理过程。

麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘大鼠IL-6/STAT3信号通路及TRPV1感受器的影响

【目的】探讨麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘(CVA)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只大鼠随机分为正常组,模型组,麻杏石甘汤低、高剂量组,麻杏石甘汤高剂量+信号转导和转录激活因子3(STAT3)激活剂Colivelin(Col)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用腹腔注射卵清蛋白结合艾条熏蒸法构建CVA模型。对应治疗后,观察大鼠体征和咳嗽次数,肺功能仪检测气道阻力(RE),Diff-Quik染色计数嗜酸性粒细胞(EOS),苏木素-伊红(HE)染色法观察肺、支气管组织病理学特征,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肺组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western Blot法检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、STAT3、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)蛋白表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠出现明显哮喘症状,肺组织可见炎性细胞浸润严重,支气管上皮细胞坏死、纤毛粘连、黏液多,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量,以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,麻杏石甘汤低、高剂量组大鼠哮喘症状明显改善,肺及支气管损伤减轻,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05);与麻杏石甘汤高剂量组比较,麻杏石甘汤高剂量+Col组大鼠哮喘加重,肺及支气管损伤加重,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】麻杏石甘汤可有效改善CVA大鼠症状,其机制与抑制IL-6/STAT3信号通路及TRPV1高表达有关。

靶向TRPV1通道的镇痛剂研究进展

瞬时受体电位香草酸亚型1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)通道广泛分布于感觉神经末梢、中枢神经系统和其他组织,是响应热痛和化学刺激的离子通道蛋白。近年来,TRPV1受体作为治疗各种疼痛相关疾病的潜在方法引起了人们的广泛关注。本文探讨疼痛治疗中的TRPV1激动剂和拮抗剂,根据其结构特征进行分类和阐述,并对配体的结合模式、构效关系、优势和局限性进行讨论,为今后开发更安全有效的TRPV1镇痛剂提供参考。

不同艾灸对大鼠血管舒缩功能调节与TRPV1 mRNA关系的研究

目的:通过观察不同艾灸方法对大鼠血管舒缩功能的影响及其与瞬时受体电位香草亚型-1(TRPV1)mRNA表达的关系,探讨艾灸血管效应机制。方法:将30只SD大鼠随机分为瘢痕灸组(10只)、温和灸组(10只)、空白组(10只),按分组干预后,检测大鼠血清TXB_2、e-NOS含量及胸主动脉、肠系膜动脉TRPV1 mRNA的表达量。结果:血清TXB_2:温和灸组>瘢痕灸组>空白组(P<0.05),e-NOS:空白组>瘢痕灸组>温和灸组(P<0.05);与空白组比较,瘢痕灸组胸主动脉组织TRPV1 mRNA的相对表达量降低,肠系膜动脉组织升高,温和灸组胸主动脉组织降低,肠系膜动脉组织降低,其中,温和灸胸主动脉与肠系膜动脉两处组织表达量比较有统计学意义(P<0.05),且肠系膜动脉处两种灸法间表达量比较有统计学意义(P<0.05)。结论:艾灸可调控血管舒缩因子TXB_2与e-NOS,且温和灸效果可能强于瘢痕灸,其差异可能与不同灸法下TRPV1表达的差异相关,另外艾灸下不同部位TRPV1表达的差异可能是其血管效应的机制。

疏肝和胃方对胃食管反流大鼠模型背根神经节中TRPV1表达的影响

目的观察疏肝和胃方对胃食管反流大鼠模型背根神经节中内脏敏感因子瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)表达的影响,探讨其治疗胃食管反流病的机理。方法将40只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、中药组及西药组,每组10只,除正常组外均行贲门肌切开术加幽门半结扎术制备反流性食管炎模型,并分别给予相应干预措施。免疫组化法及实时荧光定量核酸扩增检测(QPCR)方法观察各组大鼠背根神经节TRPV1受体及TRPV1 m RNA的表达。结果与正常组相比,模型组、西药组大鼠背根神经节中TRPV1阳性表达明显增高(P<0.05);中药组与正常组比较无统计学差异(P>0.05);与西药组比较,中药组TRPV1阳性表达明显降低(P<0.05)。模型组背根神经节组织中TRPV1 m RNA表达水平明显高于正常组、中药组及西药组(P<0.05);中药组、西药组与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05);中药组与西药组比较,两组背根神经节组织中TRPV1 m RNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论疏肝和胃方可能通过抑制TRPV1过度表达来发挥其治疗胃食管反流病的作用。

