不同浓度EPA和DHA对C2C12肌管细胞IL-6表达及TRPV1/PKC/Ca^(2+)信号通路的影响

目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对C2C12肌管细胞IL-6表达与分泌的调节作用和机制。方法采用25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12肌管细胞12、24、36 h,设立BSA对照组。MTT检测细胞活性,PCR与Western blot分别检测IL-6的mRNA与蛋白表达水平,ELISA测定IL-6分泌水平,检测TRPV1、PKC的mRNA表达水平及TRPV1、PKC、p-PKC蛋白表达水平,Fluo-4 AM钙离子荧光探针检测胞内Ca^(2+)浓度。结果IL-6表达与分泌方面,100μmol/L EPA或DHA干预24h可显著提高肌管细胞IL-6 mRNA表达;100μmol/LEPA或DHA干预24h、36h可显著促进IL-6分泌;100μmol/L EPA或DHA可呈时间梯度上调IL-6蛋白表达水平。各浓度EPA或DHA干预肌管细胞24h后,IL-6 mRNA表达水平与分泌均呈浓度梯度增加,其中200、400μmol/L效果最为显著;50、100、200μmol/L EPA与25、50、100、200μmol/L DHA干预组IL-6蛋白质表达水平较对照组均显著增加,100μmol/L EPA和DHA增加IL-6蛋白表达最为显著。信号通路方面,100、200、400μmol/L EPA与DHA显著提高肌管细胞TRPV1 mRNA表达水平;200、400μmol/L EPA与100、200、400μmol/L DHA干预组TRPV1蛋白表达水平较对照组显著升高。400μmol/L EPA与DHA可显著上调PKC mRNA表达水平;100、200、400μmol/L EPA干预组p-PKC蛋白表达水平与p-PKC/PKC比值显著增高,而200、400μmol/L DHA可显著增加肌管细胞PKC、p-PKC蛋白表达水平以及p-PKC/PKC比值。各浓度EPA与DHA干预组均显著增加肌管细胞胞内Ca^(2+)含量。结论EPA与DHA在适宜浓度可以促进C2C12肌管细胞IL-6的表达与分泌,EPA和DHA可能通过TRPV1/PKC/Ca^(2+)信号通路刺激肌源性IL-6的表达与分泌。[营养学报,2023,45(2):148-156]