不同浓度同型半胱氨酸对内皮细胞TRPV1蛋白表达的影响

目的研究不同浓度同型半胱氨酸对内皮细胞TRPV1蛋白表达水平和细胞增殖的影响。方法将人脐静脉内皮细胞分别用不同浓度同型半胱氨酸(0、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、4、8和16mmol·L^(-1))及不同时间(6、12、24、36和48h)进行干预后用CCK-8检测细胞增殖及活性情况,选择合适的干预浓度进行下一步干预分组(0、0.1、0.5、1和2mmol·L^(-1)),Western blot检测TRPV1蛋白表达水平。结果 1)同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的增殖能力有抑制作用,光密度(OD)值从(1.03±0.12)下降至(0.22±0.01),且呈剂量效应关系(F=11.73,P=0.000);2)同型半胱氨酸在0.5mmol·L^(-1)开始、干预24h后对人脐静脉内皮细胞增殖具有抑制作用(P<0.05);3)不同浓度同型半胱氨酸干预后TPRV1蛋白表达及细胞增殖能力低于对照组(P<0.05)。结论同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制具有剂量效应关系;随同型半胱氨酸浓度增加,TRPV1蛋白表达水平下降,细胞增殖能力亦降低。

针灸治疗对疼痛动物模型中TRPV亚家族蛋白表达量影响的Meta分析

目的:本次研究通过Meta分析法分析针灸治疗对不同疼痛动物模型中TRPV表达量的影响。方法:文献检索PubMed、Embase、Web of Science、CNKI、Wanfang数据库,查找针灸疗法影响TRPV表达量的相关动物实验。对纳入的文献进行系统评价,进行Meta分析,旨在拓展针推疗法治疗各类疾病机制的证据,为后期研究提供参考。结果:共纳入文献的18篇,包括4篇英文文献,14篇中文文献,都采取了随机对照实验,未提及盲法的使用,18篇文献分别测量了TRPV家族不同蛋白的表达。将18篇文献数据提取出来,通过Meta分析发现,针灸疗法对于TRPV家族的表达下降,有统计学意义,但是18篇文献的异质性较高(SMD=-2.28,95%CI=-2.95~-1.61,P<0.01;异质性χ^(2)=404.04,I 2=90%,随机效应模型)。根据不同的动物模型分组,无论是炎性疼痛还是神经病理性疼痛,TRPV的表达下降都具有统计学意义,而癌性疼痛亚组中,针灸对于TRPV表达无统计学意义,并且3个亚组间的异质性较小;根据不同TRPV蛋白分组,分为4组,针灸对于TRPV1、TRPV4的表达下降有统计学意义,而对于TRPV2、TRPV3的表达无统计学意义。只有1篇文献检测了TRPV3的表达。结论:针灸镇痛临床疗效确切,针灸镇痛的机制与调节TRPV1和TPRV4的活性有关。

早发型重度子痫前期病人胎盘组织中TRPV6表达

目的探讨瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚家族6(TRPV6)在早发型重度子痫前期病人胎盘组织中的表达。方法选取正常妊娠及早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织各30例,应用免疫组织化学方法定性分析各组胎盘组织中TRPV6的分布和表达。结果 TRPV6在胎盘组织中的表达主要位于滋养层细胞的胞膜和胞浆,早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织中TRPV6的阳性表达率显著低于正常妊娠的孕妇(Z=6.45,P<0.01)。结论 TRPV6与早发型重度子痫前期的发生有一定关系。

