基于TRPV1通路调控脊髓背角神经元痛敏化探讨《武威汉代医简》之瘀方治疗类风湿关节炎炎性疼痛

四肢关节疼痛是类风湿关节炎的首要症状,而炎症诱导的脊髓背角神经元痛敏化是导致类风湿关节炎炎性疼痛的重要原因。脊髓背角神经元痛敏化与细胞内外Ca^(2+)浓度密切相关,细胞内Ca^(2+)浓度的增加促进神经递质及受体表达,介导脊髓背角神经元痛敏化。TRPV1通路可通过调节细胞内Ca^(2+)浓度以减轻脊髓背角神经元痛敏化,是缓解类风湿关节炎炎性疼痛的重要靶点。《武威汉代医简》之瘀方具有活血定痛、温经散寒的作用,前期研究显示瘀方可缓解类风湿关节炎患者关节疼痛,现代药理学亦证明瘀方的重要组分能靶向抑制TRPV1通路发挥镇痛效应。基于此,从Ca^(2+)依赖性TRPV1通路调控脊髓背角神经元痛敏化的角度探讨瘀方治疗类风湿关节炎炎性疼痛,深入挖掘具有地域特色的古代医简宝藏,为临床运用瘀方治疗类风湿关节炎提供理论依据。

中药药性干预TRPV4-ATP-P2X3信号通路调控咳嗽作用机制进展

慢性咳嗽属于临床常见疾病,有寒咳和热咳之分,其发生机制尚不明确。中药治疗慢性咳嗽具有一定的优势,其用药原则符合寒者热之、热者寒之的中医理论思想。研究者发现TRPV4-ATP-P2X3信号通路与慢性咳嗽关系密切,通过药性理论阐述中药干预TRPV4-ATP-P2X3信号通路调控咳嗽的作用机理。

钙对染铅大鼠骨骼TRPV通路中相关基因mRNA表达的影响

目的研究不同剂量钙对染铅大鼠骨骼TRPV通路中相关基因mRNA表达的影响,从分子水平探讨其干预机制,为适量补钙预防铅中毒提供理论依据。方法选用(50±5)g的健康雄性SD大鼠60只,适应性喂养7d后,随机分为五组:对照组(基础饲料,去离子水)、染铅组(基础饲料,0.2%醋酸铅水)、试验Ⅰ组(基础饲料添加0.5%碳酸钙,0.2%醋酸铅水)、试验Ⅱ组(基础饲料添加1.0%碳酸钙,0.2%醋酸铅水)、试验Ⅲ组(基础饲料添加2.0%碳酸钙,0.2%醋酸铅水)。饲养60d后,采集大鼠后肢股骨,采用荧光定量RT-PCR法测定TRPV5、TRPV6、NCX1和PMCA1b基因的mRNA表达量。结果与对照组比较,染铅组TRPV5和TRPV6 m RNΑ表达量极其显著下降(P<0.01),而NCX1和PMCA1b m RNΑ表达量极显著上升(P<0.01);与染铅组比较,试验Ⅰ组TRPV5和TRPV6 m RNΑ表达量显著上升(P<0.05),而NCX1 m RNΑ表达量显著下降(P<0.05),试验Ⅱ组TRPV5和TRPV6 m RNΑ表达量极显著上升(P<0.01),而NCX1和PMCA1b m RNΑ表达量显著下降(P<0.01或P<0.05),试验Ⅲ组TRPV6 m RNΑ表达量显著上升(P<0.05),而NCX1 m RNΑ表达量显著下降(P<0.05)。结论适量钙的补充可减轻铅暴露对骨骼TRPV通路的干扰。

