肠三针介导TRPV1/CGRP信号通路对脓毒症肠道菌群紊乱影响

目的探讨肠三针介导瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)/降钙素基因及相关肽(CGRP)信号通路对脓毒症肠道菌群紊乱的影响。方法按随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、电针组,每组各20只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型,假手术组除不结扎盲肠外,其余手术步骤同其他2组,电针组于术前3 d以及术后6 h给予肠三针干预。收集结肠组织和血液标本,观察肠黏膜病理学变化。检测结肠肠道菌群及血液、淋巴结细菌移位情况,ELISA法检测血清炎症因子水平,Western Blot法检测结肠组织TRPV1、CGRP及Toll样受体-4(TLR-4)表达。结果模型组大鼠肠道菌群多样性降低,电针组较模型组增加(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠结肠中大肠杆菌含量显著增加,双歧杆菌和乳酸杆菌含量显著减少,血液和淋巴结移位率显著升高,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平显著升高,结肠组织TRPV1、CGRP和TLR-4相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠结肠中大肠杆菌含量显著减少,双歧杆菌和乳酸杆菌含量显著增加,血液和淋巴结移位率显著降低,血清TNF-α和IL-6水平显著降低,结肠组织TRPV1、CGRP和TLR-4相对表达量显著降低(P<0.05)。结论肠三针可显著增加脓毒症大鼠肠道菌群多样性及有益菌群含量,减少肠道细菌移位,降低炎症反应,其机制可能与调控TRPV1/CGRP信号通路有关。

麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘大鼠IL-6/STAT3信号通路及TRPV1感受器的影响

【目的】探讨麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘(CVA)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只大鼠随机分为正常组,模型组,麻杏石甘汤低、高剂量组,麻杏石甘汤高剂量+信号转导和转录激活因子3(STAT3)激活剂Colivelin(Col)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用腹腔注射卵清蛋白结合艾条熏蒸法构建CVA模型。对应治疗后,观察大鼠体征和咳嗽次数,肺功能仪检测气道阻力(RE),Diff-Quik染色计数嗜酸性粒细胞(EOS),苏木素-伊红(HE)染色法观察肺、支气管组织病理学特征,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肺组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western Blot法检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、STAT3、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)蛋白表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠出现明显哮喘症状,肺组织可见炎性细胞浸润严重,支气管上皮细胞坏死、纤毛粘连、黏液多,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量,以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,麻杏石甘汤低、高剂量组大鼠哮喘症状明显改善,肺及支气管损伤减轻,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05);与麻杏石甘汤高剂量组比较,麻杏石甘汤高剂量+Col组大鼠哮喘加重,肺及支气管损伤加重,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】麻杏石甘汤可有效改善CVA大鼠症状,其机制与抑制IL-6/STAT3信号通路及TRPV1高表达有关。

低分子肝素钠联合醋酸地塞米松基于PAR-2/TRPV1信号通路治疗小鼠瘙痒模型的有效性

目的基于蛋白酶激活受体2(PAR-2)/瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)信号通路探讨低分子肝素钠联合醋酸地塞米松治疗小鼠瘙痒模型的有效性。方法选取6周龄C57小鼠48只,采用随机数字表法将其中24只制成干皮症(AEW)慢性瘙痒小鼠模型,剩余24只制成DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型。将AEW慢性瘙痒、DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型均按照随机数字表法分为模型对照组、地塞米松组、肝素组、联合用药组,每组6只。模型对照组仅在小鼠脱毛部位给予0.9%氯化钠溶液;地塞米松组在小鼠脱毛部位涂抹醋酸地塞米松乳膏;肝素组在小鼠脱毛部位涂抹低分子肝素钠软膏;联合用药组在小鼠脱毛部位涂抹醋酸地塞米松乳膏、低分子肝素钠软膏。各组小鼠均持续干预7 d。比较各组小鼠干预前、干预7 d后瘙痒次数及PAR-2、TRPV1蛋白表达量。结果在AEW慢性瘙痒、DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型中,干预7 d后,联合用药组、肝素组、地塞米松组小鼠瘙痒次数均少于模型对照组,且联合用药组小鼠瘙痒次数少于肝素组、地塞米松组(P<0.05)。干预7 d后,在AEW慢性瘙痒小鼠模型中,肝素组、联合用药组TRPV1蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05);地塞米松组、肝素组、联合用药组PAR-2蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05)。干预7 d后,在DNFB过敏性皮炎急性瘙痒小鼠模型中,肝素组、联合用药组TRPV1、PAR-2蛋白表达量低于模型对照组,联合用药组低于地塞米松组、肝素组(P<0.05)。结论低分子肝素钠软膏可通过阻断PAR-2/TRPV1信号通路改善瘙痒症状,将其与醋酸地塞米松联合治疗对该通路的抑制效果更加显著。