瞬时感受器电位香草酸亚型1受体及其调节剂对神经病理性疼痛的作用研究进展

神经病理性疼痛(NPP)因其发病机制不清,药物治疗效果不佳,一直是困扰医学界的难题。随着分子生物学和电生理技术的发展,发现NPP的复杂病理机制与瞬时感受器电位香草酸亚型1(TRPV1)的激活相关。TRPV1受体主要在周围感觉神经元中表达,可接受外部和内部环境中的有害刺激,并将信息传递到中枢神经系统,从而在周围神经性疼痛中发挥重要作用。研究发现TRPV1调节剂通过阻断TRPV1的痛觉传递功能而发挥镇痛作用,是NPP的潜在治疗药物。本文对TRPV1受体介导的多种NPP模型,以及TRPV1调节剂在NPP治疗中的作用进行综述。

香草素能瞬变受体亚型-1表达细胞系的构建与鉴定

目的构建香草素能瞬变受体亚型-1(TRPV1)膜蛋白稳定表达的细胞系。用于咳嗽与TRPV1关系的研究,以及新型镇咳药物的开发。方法应用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞,热激转化,将pCDNA3-TRPV1质粒转入到大肠杆菌感受态细胞中扩增,通过聚乙二醇沉淀法纯化质粒,纯化的pCDNA3-TRPV1质粒用磷酸钙转染法转入HEK293细胞。荧光显微镜观察黄绿色荧光蛋白表达;用5μmol/L的CAP处理转染细胞7h,台盼蓝双染色计算细胞病死率,作为细胞表达的证据。结果经转化并培养后质粒大量扩增,酶切后获得目的基因片段大小约2650bp,大小符合目的基因。转染TRPV1的HEK293细胞在荧光显微镜下可清晰观察到黄绿色荧光。使用5μmol/L的辣椒素处理转染后细胞系7h,发现细胞病死率显著上升。结论 TRPV1在HEK293细胞中稳定表达,可用于构建"咳嗽细胞模型"。

脂质在TRPV1活性调节中的作用及机制

瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道是表达在细胞膜上主要通透Ca2+的非选择性阳离子通道,可被内源性和外源性因子激活,参与炎症、疼痛和瘙痒等生理病理过程。本文总结了几种脂质对TRPV1通道的调节作用,并从结构生物学研究所揭示的机制上展开讨论,以供参考。

射干麻黄汤及其辛、苦味药组拆方对寒哮大鼠气道炎症及肺组织TRPV1/TAS2R14表达的影响

目的:探讨射干麻黄汤辛、苦味药组对哮喘寒哮证大鼠肺组织中瞬时受体电位通道香草醛亚型1(TRPV1)、苦味受体14(TAS2R14)蛋白表达的影响。方法:70只SD大鼠随机分为正常组、模型组、射干麻黄汤组、辛味药组、苦味药组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组,10%卵清蛋白(OVA)结合氢氧化铝腹腔及四肢皮下注射致敏,联合2%OVA雾化及寒冷(2~4℃)刺激,激发大鼠寒哮模型。射干麻黄汤、辛味药、苦味药(6.43 g·kg^(-1))、地塞米松(0.5 g·kg^(-1))、桂龙咳喘宁组(10 g·kg^(-1))灌胃及雾化,空白组、模型组以等量生理盐水灌胃及雾化,持续干预3周。末次激发后,对大鼠肺组织进行苏木素-伊红(HE)、碘酸雪夫(PAS)、马松(Masson)染色观察气道炎症反应和细胞增殖情况。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-5(IL-5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))含量;免疫荧光法检测TRPV1、TAS2R14的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肺组织TRPV1、TAS2R14、磷脂酶Cβ(2 PLCβ_(2))、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠饮水、饮食及体质量下降,气道炎性细胞浸润、杯状细胞增生、组织纤维化及胶原蛋白沉积情况增多,血清IL-5、TNF-α、TSLP和TGF-β_(1)含量升高(P<0.01),TRPV1、PLCβ_(2)、α-SMA的表达增加、TAS2R14、Bcl-2的表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,射干麻黄汤、辛味药及苦味药物组大鼠饮水、饮食及体质量改善,气道炎性细胞浸润、杯状细胞增生、组织纤维化改变及胶原蛋白沉积情况减少;血清中IL-5、TNF-α、TSLP和TGF-β_(1)含量降低(P<0.01),TRPV1、PLCβ_(2)、α-SMA的表达减少,TAS2R14、Bcl-2表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论:射干麻黄汤及其辛、苦味药物组可以明显减轻OVA诱发的哮喘大鼠气道炎症,降低TRPV1、PLCβ_(2)、α-SMA蛋白表达,激活TAS2R14、Bcl-2蛋白表达,其中苦味药组较辛味药组佳,辛苦相合其疗效增强,达到配伍之效。提示射干麻黄汤及其辛、苦味药物组能够减轻OVA诱发的哮喘气道炎症可能与抑制辛味相关TRPV1蛋白及激活苦味相关TAS2R14蛋白相关。