牛膝多糖通过阻断PPARγ/TRPV4通路抑制大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化

目的探讨牛膝多糖(ABPS)对骨髓间充质干细胞(BMSC)成脂分化的影响及作用机制。方法取5只SD大鼠处死后解剖并分离其BMSC,鉴定后贴壁传代培养至对数生长期,用不同剂量ABPS作用48 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,选择对BMSC生长无毒性的ABPS最高浓度进行后续实验。将细胞随机分为对照组、ABPS组、罗格列酮组和ABPS联合罗格列酮组,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测BMSC中甘油三酯(TG)水平,油红O染色观察BMSC中脂滴形成情况,实时定量PCR和Western blot法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、瞬时受体电位香草素通道蛋白4(TRPV4)、转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的mRNA和蛋白表达。结果ABPS≤200 mg/L作用BMSC 48 h对BMSC生长无明显毒性作用,400 mg/L ABPS组细胞存活率降低。与对照组比较,200 mg/L ABPS处理组细胞TG水平降低,PPARγ、TRPV4、C/EBPαmRNA和蛋白相对表达量降低,胞质脂滴数量减少,罗格列酮组细胞存活率降低,TG水平升高,PPARγ、TRPV4、C/EBPαmRNA和蛋白相对表达量升高,胞质脂滴数量增多;与ABPS组比较,ABPS联合罗格列酮组细胞存活率降低,TG水平升高,PPARγ、TRPV4、C/EBPαmRNA和蛋白相对表达量升高,胞质脂滴数量增多;与罗格列酮组比较,ABPS联合罗格列酮组细胞存活率升高,TG水平降低,PPARγ、TRPV4、C/EBPαmRNA和蛋白相对表达量降低,胞质脂滴数量减少。结论ABPS可以抑制BMSC成脂分化,可能与阻断PPARγ/TRPV4通路有关。

不同中药对青光眼小鼠视网膜TRPV4及TRAAK蛋白影响的比较研究

目的:比较不同中药对DBA/2小鼠视网膜TRPV4及TRAAK蛋白的影响。方法:将C57小鼠设为空白组,50只DBA/2小鼠随机分为10组,分别为:模型组,香附组、郁金组、柴胡组(疏肝解郁类),女贞子组、枸杞子组、牛膝组(补益肝肾类),川芎组、三七组、丹参组(活血行气类),每组各5只。喂养至7月龄后,分别予以0.9%氯化钠注射液、香附、郁金、柴胡、女贞子、枸杞子、牛膝、川芎、三七、丹参超微配方颗粒溶液灌胃28 d,采用免疫组化法、免疫荧光法、Western Blot检测视网膜上TRAAK、TRPV4蛋白表达情况。结果:与空白组相比,其余各组小鼠视网膜组织中TRAAK及TRPV4蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,其余各药物组视网膜组织中TRAAK及TRPV4蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。各类中药组组内比较:①疏肝解郁类:与郁金组相比,香附组和柴胡组视网膜组织中TRAAK及TRPV4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);②补益肝肾类:各组视网膜组织中TRAAK及TRPV4蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);③活血行气类:与川芎组相比,黄芪组和丹参组视网膜组织中TRAAK及TRPV4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:九味不同疗效中药均能通过降低视网膜TRAAK及TRPV4蛋白表达量发挥视神经保护作用。其中在柴胡、郁金、香附三味疏肝解郁中药中,以郁金作用最佳;在川芎、三七、丹参三味活血行气中药中,以川芎作用最佳。