参榆洗液改善痔术后大鼠痛觉敏化及对cAMP/PKA信号通路的影响

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A(c AMP/PKA)信号通路探究参榆洗液对痔术后大鼠疼痛的影响。方法:构建痔术后大鼠模型,将造模成功的56只SD大鼠随机分为模型组、溶剂模型组、参榆洗液组、参榆洗液+Forskolin(c AMP/PKA信号通路激动剂)组、Forskolin组、H-89(c AMP/PKA信号通路抑制剂)组、NS-398(PGE_(2)抑制剂)组,每组8只;另取8只大鼠为空白组。各组大鼠给予对应药物干预,连续7 d。给药结束后1 d,观察大鼠一般状态及疼痛相关动物学行为,观察创面变化并计算创面愈合率,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠创面组织病理学改变,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组大鼠背根神经节TRPV1、p-PKA蛋白表达及创面组织中c AMP、PKA蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠创面组织中c AMP m RNA、PKA m RNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测创面组织中PGE_(2)、IL-6、IL-1β含量。结果:模型组大鼠背根神经节组织中p-PKA、TRPV1及创面周围组织c AMP、PKA、PGE_(2)、c AMP m RNA、PKA m RNA、IL-6、IL-1β表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,H-89组、NS-398组、参榆洗液+Forskolin组、参榆洗液组创面组织病变程度减轻,创面愈合率依次上升,背根神经节组织中p-PKA、TRPV1及创面组织c AMP、PKA、c AMP m RNA、PKA m RNA、IL-6、PGE_(2)、IL-1β表达水平依次降低(P<0.05);Forskolin干预能显著提高痔术后大鼠模型c AMP、PKA、TRPV1、p-PKA、PGE_(2)、IL-6、IL-1β表达水平(P<0.05),与参榆洗液联合干预后,上述蛋白及炎症因子表达水平显著下降(P<0.05)。结论:参榆洗液对痔术后大鼠cAMP/PKA信号通路有抑制作用,抑制c AMP/PKA信号通路可改善痔术后痛觉敏化,其机制可能与抑制PGE_(2)表达、减少炎症因子释放、抑制TRPV1活化有关。

外周神经元PKCε-TRPV1通路在痛转化中的作用及中间信号分子

痛转化指疼痛由急性向慢性转化的过程。干预痛转化的发生,有助于缓解慢性痛的发生与发展。蛋白激酶Cε(protein kinase C epsilon,PKCε)是重要的细胞内信号传导分子,参与多种生理病理状态过程。瞬时受体亚型1(transient receptor potential Vanilloid 1,TRPV1)是其主要下游信号分子之一,也被证实参与各类慢性疼痛的形成与维持。最新研究表明,外周神经元PKCε-TRPV1信号通路是痛转化产生的关键环节。本文将进一步明确PKCε-TRPV1信号通路及可能的中间信号分子在痛转化中的作用,为慢性疼痛的治疗提供新的思路。