低分子肝素钠联合醋酸地塞米松基于PAR-2/TRPV1信号通路治疗小鼠瘙痒模型的有效性

目的基于蛋白酶激活受体2(PAR-2)/瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)信号通路探讨低分子肝素钠联合醋酸地塞米松治疗小鼠瘙痒模型的有效性。方法选取6周龄C57小鼠48只,采用随机数字表法将其中24只制成干皮症(AEW)慢性瘙痒小鼠模型,剩余24只制成DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型。将AEW慢性瘙痒、DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型均按照随机数字表法分为模型对照组、地塞米松组、肝素组、联合用药组,每组6只。模型对照组仅在小鼠脱毛部位给予0.9%氯化钠溶液;地塞米松组在小鼠脱毛部位涂抹醋酸地塞米松乳膏;肝素组在小鼠脱毛部位涂抹低分子肝素钠软膏;联合用药组在小鼠脱毛部位涂抹醋酸地塞米松乳膏、低分子肝素钠软膏。各组小鼠均持续干预7 d。比较各组小鼠干预前、干预7 d后瘙痒次数及PAR-2、TRPV1蛋白表达量。结果在AEW慢性瘙痒、DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型中,干预7 d后,联合用药组、肝素组、地塞米松组小鼠瘙痒次数均少于模型对照组,且联合用药组小鼠瘙痒次数少于肝素组、地塞米松组(P<0.05)。干预7 d后,在AEW慢性瘙痒小鼠模型中,肝素组、联合用药组TRPV1蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05);地塞米松组、肝素组、联合用药组PAR-2蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05)。干预7 d后,在DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型中,肝素组、联合用药组TRPV1、PAR-2蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05)。结论低分子肝素钠软膏可通过阻断PAR-2/TRPV1信号通路改善瘙痒症状,将其与醋酸地塞米松联合治疗对该通路的抑制效果更加显著。

肠三针介导TRPV1/CGRP信号通路对脓毒症肠道菌群紊乱影响

目的探讨肠三针介导瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)/降钙素基因及相关肽(CGRP)信号通路对脓毒症肠道菌群紊乱的影响。方法按随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、电针组,每组各20只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型,假手术组除不结扎盲肠外,其余手术步骤同其他2组,电针组于术前3 d以及术后6 h给予肠三针干预。收集结肠组织和血液标本,观察肠黏膜病理学变化。检测结肠肠道菌群及血液、淋巴结细菌移位情况,ELISA法检测血清炎症因子水平,Western Blot法检测结肠组织TRPV1、CGRP及Toll样受体-4(TLR-4)表达。结果模型组大鼠肠道菌群多样性降低,电针组较模型组增加(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠结肠中大肠杆菌含量显著增加,双歧杆菌和乳酸杆菌含量显著减少,血液和淋巴结移位率显著升高,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平显著升高,结肠组织TRPV1、CGRP和TLR-4相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠结肠中大肠杆菌含量显著减少,双歧杆菌和乳酸杆菌含量显著增加,血液和淋巴结移位率显著降低,血清TNF-α和IL-6水平显著降低,结肠组织TRPV1、CGRP和TLR-4相对表达量显著降低(P<0.05)。结论肠三针可显著增加脓毒症大鼠肠道菌群多样性及有益菌群含量,减少肠道细菌移位,降低炎症反应,其机制可能与调控TRPV1/CGRP信号通路有关。

基于TRPV4通路探讨针刀对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的观察针刀对膝骨关节炎(KOA)兔软骨香草素受体亚家族4(TRPV4)通路调控作用及软骨细胞凋亡的影响。方法选取6月龄健康雄性新西兰兔24只,采用随机数字表法分为空白组、模型组和针刀组,每组各8只。采用改良Videman法左后肢伸直位石膏固定6周制备KOA兔模型。针刀组选取经筋病灶点“鹤顶次”“髌外上”“髌内上”“髌外下”“髌内下”“阴陵上”行针刀松解治疗,每周1次,共治疗4次;空白组和模型组不予处理。采用苏木素-伊红(HE)染色及Mankin’s评分评价软骨形态学改变;采用原位缺口标记法(Tunel)检测软骨细胞凋亡率;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)检测软骨TRPV4、半胱氨酸天冬酰胺酶-3(Caspase-3)分子表达情况。结果与空白组比较,模型组软骨表面不光滑,部分缺损,细胞分布不均匀,潮线紊乱,Mankin's评分明显增高(P<0.05);细胞凋亡率及TRPV4、Caspase-3 mRNA和蛋白表达均明显提高(P<0.05)。与模型组比较,针刀组软骨表面较光滑,细胞排列较整齐,软骨细胞数量增多,潮线较完整,Mankin's评分明显降低(P<0.05);细胞凋亡率及TRPV4、Caspase-3 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论基于经筋理论针刀循膝周常见经筋病灶点松解能减少KOA兔软骨细胞凋亡,延缓软骨退变,其作用机制可能与抑制TRPV4通路,下调TRPV4、Caspase-3分子表达有关。

