姜黄素通过调控Trx-1/TXNIP/NLRP3通路减轻对乙酰氨基酚诱导的大鼠急性肾损伤

目的探究姜黄素(curcumin,CUR)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的大鼠急性肾损伤的保护作用及机制。方法48只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、阳性药NAC组、CUR低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组。NAC及CUR灌胃给药10 d后,一次性灌胃给予2 g/kg APAP建立急性肾损伤模型,造模24 h后,取血并分离大鼠,计算肾指数;检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;HE染色评价大鼠肾病理变化;检测大鼠肾组织谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平;Western blot检测大鼠肾组织Trx-1、TXNIP、NLRP3炎症小体等蛋白的表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠肾指数显著增加(P<0.01),血清Cr、BUN水平显著升高(P<0.01),病理切片显示大鼠肾组织出现明显的损伤,大鼠肾组织中GSH、T-SOD、CAT的活性显著降低(P<0.01),MDA的含量显著升高(P<0.01),大鼠肾组织中Trx-1的表达明显下调(P<0.05),TXNIP、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1、mature IL-1β蛋白的表达明显上调(P<0.01)。与模型组相比,CUR中、高剂量组肾指数显著降低(P<0.01),病理损伤改善,血清Cr、BUN水平显著降低(P<0.01),肾组织中GSH、T-SOD、CAT活性显著升高,MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01),Trx-1的表达明显上调(P<0.05或P<0.01)、TXNIP、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1、mature IL-1β蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论姜黄素预防性给药通过调控Trx-1/TXNIP/NLRP3通路减轻APAP诱导的大鼠急性肾损伤。

Trx-1在脓毒症小鼠内皮细胞铁死亡中的表达

目的研究脓毒症小鼠血管内皮细胞是否存在铁死亡以及硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx-1)在这一过程中的表达。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型。将动物随机分成3组:假手术组(Sham组)、CLP组、铁死亡抑制剂组(Fer-1组)。观察12h后,取外周血制备血清,采用ELISA法检测各组小鼠外周血中Trx-1、血管内皮生长因子(VEGF)及内皮素-1(ET-1)的表达。提取及培养小鼠原代内皮细胞,应用荧光探针技术测定内皮细胞内Fe^(2+)及ROS的水平,试剂盒法测定内皮细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平。结果与Sham组相比,CLP组内皮细胞内GSH含量降低,Fe^(2+)、ROS、MDA含量升高,Fer-1预处理能够缓解这一过程;与Sham组相比,CLP组Trx-1、ET-1及VEGF含量升高,Fer-1组较CLP组降低。结论脓毒症小鼠内皮细胞存在铁死亡,Trx-1在脓毒症铁死亡中高表达。

TRX-1和STAT-3在结直肠癌组织中的表达及相关性研究

目的检测人结直肠癌组织中TRX-1和STAT-3的表达,探讨二者之间的相关性。方法用免疫组织化学法分别检测60例结直肠癌和22例远癌正常大肠黏膜中TRX-1和STAT-3的表达情况,并结合临床资料,对其进行分析。结果 TRX-1和STAT-3均定位于细胞质和细胞核,TRX-1在结直肠癌与正常大肠黏膜组织阳性率分别为78.33%与31.82%(免疫组化染色平均评分分别为4.03±1.92和1.42±1.20),二者间差异有统计学意义(P<0.01);STAT-3在结直肠癌与正常大肠黏膜组织的阳性率分别为65.00%与27.27%(免疫组化染色平均评分分别为3.34±1.81和1.26±1.19),二者间差异有统计学意义(P<0.01)。TRX-1与STAT-3在低分化癌中比高分化者表达增强;二者的表达与淋巴结转移和TNM分级密切相关(P<0.05或P<0.01)。TRX-1和STAT-3在结直肠癌中的表达呈正相关(r=0.964,P<0.01)。结论 Trx-1和STAT-3在结直肠癌组织中过度表达,并与其发生发展有关,二者可能参与了结直肠癌恶化的调控。