纳布啡对分娩大鼠PKCε/TRPV1信号通路及镇痛效果的影响

目的:探究纳布啡对分娩大鼠PKCε/TRPV1信号通路及镇痛效果的影响。方法:将30只孕鼠随机分为对照组、H-7组、纳布啡组,每组10只。制备硬膜外镇痛模型,分娩开始后分别给予生理盐水、H-7稀释液和纳布啡注射液泵注治疗。通过热水甩尾法、脊髓线粒体功能和还原型谷胱甘肽(GSH)水平观察镇痛效果;ELISA检测血清5-HT水平;免疫组织化学(IHC)检测脊髓k受体(KOR)表达;WB检测蛋白激酶C(Protein Kinase C, PKC)、瞬时受体电位香草酸亚型1(transicent receptor potential vanilloid 1, TRPV1)、TRP锚蛋白1(transicent receptor potential ankyrin 1, TRPA1)相对表达水平。结果:分娩镇痛后H-7组、纳布啡组大鼠痛阈值较对照组显著升高,血清5-HT水平降低(均P<0.01);干预后两组大鼠线粒体呼吸功能较对照组增强,线粒体内GSH水平显著升高(P<0.05,P<0.01);与对照组和H-7组比较,纳布啡组KOR表达量最高(均P<0.05);与对照组比较,H-7组、纳布啡组大鼠脊髓内PKCε、TRPV1、TRPA1蛋白表达受到显著抑制(均P<0.001)。结论:纳布啡对分娩大鼠具有有效镇痛效果,其镇痛机制可能与k受体激活、脊髓线粒体呼吸调节及PKC/TRPV1信号通路抑制有关。

肤鲜洗剂通过T细胞介导的免疫平衡对慢性皮炎湿疹小鼠H1R、PAR-2/TRPV1痒信号通路的调控作用

目的探讨辅助性T淋巴细胞1(Th1)/辅助性T淋巴细胞2(Th2)免疫平衡在组胺受体1(histamine receptor 1,H1R)、蛋白酶激活受体2(protease activated receptor 2,PAR-2)/瞬时电位V型1受体(transient receptor potential vanilloid-1,TRPV1)痒信号通路信号传导中的作用及肤鲜洗剂的干预机制。方法采用BALB/c小鼠60只,适应性喂养3 d后随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组,模型对照组,肤鲜洗剂高、中、低剂量组(36,12,4 mg·cm^(−2)),阳性药物对照组(1 mg·cm^(−2)),除空白对照组外,其余各组均采用7%和0.5%2,4-二硝基氯苯丙酮橄榄油溶液多次激发致敏,空白组小鼠腹部及耳部均涂以丙酮溶液对照。激发后24 h开始用药,每天给药2次,连续10 d。测定小鼠耳肿胀度,进行耳变应反应评分,记录搔抓指数,计算小鼠脾脏指数,HE染色观察小鼠耳组织病理学变化,采用ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-31(interleukin-31,IL-31)水平,实时荧光定量PCR检测上述免疫因子的mRNA水平,免疫组化法检测H1R、PAR-2、TRPV1的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组小鼠耳厚度、耳变应反应评分、搔抓指数、脾脏指数显著升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-31蛋白水平和mRNA水平显著升高(P<0.01),H1R、PAR-2、TRPV1含量明显增加(P<0.01),并出现明显的慢性皮炎湿疹样病理改变。与模型对照组比较,肤鲜洗剂组可有效减轻小鼠的耳廓肿胀程度、降低耳变应反应评分、搔抓指数、脾脏指数,TNF-α、IL-1β、IL-31蛋白水平和mRNA水平明显降低(P<0.01);肤鲜洗剂高剂量组、肤鲜洗剂中剂量组、阳性药物对照组H1R含量明显减少(P<0.01);肤鲜洗剂各剂量组、阳性药物对照组PAR-2、TRPV1含量明显减少(P<0.01)。结论肤鲜洗剂通过调节Th1/Th2免疫平衡,下调特征性免疫因子TNF-α、IL-1β、IL-31,干预痒信号通路H1R、PAR-2/TRPV1传导,从而实现抗瘙痒和抑制炎症反应,达到治疗慢性皮炎湿疹的目的。