纳布啡对分娩大鼠PKCε/TRPV1信号通路及镇痛效果的影响

目的:探究纳布啡对分娩大鼠PKCε/TRPV1信号通路及镇痛效果的影响。方法:将30只孕鼠随机分为对照组、H-7组、纳布啡组,每组10只。制备硬膜外镇痛模型,分娩开始后分别给予生理盐水、H-7稀释液和纳布啡注射液泵注治疗。通过热水甩尾法、脊髓线粒体功能和还原型谷胱甘肽(GSH)水平观察镇痛效果;ELISA检测血清5-HT水平;免疫组织化学(IHC)检测脊髓k受体(KOR)表达;WB检测蛋白激酶C(Protein Kinase C, PKC)、瞬时受体电位香草酸亚型1(transicent receptor potential vanilloid 1, TRPV1)、TRP锚蛋白1(transicent receptor potential ankyrin 1, TRPA1)相对表达水平。结果:分娩镇痛后H-7组、纳布啡组大鼠痛阈值较对照组显著升高,血清5-HT水平降低(均P<0.01);干预后两组大鼠线粒体呼吸功能较对照组增强,线粒体内GSH水平显著升高(P<0.05,P<0.01);与对照组和H-7组比较,纳布啡组KOR表达量最高(均P<0.05);与对照组比较,H-7组、纳布啡组大鼠脊髓内PKCε、TRPV1、TRPA1蛋白表达受到显著抑制(均P<0.001)。结论:纳布啡对分娩大鼠具有有效镇痛效果,其镇痛机制可能与k受体激活、脊髓线粒体呼吸调节及PKC/TRPV1信号通路抑制有关。

沙利度胺调控TRPV-1通路兴奋性发挥镇痛作用

目的研究沙利度胺作为镇痛药发挥其镇痛效果的机制及TRPV-1通路在沙利度胺发挥其镇痛效果过程中的作用。方法采用过表达HEK293细胞和背根神经节(DRG)神经元,予以辣椒素激活受体,沙利度胺孵育。通过离子荧光成像测量技术,观察不同细胞不同干预因素下TRPV1通道变化;通过TRPV1基因敲除小鼠和C57小鼠,结合TRPV1通道抑制剂应用,分别予以沙利度胺干预,通过观察试验小鼠行为学变化,测量动物模型的痛觉改变。监测在不同的动物模型中,沙利度胺的镇痛效果及TRPV1通道参与沙利度胺的镇痛作用的机制。结果激动剂辣椒素激活细胞模型过程中,在300μmol/L沙利度胺预处理20 min,激活的TRPV1通道内的阳离子流入显著下降,RFU读数由320下降至150单位(P<0.01),而且,TRPV1活性的这种衰减呈沙利度胺剂量依赖性。KCl溶液处理下的DRG神经元均被激活,在没有沙利度胺预处理的情况下,对辣椒素溶液敏感的神经元占(62±11)%。在应用20~50μmol/L沙利度胺预处理的情况下,对辣椒素溶液敏感神经元为(41±9)%和(28±9)%。醋酸扭体试验,可见野生型小鼠经沙利度胺预处理后,平均扭体次数由原来的54次减少到28次。与对照组(野生型WT组)比较(P<0.01);热板试验中,野生型小鼠经沙利度胺预处理后15 min,平均热痛觉阈值由原来的26 s增加到49 s(15 min);52 s(30 min);46 s(60 min),正常对照组热痛觉阈值几乎无变化,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);在TRPV1敲除小鼠和使用TRPV1通道抑制剂(A784168)的小鼠中,经沙利度胺干预后,与对照组比较,扭体数和热痛觉时间差异无统计学意义(P>0.05)。结论沙利度胺可通过TRPV1通道的调控,发挥其镇痛作用。