乳腺癌组织中COX-2、TRX-1表达及其预后意义

目的:应用免疫组化法,检测COX-2、TRX-1在乳腺癌组织中表达,探讨COX-2、TRX-1表达与乳腺癌临床病理特征及预后因素的关系。方法:122例乳腺癌组织石蜡标本制作成乳腺癌组织芯片。免疫组化SP法检测COX-2、TRX-1表达。所有患者均接受规范性手术、术后辅助化疗及放疗,激素受体阳性病人接受5年的内分泌治疗。从手术日期到复发转移或随访截止日期(2008年7月)确定为患者无病生存期。共有45例复发转移病例。结果:122例乳腺癌组织中COX-2、TRX-1均呈高表达,分别为58.2%、54.1%,且二者表达呈正相关(r=0.286,P=0.001);COX-2表达与临床分期(r=0.193,P=0.033)、肿块大小(r=0.192,P=0.034)及淋巴结转移(r=0.186,P=0.040)呈正相关,TRX-1表达与临床分期(r=0.206,P=0.023)、肿块大小(r=0.236,P=0.009)呈正相关,与淋巴结转移(r=0.175,P=0.054)不相关。COX-2或TRX-1表达与无病生存期呈负相关(P=0.027,P=0.046);COX-2和TRX-1共表达与无病生存期呈负相关(P=0.017)。结论:乳腺癌组织中COX-2、TRX-1均呈高表达,两者与乳腺癌患者预后密切相关;COX-2、TRX-1表达呈正相关,推测乳腺癌组织中TRX-1可能参与COX-2调节。

肠道恶性肿瘤中Trx-1表达及生物学意义研究

目的检测大、小肠癌中Trx-1的表达情况,并探讨该癌蛋白在两者之间的相关性。方法用免疫组化法分别检测36例小肠癌、20例癌旁正常小肠黏膜中Trx-1和60例结直肠癌、22例癌旁正常大肠黏膜中Trx-1的表达情况。用半定量方法对免疫组化染色做评分,结合临床和病理数据进行分析。结果 Trx-1定位于细胞质和胞核,在大、小肠恶性肿瘤中过度表达,均较癌旁正常组织的表达显著增高。其在两部位的表达与对应正常肠组织的表达有统计学差异,且与病理分化不同有关(P<0.01)。它们在中低分化肿瘤比高分化者表达增强(P<0.05或P<0.01);也同淋巴结转移(P<0.05)和TNM分级密切相关(P<0.01)。Trx-1在大、小肠癌中的表达呈正相关(r=0.756,P<0.05)。结论 Trx-1在肠癌组织中的过度表达并与其发生发展有关,可能参与了大、小肠癌恶化的调控。

TXNIP/Trx-1/GPX4通路促进新生大鼠缺氧缺血后海马神经元铁死亡的作用机制

目的 观察新生大鼠缺氧缺血后海马神经细胞铁死亡的变化,并从TXNIP/Trx-1/GPX4信号通路探讨其机制。方法 将健康7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组(n=30)、缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)组(n=30)及siRNA (TXNIP siRNA)组(n=12)。采用经典Rice-Vannucci法建立新生大鼠HIBD模型。造模后6 h、24 h、72 h、7 d,Western blot法检测新生大鼠损伤侧海马组织铁死亡蛋白GPX4蛋白表达水平变化;造模后24 h,采用激光散斑成像结合苏木精-伊红染色法鉴定模型;采用NeuN/GPX4、GFAP/GPX4免疫荧光双标染色结合Western blot等方法检测各组新生大鼠损伤侧海马组织GPX4、TXNIP、Trx-1蛋白表达水平;检测新生大鼠血清铁和损伤侧海马组织铁含量的变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组新生大鼠TXNIP、Trx-1、GPX4 mRNA的表达水平。结果 造模后6 h、24 h、72 h、7 d,HIBD组GPX4蛋白表达水平低于假手术组(P<0.05)。造模后24 h,HIBD组损伤侧脑血流量低于假手术组(P<0.05),HIBD组损伤侧海马CA1区神经细胞排列疏松紊乱,形态不规则。HIBD组损伤侧海马CA1区TXNIP^(+)细胞数高于假手术组,Trx-1^(+)细胞数、NeuN^(+)GPX4^(+)/NeuN^(+)低于假手术组(P<0.05),海马CA1区几乎未见GFAP^(+)GPX4^(+)细胞。HIBD组和siRNA组血清铁、损伤侧海马组织铁含量高于假手术组,且siRNA组血清铁、损伤侧海马组织铁含量低于HIBD组(P<0.05)。HIBD组和siRNA组TXNIP mRNA及蛋白表达水平均高于假手术组,且siRNA组TXNIP mRNA及蛋白表达水平低于HIBD组(均P<0.05);HIBD组和siRNA组损伤侧海马组织Trx-1、GPX4 mRNA及蛋白表达水平均低于假手术组,且siRNA组损伤侧海马组织Trx-1、GPX4 mRNA及蛋白表达水平高于HIBD组(均P<0.05)。结论 新生大鼠缺氧缺血通过激活TXNIP/Trx-1/GPX4通路,导致新生大鼠海马神经元铁死亡,进而导致HIBD。

