破骨细胞TRPV5通道对体外降解生物珊瑚人工骨的影响

背景:生物珊瑚人工骨是一种修复长段骨缺损的良好替代材料,但其在体内的降解吸收速率与新生骨的生长速率不够匹配,因而其在临床上的应用受到限制。目的:探讨破骨细胞TRPV5通道对生物珊瑚人工骨降解的影响。方法:取生长状态良好的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7,接种于生物珊瑚人工骨片上,加入破骨细胞诱导分化培养液,观察有破骨细胞出现后,分别加入含0,50,500,5000μmol/L钌红(TRPV5通道抑制剂)的破骨细胞诱导分化培养液。培养一定时间后,激光共聚焦显微镜下观察TRPV5通道蛋白表达,扫描电镜下观察生物珊瑚人工骨片上的吸收陷窝,应用Western Blot检测细胞TRPV5通道蛋白表达。结果与结论:①激光共聚焦显微镜:TRPV5表达于破骨细胞的胞浆和胞膜,随着钌红浓度的增加,破骨细胞上TRPV5表达减少;②扫描电镜:0 nmol/L钌红组骨片上可见大片连续的骨吸收陷窝,其他浓度钌红组骨片上的骨吸收陷窝减少,并散在分布,并且随着钌红浓度的升高,骨陷窝面积逐渐减少;③Western Blot检测:与0 nmol/L钌红组比较,其他浓度钌红组TRPV5通道蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01);④结果表明:破骨细胞在生物珊瑚人工骨片上生长良好,TRPV5可作为调控生物珊瑚人工骨降解速率的靶点。

TRPV5/6通道在急性髓系白血病中的表达研究

目的探讨瞬时受体电位通道V5(TRPV5)、瞬时受体电位通道V6(TRPV6)在急性髓系白血病(AML)中的表达。方法提取AML患者骨髓细胞、捐献者造血干细胞,以及AML细胞株的蛋白和总RNA,运用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot检测TRPV5/6基因和蛋白的表达水平,并分析AML患者临床指标与TRPV5/6表达水平的相关性。结果初治组、复发组、细胞株组结果显示,TRPV5/6的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而完全缓解组与对照组TRPV5/6的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AML患者TRPV5/6表达与骨髓原始细胞百分比呈正相关(P<0.05),而与外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、性别、年龄及骨髓染色体核型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TRPV5/6通道在AML中表达上调,且与肿瘤负荷相关,有望成为白血病诊断的新型标志物,以及预后评估的分子靶点。

补肾、健脾、活血中药对地塞米松诱导骨质疏松大鼠骨组织TRPV5表达的影响

目的:观察地塞米松诱导的骨质疏松大鼠骨组织新型上皮钙通道(TRPV5)基因和蛋白表达的变化,探讨糖皮质激素性骨质疏松症(GIO)的发病机制,并比较补肾、健脾、活血中药的疗效及其调控作用。方法:Wistar大鼠132只,雌雄各半,随机分为正常组、模型组、补肾组(1.139 g.kg-1)、健脾组(0.945 g.kg-1)、活血组(0.504 g.kg-1)和骨疏康组(2.1 g.kg-1)。地塞米松im造模(2.5 mg.kg-1),每周2次,造模及给药连续9周。测定离体股骨骨密度(BMD),生化法测定血清骨代谢指标,实时定量PCR与Western-blot法测定骨组织TRPV5 mRNA和蛋白表达。结果:模空组大鼠BMD明显降低(P<0.01),血清骨吸收标记物TRAP含量明显升高(P<0.01),骨组织TRPV5 mRNA与蛋白表达均上升(P<0.01);补肾中药能明显增加模型大鼠股骨BMD(P<0.01),降低大鼠血清TRAP含量(P<0.01),下调骨组织TRPV5 mRNA与蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05)。结论:补肾中药通过下调骨组织TRPV5 mRNA与蛋白表达而抑制破骨细胞骨吸收,从而起到抗骨质疏松的作用,其疗效优于健脾与活血中药。

左归丸对去势大鼠钙转运通路相关蛋白的影响

目的:探讨左归丸对去势大鼠骨密度和骨组织中钙转运通路相关蛋白的影响。方法:选取48只雌性SD大鼠,随机分为正常组,假手术组,模型组,尼尔雌醇组(0.167 mg·kg^-1),左归丸低、高剂量组(9.6,38.4 g·kg^-1)。除假手术组和正常组,其余组切除大鼠卵巢,造模成功后3个月进行各组干预。3个月后处死大鼠,检测大鼠骨密度(BMD)和骨代谢标志物;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测钙转运通路(骨组织)瞬时受体电位通道V5(TRPV5),钙结合蛋白-D28K(CaBP-D28K),钠钙交换器1(NCX1)和细胞膜钙汞(PMCA1b)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组血钙降低(P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组和尼尔雌醇组大鼠血钙显著升高(P<0.01);与正常组比较,模型组BMD显著降低(P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组与尼尔雌醇组大鼠BMD均有改善(P<0.05);与假手术组和正常组比较,模型组各蛋白表达均有不同程度上调(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组中TRPV5蛋白表达有显著下调(P<0.01),各干预组中的CaBP-D28K与NCX1蛋白表达均有不同程度的下调(P<0.05,P<0.01),PMCA1b蛋白表达在左归丸低剂量组和尼尔雌醇组内表达均有不同程度下调(P<0.05,P<0.01)。结论:左归丸可不同程度的降低大鼠破骨细胞中TRPV5,CAPB-D28K,PMCA1b,NCX1等介导破骨细胞吸收钙离子的重要通道蛋白的表达,左归丸的抗骨质疏松机理有可能是通过抑制TRPV5介导的破骨细胞的骨吸收而起作用。