四神丸调控p38 MAPK/JNK/TRPV1信号通路改善脾肾阳虚型腹泻型肠易激综合征大鼠的内脏敏感性

目的:探讨四神丸改善腹泻型肠易激综合征大鼠的内脏敏感性的作用及其可能机制。方法:40只雄性SPF级大鼠随机分为空白组、模型组、四神丸低、高剂量组(3.51、7.02 g·kg^(-1))、培菲康组(0.54 g·kg^(-1))。除空白组外,其余均以母子分离刺激+番泻叶水煎剂灌胃构建脾肾阳虚型腹泻型肠易激综合征大鼠模型。给予相应药物干预后:观察大鼠一般情况,测量大鼠6 h排便颗粒及腹壁撤退反射实验(AWR)最小容量阈值,酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胃泌素(GAS)、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠结肠组织形态,甲苯胺蓝染色法观察大鼠结肠组织肥大细胞脱颗粒情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)、蛋白酶激活受体2(PAR2)蛋白表达,免疫组化法检测结肠组织TRPV1蛋白含量,免疫荧光法检测结肠组织神经肽P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)蛋白阳性表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠6 h排便颗粒显著增加(P<0.01),AWR最小容量阈值显著降低(P<0.01),TNF-α含量显著升高(P<0.01),GAS、CORT、ACTH含量明显降低(P<0.05,P<0.01),肥大细胞脱颗粒率升高(P<0.01),TRPV1的阳性表达明显升高(P<0.05),SP、CGRP蛋白阳性表达明显升高(P<0.05,P<0.01),p38 MAPK、JNK、TRPV1、PAR2蛋白表达量均显著升高(P<0.01);与模型组比较,四神丸高剂量组AWR最小容量阈值显著升高(P<0.01),四神丸高剂量组、培菲康组排便频率明显下降(P<0.05,P<0.01),TNF-α含量明显降低(P<0.05,P<0.01),GAS、CORT、ACTH含量明显升高(P<0.05,P<0.01),肥大细胞脱颗粒率下降(P<0.01),TRPV1阳性表达下降(P<0.05),SP、CGRP表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),p38 MAPK、JNK、TRPV1、PAR2蛋白表达量明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:四神丸可改善脾肾阳虚型腹泻型肠易激综合征大鼠的内脏敏感性,其机制可能与调控p38 MAPK/JNK/TRPV1信号通路相关。

加味盆痛灵方对子宫内膜异位症模型大鼠TRPV1/ERK1/2/p-CREB通路的影响

目的:基于瞬时受体电位香草酸亚型1/细胞外信号调节激酶1/2/磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(TRPV1/ERK1/2/p-CREB)信号通路探讨加味盆痛灵方对子宫内膜异位症(EMs)疼痛模型大鼠的镇痛机制。方法:采用自体内膜移植法建立SD大鼠EMs疼痛模型。造模成功的大鼠采用完全随机设计法分为模型组、TRPV1抑制剂组(CPZ组)、加味盆痛灵方组(JWPTL组)和TRPV1抑制剂+加味盆痛灵方组(CPZ+JWPTL组),每组8只;另设假手术组(n=8)。JWPTL组和CPZ+JWPTL组大鼠自造模成功后第1天起给予7.77 g/kg加味盆痛灵方灌肠,1次/d,其余大鼠灌肠给予等体积0.9%NaCl溶液,连续干预28 d。CPZ组和CPZ+JWPTL组自造模成功后第21天起鞘内注射辣椒平(CPZ),10μL/d,1次/d;其余大鼠鞘内注射等体积助溶剂10%二甲基亚砜(DMSO),连续干预7 d。采用“Up&Down”法测量大鼠的50%机械缩足反应阈值(PMWT),Western blot和RT-qPCR法检测脊髓组织中TRPV1、ERK1/2、p-CREB蛋白和mRNA的表达水平,ELISA法观察即刻早期基因c-fos蛋白的表达情况。结果:给药前,与假手术组比较,各造模组大鼠50%PMWT均明显降低(P<0.05);给药28 d后,CPZ组、JWPTL组和CPZ+JWPTL组50%PMWT较模型组显著升高(P<0.05),CPZ+JWPTL组50%PMWT较CPZ组显著升高(P<0.05)。模型组TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA的表达水平较假手术组显著升高(P<0.01,P<0.001),模型组c-fos蛋白表达水平较假手术组亦显著升高(P<0.001);与模型组比较,TRPV1抑制剂CPZ和加味盆痛灵方可不同程度下调TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),且CPZ+JWPTL组效果最优。与模型组比较,JWPTL组和CPZ+JWPTL组c-fos蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。相关性分析显示,TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA表达水平及c-fos蛋白表达水平均与50%PMWT呈负相关。结论:加味盆痛灵方可能通过干预TRPV1/ERK1/2/p-CREB通路及c-fos的表达缓解EMs疼痛。