过表达TRX-1通过调控Nrf2/HO-1通路影响帕金森病PC12细胞凋亡

目的探讨过表达TRX-1在帕金森病PC12细胞中通过调控Nrf2/HO-1通路对细胞凋亡的影响。方法用1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP^+)诱导PC12细胞建立帕金森病细胞模型。将pcDNA-hTRX-1质粒转染至PC12细胞中,qRT-PCR检测TRX-1 mRNA的表达。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率以及细胞内活性氧水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素c(Cyt-c)、裂解Caspase-3(cleaved Caspase-3)和氧化应激相关蛋白Nrf2和HO-1的表达。结果TRX-1在帕金森病PC12细胞中低表达;过表达TRX-1能提高帕金森病PC12细胞活力,抑制细胞凋亡,并且能激活Nrf2/HO-1通路。结论过表达TRX-1能通过激活Nrf2/HO-1通路进而抑制帕金森病PC12细胞的凋亡。

TRX-1在肝细胞肝癌中的表达与临床病理特征及预后的相关性分析

目的分析TRX-1在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达与临床病理特征及预后的相关性.方法 选取59例HCC患者作为观察对象,收集患者的HCC组织、癌旁组织活检标本,应用免疫组化法(SP法)检测所有标本的TRX-1表达水平,探讨TRX-1表达与HCC临床病理特征、预后的关系.结果 59例HCC患者中,HCC组织的TRX-1表达率为67.80％,癌旁组织的TRX-1表达率为15.25％;两组数据具有显著性差异(P＜0.05);TRX-1与HCC患者的年龄、病理分级、病灶直径具有相关性(P＜0.05),与性别、是否患有乙肝、肝硬化无相关性(P＞0.05).结论 TRX-1在HCC中的表达具有特异性,表达水平显著高于癌旁组织,与年龄、病理分级、病灶直径具有相关性,为临床诊断HCC、评估疗效及预后而提供依据.

血清硫氧还蛋白-1水平与幽门螺杆菌感染及胃黏膜病理改变的相关性研究

目的探讨血清硫氧还蛋白(TRX-1)水平与幽门螺杆菌(H.pylori)感染及胃黏膜病理改变的关系,进一步明确其临床意义。方法选择2009年4—7月于北京大学第三医院进行胃镜检查的患者116例,于胃镜检查前抽血检测血清TRX-1水平,同时检测血清H.pylori抗体。检测方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法。所有患者进行胃镜检查时于胃窦和胃体分别钳取至少一块组织进行病理组织学HE染色及Warthin-Starry染色。结果H.pylori阳性患者血清TRX-1水平(9.45 ng/ml)高于H.pylori阴性患者(8.99 ng/ml),但差异无统计学意义(U=1 488.000,P=0.775)。慢性浅表性胃炎(CSG)患者血清TRX-1水平(8.98 ng/ml)低于慢性萎缩性胃炎(CAG)患者(10.40 ng/ml),但差异无统计学意义(u=1 068.000,P=0.641)。无论在CSG还是CAG患者,H.pylori感染与否对血清TRX-1水平影响间差异均无统计学意义(P值分别为0.475和0.423)。男性患者血清TRX-1水平(8.24ng/ml)低于女性患者(10.27 ng/ml),差异有统计学意义(P=0.044)。结论 H.pylori感染与否对血清TRX-1水平无影响,在胃黏膜不同炎性状态下,以及不同炎性状态下H.pylori感染与否,血清TRX-1水平没有差异,性别对血清TRX-1水平可能有影响。