不同浓度EPA和DHA对C2C12肌管细胞IL-6表达及TRPV1/PKC/Ca^(2+)信号通路的影响

目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对C2C12肌管细胞IL-6表达与分泌的调节作用和机制。方法采用25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12肌管细胞12、24、36 h,设立BSA对照组。MTT检测细胞活性,PCR与Western blot分别检测IL-6的mRNA与蛋白表达水平,ELISA测定IL-6分泌水平,检测TRPV1、PKC的mRNA表达水平及TRPV1、PKC、p-PKC蛋白表达水平,Fluo-4 AM钙离子荧光探针检测胞内Ca^(2+)浓度。结果IL-6表达与分泌方面,100μmol/L EPA或DHA干预24h可显著提高肌管细胞IL-6 mRNA表达;100μmol/LEPA或DHA干预24h、36h可显著促进IL-6分泌;100μmol/L EPA或DHA可呈时间梯度上调IL-6蛋白表达水平。各浓度EPA或DHA干预肌管细胞24h后,IL-6 mRNA表达水平与分泌均呈浓度梯度增加,其中200、400μmol/L效果最为显著;50、100、200μmol/L EPA与25、50、100、200μmol/L DHA干预组IL-6蛋白质表达水平较对照组均显著增加,100μmol/L EPA和DHA增加IL-6蛋白表达最为显著。信号通路方面,100、200、400μmol/L EPA与DHA显著提高肌管细胞TRPV1 mRNA表达水平;200、400μmol/L EPA与100、200、400μmol/L DHA干预组TRPV1蛋白表达水平较对照组显著升高。400μmol/L EPA与DHA可显著上调PKC mRNA表达水平;100、200、400μmol/L EPA干预组p-PKC蛋白表达水平与p-PKC/PKC比值显著增高,而200、400μmol/L DHA可显著增加肌管细胞PKC、p-PKC蛋白表达水平以及p-PKC/PKC比值。各浓度EPA与DHA干预组均显著增加肌管细胞胞内Ca^(2+)含量。结论EPA与DHA在适宜浓度可以促进C2C12肌管细胞IL-6的表达与分泌,EPA和DHA可能通过TRPV1/PKC/Ca^(2+)信号通路刺激肌源性IL-6的表达与分泌。[营养学报,2023,45(2):148-156]

基于NGF/p38 MAPK/TRPV1信号通路探讨热敏灸治疗膝骨关节炎的外周敏化效应机制

目的:观察热敏灸对膝骨关节炎(KOA)兔背根神经节NGF/p38 MAPK/TRPV1信号通路的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法:36只普通级雄性新西兰兔,采用随机数表法随机分为空白组(6只)、假手术组(6只)、造模组(24只)。采用木瓜蛋白酶溶液注射膝关节腔法造模15 d,假手术组关节腔内注射等量的0.9%氯化钠溶液。造模成功后,选取6只为模型组,其余艾灸犊鼻穴,每日1次,每次40 min,共7 d,根据兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组和非热敏灸组,各6只;空白组、假手术组、模型组不予干预措施。干预结束后,观察各组兔行为学变化;采用ELISA法检测血清神经生长因子(NGF)含量;Western blot法检测各组大鼠背根神经节p-p38 MAPK、TRPV1蛋白的表达。结果:造模后,与空白组比较,假手术组、模型组、非热敏灸组、热敏灸组兔Lequesne MG评分均显著升高(P<0.01)。干预后,与模型组比较,非热敏灸组及热敏灸组Lequesne MG评分显著下降(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组血清NGF含量显著上升(P<0.01);与模型组比较,非热敏灸组、热敏灸组血清NGF含量显著下降(P<0.01);与非热敏灸组比较,热敏灸组血清NGF含量显著下降(P<0.05)。与空白组比较,模型组p-p38 MAPK、TRPV1蛋白含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,非热敏灸组及热敏灸组p-p38 MAPK、TRPV1蛋白表达显著下降(P<0.01);与非热敏灸组比较,热敏灸组p-p38 MAPK、TRPV1蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论:热敏灸可能通过减少局部NGF的产生,从而抑制NGF/p38 MAPK/TRPV1通路的激活,降低炎性局部的痛敏反应而发挥其改善KOA的作用。