基于TRPV1探讨黄五甘附膏治疗膝骨关节炎外周炎性痛敏的作用机制

目的:观察黄五甘附膏对阳虚寒凝证膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜组织瞬时受体电位锚蛋白1(TRPV1)受体表达、巨噬细胞极化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路调控作用,探讨其缓解KOA外周炎性痛敏的作用机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄五甘附膏高、中、低剂量组(9.3、4.65、2.325 g·kg^(-1))、塞来昔布组(208.2 mg·kg^(-1)),采用气候箱加游泳2周联合膝关节腔注射碘乙酸钠(MIA)建立阳虚寒凝证KOA大鼠模型,连续给药4周,观察各组大鼠一般情况,记录机械刺激缩足痛阈值(PWT)和关节直径,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)炎性因子表达;苏木素-伊红(HE)染色观察膝关节滑膜组织病理学改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠膝关节滑膜组织TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;免疫荧光(IF)测量评估M1/M2巨噬细胞极化情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠整体精神状态较差,自主活动减少,体质量偏低,关节直径增加,X射线提示关节边缘骨赘增生,关节面明显粗糙,关节腔间隙明显变窄,大鼠PWT显著降低(P<0.01),大鼠血清IL-1β、TNF-α、CGRP、NGF含量均显著升高(P<0.01),滑膜Krenn评分显著升高(P<0.01),TRPV1、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达显著升高(P<0.01),M1巨噬细胞占比和M1/M2显著升高(P<0.01),M2巨噬细胞占比显著降低(P<0.01);与模型组比较,黄五甘附膏低、中、高剂量体质量有不同程度上升(P<0.05,P<0.01),黄五甘附膏高剂量组和塞来昔布组大鼠膝关节直径减少(P<0.01),黄五甘附膏高、中剂量组PWT恢复较为明显(P<0.05),各给药组大鼠血清IL-1β和CGRP的含量都显著降低(P<0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏高剂量组大鼠血清TNF-α含量明显降低(P<0.05),黄五甘附膏中剂量组大鼠血清NGF含量明显降低(P<0.05),黄五甘附膏高剂量组滑膜Krenn评分明显降低(P<0.05),黄五甘附膏各剂量组大鼠滑膜组织中TRPV1和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达都显著下降(P<0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏各剂量组滑膜组织中M1巨噬细胞占比均降低(P<0.01),黄五甘附膏高剂量组M2巨噬细胞占比升高(P<0.05),黄五甘附膏中、高剂量M1/M2降低(P<0.05)。结论:黄五甘附膏可通过调控巨噬细胞极化减轻KOA炎症反应,减少炎性疼痛介质释放,同时还降低了TRPV1蛋白表达,其机制可能与p38 MAPK信号通路有关,从而达到改善KOA外周痛敏的效应。

金振口服液对脂多糖致大鼠感染后咳嗽的改善作用及机制研究

探讨金振口服液对大鼠感染后咳嗽的改善作用及机制研究。将60只SD雄性大鼠,除正常组外,采用鼻滴LPS、烟熏、辣椒素雾化激发来构建感染后咳嗽大鼠模型。造模成功后分为6组:正常组,模型组,氢溴酸右美沙芬口服液组(3.67 mL·kg^(-1)),金振口服液高、中、低剂量组(11.34、5.67、2.84 mL·kg^(-1))。于第19天开始,按照10 mL·kg^(-1)给药7 d。通过辣椒素雾化诱咳来测定大鼠的咳嗽次数及潜伏期,运用苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织形态变化,免疫组化法(IHC)检测肺组织中Trpv1、NGF、TrkA、p-p38 MAPK的定位表达,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中Trpv1、NGF、TrkA、p-p38 MAPK的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分析Trpv1、NGF、TrkA mRNA的转录水平。结果表明与正常组相比,模型组大鼠咳嗽次数明显增多,肺组织增生和炎性细胞浸润明显,肺组织中Trpv1、NGF、TrkA、p-p38 MAPK蛋白阳性表达均显著增强,Trpv1、NGF、TrkA mRNA的表达水平显著升高;与模型组比较,金振口服液可显著减少咳嗽次数,可减轻肺组织病理变化,减少肺组织中Trpv1、NGF、TrkA、p-p38 MAPK蛋白阳性表达,金振口服液高、中剂量组Trpv1、NGF、TrkA mRNA的表达水平显著降低。该研究揭示了金振口服液能有效抑制Trpv1通路相关蛋白改善感染后咳嗽。其机制可能与减少肺组织中NGF、TrkA、p-p38 MAPK的表达来降低Trpv1的表达和咳嗽敏感性有关。

破解人类感知之谜

戴维·朱利叶斯和阿尔登·帕塔普蒂安因发现TRPV1、TRPM8离子蛋白通道和PIEZO基因,“揭开了人类温度和触觉感受器的‘神秘面纱’”,荣获2021年诺贝尔生理学或医学奖。通过回顾2位科学家的成长经历、科研历程及在人类感知领域的研究成果,探讨了“痛感”对人体的利弊,分析了新科学仪器的应用与基础科研的关系。