姜黄素调控Trx-1/TXNIP复合体防治对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤的研究

为了探讨姜黄素(CUR)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠肝脏损伤的保护作用及机制,试验将60只ICR小鼠随机分成正常对照组、模型组、N-乙酰半胱氨酸组(按体重150 mg/kg灌胃N-乙酰半胱氨酸)、姜黄素低剂量组(按体重50 mg/kg灌胃CUR)、姜黄素中剂量组(按体重100 mg/kg灌胃CUR)和姜黄素高剂量组(按体重200 mg/kg灌胃CUR),对模型组、N-乙酰半胱氨酸组及姜黄素低、中、高剂量组连续灌胃10 d,然后一次性按体重300 mg/kg腹腔注射APAP诱导小鼠急性肝损伤,24 h后,摘眼球取血并处死各组小鼠,计算小鼠肝脏指数,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,以及肝脏组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量,活性氧(ROS)水平;并取肝脏组织进行H.E.染色,观察小鼠肝脏病理组织学变化。通过RT-qPCR方法检测肝脏中Trx-1/TXNIP/NLRP3通路mRNA相对表达量。结果表明:与正常对照组比较,模型组小鼠的肝脏指数,血清ALT、AST、LDH活性,肝脏组织MDA含量、ROS水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),肝脏组织GSH含量和CAT、SOD活性显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),Trx-1 mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β的mRNA相对表达量极显著增加(P<0.01)。与模型组相比,姜黄素低中高剂量组小鼠血清ALT、AST、LDH活性,肝脏指数和肝脏组织MDA、ROS含量极显著降低(P<0.01),肝脏组织CAT、SOD活性和GSH含量显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),Trx-1的mRNA相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β的mRNA相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。模型组肝脏组织肝索紊乱,肝细胞大量坏死,核溶解,肝窦炎性浸润和充血;姜黄素各剂量组肝索结构基本正常,肝细胞坏死减少。说明姜黄素通过抗氧化和抗炎作用对APAP诱导的小鼠急性肝损伤发挥保护作用,其机制可能与Trx-1表达量增加和TXNIP表达量降低有关。

硒多糖抗肝细胞癌效应与硫氧还蛋白1的关系

目的探讨硒多糖抗肝细胞癌(HCC)效应与硫氧还蛋白(Trx)-1的关系。方法设置0、50、100、200和400μg/ml共计5组浓度梯度,利用MTT细胞毒活性检测法在细胞水平研究硒多糖对HepG2细胞活力的影响;在分子水平,使用Western印迹检测硒多糖对HepG2细胞内Trx-1表达的影响,并进一步检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达。结果硒多糖200μg/ml、400μg/ml组的细胞活力较其他浓度显著下降(P<0.05),显著抑制HepG2细胞活性;200μg/ml、400μg/ml组的硒多糖处理使HepG2细胞Trx-1表达量显著降低(P<0.01);凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达量分别在200μg/ml及100μg/ml时开始显著变化(P<0.05)。结论硒多糖可能是通过下调Trx-1的表达诱导HepG2细胞发生凋亡从而抑制HepG2细胞的生长。