雷公藤多苷对湿疹大鼠皮损的预防作用及机制

目的观察雷公藤多苷对湿疹大鼠皮损的预防作用,并探讨其作用机制与组胺受体H1(H1R)/瞬时感受器电位受体1(TRPV1)通路、蛋白酶激活受体2(PAR-2)/TRPV1通路及丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)通路的关系。方法取健康雄性大鼠50只,随机分为正常组、模型组和雷公藤多苷低、中、高剂量组,每组各10只。正常组正常饲养;模型组和雷公藤多苷低、中、高剂量组采用二硝基氯苯(DNCB)诱导建立湿疹模型,将大鼠腹部及背部脱毛,在腹部皮肤涂抹DNCB-丙酮橄榄油溶液进行致敏,5 d后在背部皮肤涂抹0.5%DNCB-丙酮橄榄油溶液进行激发,在右耳内外侧耳面涂抹1%DNCB-丙酮橄榄油溶液进行激发。于实验第3天开始给药,雷公藤多苷低、中、高剂量组分别给予4.5、9、18 mg/kg雷公藤多苷溶液灌胃,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续21 d。末次给药24 h后,观察大鼠背部皮肤外观情况;处死大鼠,沿耳基线剪下双耳,用打孔器在左右耳中部取圆形耳片,称取耳片质量,计算耳肿胀度和耳肿胀抑制率;取背部皮肤组织,采用HE染色法进行组织形态理学观察,采用免疫组化法检测组织中H1R、PAR-2、TRPV1蛋白水平,采用Western blotting法检测组织中p38 MAPK、p-p38MAPK蛋白的相对表达量。结果与正常组比较,模型组耳肿胀度增加(P <0.05);与模型组比较,雷公藤多苷低、中、高剂量组耳肿胀度减少(P均<0.05);与雷公藤多苷低剂量组比较,雷公藤多苷中、高剂量组耳肿胀度减少,耳肿胀抑制率增加(P均<0.05)。与正常组比较,模型组背部皮肤出现湿疹病理变化;与模型组比较,雷公藤多苷低、中、高剂量组背部皮肤湿疹病变程度减轻。与正常组比较,模型组皮损组织中H1R、PAR-2、TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白水平升高(P均<0.05);与模型组比较,雷公藤多苷中、高剂量组皮损组织中H1R、PAR-2、TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白水平降低(P均<0.05);与雷公藤多苷低剂量组比较,雷公藤多苷高剂量组皮损组织中H1R、PAR-2蛋白水平升高(P均<0.05),雷公藤多苷中剂量组TRPV1蛋白水平升高(P <0.05),雷公藤多苷中、高剂量组皮损组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白水平降低(P均<0.05)。结论雷公藤多苷对湿疹大鼠的皮损具有预防作用,其机制可能与抑制H1R/TRPV1、PAR-2/TRPV1和p38 MAPK通路有关。