瞬时受体电位香草酸亚型1在膀胱出口梗阻诱导逼尿肌过度活动中的作用

目的 研究瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）在膀胱出口梗阻诱导逼尿肌过度活动发生发展中的作用.方法 2014年6-12月.将雌性Wistar大鼠60只随机分成两组：实验组（n=40）和对照组（n=20）,实验组采用部分结扎近端尿道的方式构建逼尿肌过度活动（detrusor overactivivity,DO）大鼠模型,术后6周行膀胱尿动力学检测成模DO大鼠情况.取两组大鼠膀胱和脊髓背根神经节组织通过实时定量PCR、蛋白质印迹法和免疫组化染色检查检测TRPV1的表达情况;通过膀胱逼尿肌离体肌条实验检测逼尿肌收缩性能变化以及对TRPV1激动剂（辣椒素）的反应.结果 40只大鼠接受膀胱出口部分结扎,其中26只出现DO（为DO组）.在膀胱中,TRPV1受体主要表达于黏膜下层神经纤维末梢,而膀胱上皮未见明显的TRPV1表达.离体肌条实验中,DO组肌条收缩的振幅（0.69±0.11）g明显高于对照组（0.26±0.05）g,收缩频率（8.75±0.54） Hz也高于对照组（5.91±0.59） Hz,两组差异均有统计学意义（均P＜0.05）;辣椒素可明显增加肌条收缩幅度而对频率无明显影响,该效果在DO组更加明显.DO组大鼠膀胱中TRPV1水平（0.36±0.03）明显高于对照组（0.18±0.02）;DO组大鼠脊髓背根神经节中TRPV1水平（0.66±0.04）也明显高于对照组（0.41±0.05）,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 TRPV1参与BOO诱导的DO的发生,可能通过直接增加膀胱传人纤维敏感性或间接增加逼尿肌内在收缩活性从而诱导逼尿肌不稳定性的发生.

辣椒碱通过TRPV1诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制。方法:设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测辣椒碱(50,100,200,300,400,500,600,800,1 000μmol·L^(-1))处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预(200,400,800μmol·L^(-1))后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(200,400μmol·L^(-1))干预后TRPV1,肿瘤抑制蛋白p53,磷酸化p53(p-p53),抑癌基因[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)],活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3),cleaved Caspase-8,活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)的蛋白表达的影响;此外,利用微小RNA(mRNA)沉默技术作用TRPV1,观察200μmol·L^(-1)辣椒碱处理沉默TRPV1的SW480细胞凋亡率的变化,以及上述蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,辣椒碱50,100μmol·L^(-1)作用对细胞活性未出现显著影响,浓度在200μmol·L^(-1)以上时,随浓度增加细胞活性逐渐降低(P<0.01),呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱200,400,800μmol·L^(-1)处理可明显诱导细胞凋亡(P<0.05,P<0.01);200,400μmol·L^(-1)辣椒碱干预下,细胞生长表现为G_(2)/M期阻滞,800μmol·L^(-1)表现为G_(0)/G_(1)期阻滞(P<0.05);与空白组比较,辣椒碱200,400μmol·L^(-1)处理细胞能够明显上调上述凋亡途径中相关蛋白(p53,p-p53,Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-8,cleaved PARP)的表达(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.01);沉默TRPV1能明显抑制辣椒碱诱导的细胞凋亡及凋亡通路蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:辣椒碱可能通过TRPV1受体抑制SW480细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。