人IGF-1在大肠杆菌中的可溶表达和纯化

目的:在大肠杆菌中的可溶表达和纯化人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)。方法:根据hIGF-1的氨基酸序列和大肠杆菌密码子偏爱性,利用重叠延伸PCR的方法合成hIGF-1DNA序列,构建表达载体,在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中与硫氧还蛋白TrxA融合表达,并通过盐析和镍柱亲合层析进行纯化。结果:SDS-PAGE分析显示,重组融合蛋白以可溶形式存在,分子量约为28kDa,占上清总蛋白的50%以上。经盐析和镍柱亲合层析进行纯化,目标蛋白纯度可达到90%左右。结论:复合干扰素在大肠杆菌中的高效可溶表达。

弥漫大B细胞淋巴瘤中Trx、TrxR-1及TXNIP的表达及临床意义

目的探讨硫氧还蛋白(Trx)、硫氧还蛋白还原酶1(TrxR-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测60例DLBCL和20例淋巴结反应性增生组织中Trx、TrxR-1及TXNIP的表达,并分析三者表达与DLBCL临床病理特征的关系。结果DLBCL中Trx和TrxR-1的阳性率分别为68.33%和76.67%,淋巴结反应性增生组织中Trx和TrxR-1的阳性率分别为25.00%、35.00%,DLBCL中Trx和TrxR-1的阳性率均明显高于淋巴结反应性增生组织,差异有统计学意义(P<0.05);TXNIP在DLBCL中的表达(20.00%,12/60)低于淋巴结反应性增生组织(80.00%,16/20),差异有统计学意义(P<0.05)。DLBCL中Trx、TrxR-1和TXNIP的表达与临床分期、IPI评分有关(P<0.05),与患者性别、年龄、乳酸脱氢酶水平无关(P>0.05)。ROC结果显示,Trx、TrxR-1单项检测曲线下面积(AUC)分别为0.717与0.708,而两者联合检测AUC为0.767,高于单独检测。结论Trx、TrxR-1及TXNIP表达异常可能与DLBCL发生、发展有关,联合检测Trx和TrxR-1表达可为DLBCL的诊断提供参考价值。

急性坏死性胰腺炎大鼠硫氧还蛋白-1表达及清胰Ⅱ号颗粒剂对肾脏损伤保护作用的实验研究

目的检测内源性硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx-1)在急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)大鼠模型血液、胰腺和肾组织的表达;并观察中药清胰Ⅱ号颗粒剂对ANP胰腺和肾脏的保护作用以及对肾脏组织Trx-1表达的影响。方法将96只SD大鼠随机分为正常组(A组,n=24)、假手术组(B组,n=24)、ANP组(C组,n=24)及治疗组(D组,n=24)。在制模后1小时治疗组给予250g/l清胰Ⅱ号颗粒剂灌胃(10ml/kg),6h1次,共3次,正常组、假手术组、ANP组三组给予等量生理盐水灌胃。于制模后6h、12h、24h测定各组血清中Trx-1的水平;制模后24小时处死大鼠,应用免疫组织化方法对胰腺以及肾脏中Trx-1的表达情况进行测定。结果 24小时内正常组、假手术组血清中Trx-1的表达较稳定,ANP组呈现一个持续升高的趋势,而治疗组Trx-1的表达则呈现一个先上升后下降的趋势,12h治疗组Trx-1的表达较其它三组明显升高(P<0.05),24hANP组血清中Trx-1的表达较假手术组明显升高(P<0.05),而24h治疗组血清中Trx-1的表达又较ANP组降低(P<0.05),但仍高于正常组和假手术组(P<0.05);病理结果显示ANP组胰腺及肾脏组织损伤明显,Trx-1的表达呈阳性,较正常组、假手术组、治疗组比较有统计学意义(P<0.05)。结论 Trx-1在ANP模型大鼠肾损伤中可能具有重要作用,中药清胰Ⅱ号颗粒可提前促进胰腺、肾脏组织Trx-1的表达,减轻ANP时胰腺和肾脏损害,对其有保护作用。