肤鲜洗剂通过T细胞介导的免疫平衡对慢性皮炎湿疹小鼠H1R、PAR-2/TRPV1痒信号通路的调控作用

目的探讨辅助性T淋巴细胞1(Th1)/辅助性T淋巴细胞2(Th2)免疫平衡在组胺受体1(histamine receptor 1,H1R)、蛋白酶激活受体2(protease activated receptor 2,PAR-2)/瞬时电位V型1受体(transient receptor potential vanilloid-1,TRPV1)痒信号通路信号传导中的作用及肤鲜洗剂的干预机制。方法采用BALB/c小鼠60只,适应性喂养3 d后随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组,模型对照组,肤鲜洗剂高、中、低剂量组(36,12,4 mg·cm^(−2)),阳性药物对照组(1 mg·cm^(−2)),除空白对照组外,其余各组均采用7%和0.5%2,4-二硝基氯苯丙酮橄榄油溶液多次激发致敏,空白组小鼠腹部及耳部均涂以丙酮溶液对照。激发后24 h开始用药,每天给药2次,连续10 d。测定小鼠耳肿胀度,进行耳变应反应评分,记录搔抓指数,计算小鼠脾脏指数,HE染色观察小鼠耳组织病理学变化,采用ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-31(interleukin-31,IL-31)水平,实时荧光定量PCR检测上述免疫因子的mRNA水平,免疫组化法检测H1R、PAR-2、TRPV1的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组小鼠耳厚度、耳变应反应评分、搔抓指数、脾脏指数显著升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-31蛋白水平和mRNA水平显著升高(P<0.01),H1R、PAR-2、TRPV1含量明显增加(P<0.01),并出现明显的慢性皮炎湿疹样病理改变。与模型对照组比较,肤鲜洗剂组可有效减轻小鼠的耳廓肿胀程度、降低耳变应反应评分、搔抓指数、脾脏指数,TNF-α、IL-1β、IL-31蛋白水平和mRNA水平明显降低(P<0.01);肤鲜洗剂高剂量组、肤鲜洗剂中剂量组、阳性药物对照组H1R含量明显减少(P<0.01);肤鲜洗剂各剂量组、阳性药物对照组PAR-2、TRPV1含量明显减少(P<0.01)。结论肤鲜洗剂通过调节Th1/Th2免疫平衡,下调特征性免疫因子TNF-α、IL-1β、IL-31,干预痒信号通路H1R、PAR-2/TRPV1传导,从而实现抗瘙痒和抑制炎症反应,达到治疗慢性皮炎湿疹的目的。

基于NGF/p38 MAPK/TRPV1信号通路探讨热敏灸治疗膝骨关节炎的外周敏化效应机制

目的:观察热敏灸对膝骨关节炎(KOA)兔背根神经节NGF/p38 MAPK/TRPV1信号通路的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法:36只普通级雄性新西兰兔,采用随机数表法随机分为空白组(6只)、假手术组(6只)、造模组(24只)。采用木瓜蛋白酶溶液注射膝关节腔法造模15 d,假手术组关节腔内注射等量的0.9%氯化钠溶液。造模成功后,选取6只为模型组,其余艾灸犊鼻穴,每日1次,每次40 min,共7 d,根据兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组和非热敏灸组,各6只;空白组、假手术组、模型组不予干预措施。干预结束后,观察各组兔行为学变化;采用ELISA法检测血清神经生长因子(NGF)含量;Western blot法检测各组大鼠背根神经节p-p38 MAPK、TRPV1蛋白的表达。结果:造模后,与空白组比较,假手术组、模型组、非热敏灸组、热敏灸组兔Lequesne MG评分均显著升高(P<0.01)。干预后,与模型组比较,非热敏灸组及热敏灸组Lequesne MG评分显著下降(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组血清NGF含量显著上升(P<0.01);与模型组比较,非热敏灸组、热敏灸组血清NGF含量显著下降(P<0.01);与非热敏灸组比较,热敏灸组血清NGF含量显著下降(P<0.05)。与空白组比较,模型组p-p38 MAPK、TRPV1蛋白含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,非热敏灸组及热敏灸组p-p38 MAPK、TRPV1蛋白表达显著下降(P<0.01);与非热敏灸组比较,热敏灸组p-p38 MAPK、TRPV1蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论:热敏灸可能通过减少局部NGF的产生,从而抑制NGF/p38 MAPK/TRPV1通路的激活,降低炎性局部的痛敏反应而发挥其改善KOA的作用。

电针预处理对心肌缺血大鼠心肌TRPV1/CGRP通路及凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察电针预处理对心肌缺血损伤大鼠心肌TRPV1/CGRP通路及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响,探讨电针预处理抗心肌缺血损伤的可能机制。方法将36只SD大鼠随机分为假手术组、假手术电针组、模型组和电针组,每组9只。假手术电针组和电针组予以"内关"穴电针预处理(疏密波,2 Hz/100 Hz,2 mA),20 min/次,1次/日,持续7天。电针结束第2天,模型组和电针组通过结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌缺血模型。采用心电图肢体II导联ST段电位变化,超声心动图测EF值,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3及TRPV1/CGRP通路蛋白表达水平。结果假手术组与假手术电针组于各项检测指标中差异均无统计学意义(P>0.05);与假手术电针组比较,模型组EF值降低(P<0.01),细胞凋亡指数明显增高(P<0.01),心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白表达增高(P<0.05),TRPV1/CGRP通路蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,电针组EF值升高(P<0.05),细胞凋亡指数减少(P<0.05),Bcl-2蛋白表达上调(P<0.05)、Bax和Caspase-3蛋白表达下调(P<0.05),TRPV1/CGRP通路蛋白表达上调(P<0.05)。结论电针预处理对MI损伤大鼠的心肌保护效应可能是通过TRPV1/CGRP通路调控细胞凋亡途径实现的。