基于TRPV1通道分析诃子制草乌减轻H9c2心肌细胞毒性的作用机制

目的:探究瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道在诃子制草乌减轻心肌细胞毒性中的作用机制。方法:以体外培养的H9c2心肌细胞为模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌细胞中TRPV1 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,细胞核,活性氧(ROS),线粒体膜电位及钙离子(Ca^(2+))含量的变化。结果:与空白组比较,当质量浓度≥0.5 g·L^(-1)时,生草乌、诃子制草乌均可显著降低细胞活力(P<0.01),细胞中LDH漏出率,ROS及Ca^(2+)释放量增加,线粒体膜电位降低,细胞核固缩甚至是破碎。当质量浓度≥0.5 g·L^(-1)时,与同质量浓度生草乌组相比,诃子制草乌组细胞活力显著上升(P<0.01),细胞中LDH漏出率,ROS及Ca^(2+)释放量减少,线粒体膜电位升高,细胞核形态有所改善。与作用于未经处理的H9c2心肌细胞比较,同质量浓度的生草乌作用于TRPV1抑制剂BCTC预处理后的H9c2心肌细胞后,其细胞活力明显上升,细胞中LDH漏出率,ROS及Ca^(2+)释放量减少,线粒体膜电位升高,细胞核固缩程度得到改善;而同质量浓度的诃子制草乌作用于BCTC预处理后的H9c2心肌细胞,其细胞活力下降,细胞中LDH漏出率,ROS及Ca^(2+)释放量增加,线粒体膜电位降低。Real-time PCR结果表明,草乌和辅料诃子汤均能使心肌细胞中TRPV1 mRNA表达量增多,且呈现浓度依赖性。结论:生草乌可通过激活TRPV1通道诱导心肌细胞凋亡,引发心脏毒性;而诃子制草乌可通过TRPV1通道介导起到减毒作用,其减毒作用的发挥可能与诃子中的酸性成分和草乌中的生物碱协同作用于TRPV1通道有关。

电针对腹泻型肠易激综合征大鼠内脏敏感性及结肠NGF、TrkA、TRPV1表达的影响

目的:观察电针“天枢”“上巨虚”对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠精神状态、内脏敏感性及结肠组织神经生长因子(NGF)、酪氨酸激酶受体A(TrkA)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)表达的影响,探讨电针干预IBS-D的可能机制。方法:将36只雄性SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组和西药组,每组9只。模型组、电针组、西药组采用二硝基苯磺酸(DNBS)灌肠结合慢性束缚应激法建立IBS-D模型。电针组予电针双侧“天枢”“上巨虚”,疏密波,频率2 Hz/100 Hz,每次20 min;西药组给予匹维溴铵混悬液(15 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,均持续7 d。分别于造模前后及干预后观察各组大鼠体质量、24 h进食量和粪便含水量,采用腹壁回撤反射(AWR)法检测大鼠内脏敏感性;干预后,采用高架十字迷宫实验评估大鼠精神状态,免疫组化法、Western blot法检测结肠组织NGF、TrkA、TRPV1蛋白表达。结果:造模后,与空白组比较,模型组、电针组、西药组大鼠体质量及24 h进食量减少(P<0.05),AWR初次收缩潜伏期缩短、收缩波个数增多(P<0.05),粪便含水量增加(P<0.05)。干预后,与空白组比较,模型组高架十字迷宫实验开放臂停留时间比例(OT%)值降低(P<0.05),结肠组织NGF、TrkA、TRPV1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,电针组和西药组大鼠体质量及24 h进食量增加(P<0.05),AWR初次收缩潜伏期延长、收缩波个数减少(P<0.05),粪便含水量减少(P<0.05),OT%值升高(P<0.05),结肠组织NGF、TrkA、TRPV1蛋白表达降低(P<0.05)。结论:电针“天枢”“上巨虚”可缓解IBS-D模型大鼠焦虑抑郁状态,下调结肠组织NGF、TrkA、TRPV1表达,从而减轻其内脏敏感性,缓解IBS-D症状。