电针预处理对心肌缺血大鼠心肌TRPV1/CGRP通路及凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察电针预处理对心肌缺血损伤大鼠心肌TRPV1/CGRP通路及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响,探讨电针预处理抗心肌缺血损伤的可能机制。方法将36只SD大鼠随机分为假手术组、假手术电针组、模型组和电针组,每组9只。假手术电针组和电针组予以"内关"穴电针预处理(疏密波,2 Hz/100 Hz,2 mA),20 min/次,1次/日,持续7天。电针结束第2天,模型组和电针组通过结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌缺血模型。采用心电图肢体II导联ST段电位变化,超声心动图测EF值,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3及TRPV1/CGRP通路蛋白表达水平。结果假手术组与假手术电针组于各项检测指标中差异均无统计学意义(P>0.05);与假手术电针组比较,模型组EF值降低(P<0.01),细胞凋亡指数明显增高(P<0.01),心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白表达增高(P<0.05),TRPV1/CGRP通路蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,电针组EF值升高(P<0.05),细胞凋亡指数减少(P<0.05),Bcl-2蛋白表达上调(P<0.05)、Bax和Caspase-3蛋白表达下调(P<0.05),TRPV1/CGRP通路蛋白表达上调(P<0.05)。结论电针预处理对MI损伤大鼠的心肌保护效应可能是通过TRPV1/CGRP通路调控细胞凋亡途径实现的。

祛风骨痛巴布膏对肌筋膜疼痛综合征模型大鼠的干预作用及机制研究

旨在研究祛风骨痛巴布膏对肌筋膜疼痛综合征(myofascial pain syndrome,MPS)大鼠的干预作用,并从改善肌肉炎症疼痛角度初步探索作用机制。将SD雄性大鼠分成6组,为正常组、模型组、阳性药活血止痛膏组以及祛风骨痛巴布膏低、中、高剂量组(75、150、300 mg·d-1)。通过打击结合离心运动法建立MPS动物模型,造模期间,外用贴敷祛风骨痛巴布膏进行干预,同时以活血止痛膏进行同种方式给药对照。标准VonFrey纤维评价机械痛阈值;丙酮检测冷痛阈值;检测触发点肌肉电生理活动,并进行触发点肌肉电分析;CatWalk步态分析仪检测疼痛诱导的步态适应性变化;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠触发点肌肉和给药处皮肤组织病理变化;免疫组化法检测触发点肌肉组织中辣椒素受体1(TRPV1)以及皮肤组织中白细胞介素(IL)-33的表达;蛋白质免疫印迹检测触发点肌肉组织中TRPV1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白表达水平。结果发现,与模型组相比,祛风骨痛巴布膏外贴后,各组大鼠机械痛敏阈值和冷痛阈值升高;模型组出现自发肌电活动,而祛风骨痛巴布膏能剂量依赖地减弱自发肌电活动;步态分析显示祛风骨痛巴布膏各组对站立持续时间、平均强度、摆动速度、最大接触点、最大接触面积、爪印长度、爪印宽度、爪印面积都有明显提升;病理分析显示祛风骨痛巴布膏治疗后触发点处肌肉排列紊乱程度下降,肌纤维黏连及萎缩减少,炎性细胞浸润现象有所缓解;此外,祛风骨痛巴布膏和活血止痛膏均在一定程度上抑制MPS大鼠触发点肌肉组织中TRPV1、PI3K、Akt、p-Akt、IL-1β和TNF-α等相关蛋白表达,而给药皮肤位置病理结构及IL-33表达较正常组相比无显著差异。相关研究结果证实祛风骨痛巴布膏能通过抑制MPS模型大鼠肌肉触发点中TRPV1/PI3K/Akt信号通路进而抑制炎性因子释放,最终减弱局部肌肉的萎缩黏连及炎性浸润,缓解MPS大鼠肌肉疼痛,且局部给药无皮肤刺激作用。