不同浓度EPA和DHA对C2C12肌管细胞IL-6表达及TRPV1/PKC/Ca^(2+)信号通路的影响

目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对C2C12肌管细胞IL-6表达与分泌的调节作用和机制。方法采用25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12肌管细胞12、24、36 h,设立BSA对照组。MTT检测细胞活性,PCR与Western blot分别检测IL-6的mRNA与蛋白表达水平,ELISA测定IL-6分泌水平,检测TRPV1、PKC的mRNA表达水平及TRPV1、PKC、p-PKC蛋白表达水平,Fluo-4 AM钙离子荧光探针检测胞内Ca^(2+)浓度。结果IL-6表达与分泌方面,100μmol/L EPA或DHA干预24h可显著提高肌管细胞IL-6 mRNA表达;100μmol/LEPA或DHA干预24h、36h可显著促进IL-6分泌;100μmol/L EPA或DHA可呈时间梯度上调IL-6蛋白表达水平。各浓度EPA或DHA干预肌管细胞24h后,IL-6 mRNA表达水平与分泌均呈浓度梯度增加,其中200、400μmol/L效果最为显著;50、100、200μmol/L EPA与25、50、100、200μmol/L DHA干预组IL-6蛋白质表达水平较对照组均显著增加,100μmol/L EPA和DHA增加IL-6蛋白表达最为显著。信号通路方面,100、200、400μmol/L EPA与DHA显著提高肌管细胞TRPV1 mRNA表达水平;200、400μmol/L EPA与100、200、400μmol/L DHA干预组TRPV1蛋白表达水平较对照组显著升高。400μmol/L EPA与DHA可显著上调PKC mRNA表达水平;100、200、400μmol/L EPA干预组p-PKC蛋白表达水平与p-PKC/PKC比值显著增高,而200、400μmol/L DHA可显著增加肌管细胞PKC、p-PKC蛋白表达水平以及p-PKC/PKC比值。各浓度EPA与DHA干预组均显著增加肌管细胞胞内Ca^(2+)含量。结论EPA与DHA在适宜浓度可以促进C2C12肌管细胞IL-6的表达与分泌,EPA和DHA可能通过TRPV1/PKC/Ca^(2+)信号通路刺激肌源性IL-6的表达与分泌。[营养学报,2023,45(2):148-156]

杏鲍菇多肽对铅致大鼠骨骼损伤的干预作用

目的研究杏鲍菇多肽对铅致大鼠骨骼损伤的干预作用。方法 27只21日龄(60±5)g清洁级健康雄性SD大鼠随机分为对照(基础饲料+去离子水)、染铅(基础饲料+0.2%醋酸铅水)、试验(基础饲料添加2%杏鲍菇多肽+0.2%醋酸铅水)共3组。饲养60 d后,取全血及股骨,测定血清与骨组织中骨钙素(BGP)、甲状旁腺激素(PTH)、降钙素(CT)的含量和碱性磷酸酶(AKP)的活性,利用ICP法测定股骨中二价矿物元素的含量,通过HE染色观察骨组织形态变化,用荧光定量RT-PCR法测定骨组织中TRPV5、TRPV6、NCX1和PMCA1b基因的m RNA表达量。结果铅暴露会导致大鼠体重增长较慢;BGP、CT、钙、锌、铁、铜含量,AKP活性及TRPV5和TRPV6 m RNΑ表达量显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01);PTH和铅含量、NCX1和PMCA1b m RNΑ表达量显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01)。补充一定剂量杏鲍菇多肽后,血清中AKP的活力显著上升(P<0.05),股骨中铅含量显著下降(P<0.05),骨损伤减轻,明显改善骨组织病理性变化,股骨中TRPV6 m RNΑ表达量显著上升(P<0.05)。结论补充适量的杏鲍菇多肽可缓解染铅导致的大鼠骨骼损伤。