Gly33的缺失和突变对hTrx-1抗氧化活性的影响

为探讨人硫氧还蛋白hTrx-1活性位点保守序列中Gly33残基在还原氧化性蛋白过程中是否必不可少,通过合成突变基因对hTrx-1的Gly33残基进行缺失和替换(G→A)。合成的突变基因随后在原核细胞中表达并进一步纯化及检测抗氧化活性,结果表明,无论是Gly33残基的缺失还是突变为Ala,突变的hTrx-1均能在原核细胞中高效表达,暗示2种突变型hTrx-1均能形成“Trx折叠”结构。抗氧化活性检测表明Gly33残基缺失的情况下,其抗氧化能力有所下降,当Gly33突变为Ala时,其抗氧化能力大幅下降到接近失去抗氧化能力。推测Trx-1活性中心保守氨基酸残基的改变影响了活性中心区域的几何构象,从而导致底物蛋白难以从空间上靠近。参与形成二硫键巯基的含量检测结果表明,突变型hTrx-1中形成二硫键巯基的含量明显低于野生型hTrx-1中形成二硫键巯基的含量,推测突变型hTrx-1的Cys32与Cys35形成二硫键的能力受到影响。

野黄芩苷对血管性痴呆大鼠学习能力和Trx-1、TrxR-1的影响

[目的]探讨野黄芩苷对血管性痴呆大鼠学习记忆功能的影响及机制。[方法]选取SD大鼠60只,随机分为:假手术组、模型组、阳性对照组(地塞米松6 mg/kg)、野黄芩苷低、中、高剂量组(100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg);构建血管性痴呆大鼠模型,并灌胃相应药物治疗。采用mNSS表对大鼠神经功能评分,Morris水迷宫实验检测大鼠学习和记忆能力,RT-qPCR检测Trx-1、TrxR-1 mRNA,Western Bloting检测Trx-1、TrxR-1蛋白。[结果]与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分、逃逸时间显著增加(P<0.05),停留时间、穿越次数、Trx-1、TrxR-1 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);在给予野黄芩苷和地塞米松干预后,与模型组比较,阳性对照组和野黄芩苷低、中、高剂量组mNSS、逃逸时间均显著降低,停留时间、穿越次数、Trx-1、TrxR-1 mRNA和蛋白水平显著升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);阳性对照组与野黄芩苷高剂量组各指标比较无显著差异(P>0.05)。[结论]野黄芩苷可有效活化海马组织中Trx-1、TrxR-1表达水平,从而改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能。

普罗布考抑制过氧化氢诱导血管平滑肌细胞的凋亡

目的研究抗氧化剂普罗布考(probucol)对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法以1mmol·L-1H2O2为VSMC凋亡诱导剂,probucol浓度为100、10和1μmol·L-1,孵育6h,采用Annexin V-FITC染色、TUNEL法和Hoechst33258染色法观察细胞凋亡;Western blot检测细胞中ASK-1和Trx-1蛋白的表达。结果H2O2可促使VSMCs凋亡,细胞中ASK-1蛋白表达增加,Trx-1蛋白表达降低。Probucol可减轻H2O2所致的细胞凋亡,呈浓度依赖性;同时细胞中ASK-1蛋白表达降低,Trx-1蛋白表达增加。结论probucol能拮抗H2O2诱导的血管平滑肌细胞凋亡,其机制可能与降低细胞中ASK-1蛋白表达,升高Trx-1蛋白表达有关。

硫氧还蛋白在脓毒症中的作用研究进展

脓毒症是临床危重患者最主要的死亡原因,但发病机制尚未完全清楚。炎症反应、免疫细胞凋亡和氧化应激是参与脓毒症发生发展的重要环节。硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx-1)是体内重要的氧化应激调节蛋白,具多种生物学活性。目前研究发现, Trx-1对脓毒症能够发挥保护作用,Trx-1可以减轻炎症反应,抑制细胞凋亡,降低氧化应激,并提高机体的细菌清除率。本文对Trx-1在脓毒症中的作用机制的研究进展做一综述。

半夏泻心汤结合三联抗Hp方案治疗胃癌前病变患者临床疗效及对预后的影响

目的观察半夏泻心汤结合西药三联抗Hp方案治疗幽门螺旋杆菌(Hp)阳性胃癌前病变患者的临床疗效及对胃癌患病率的影响和作用机制。方法选取医院消化科就诊的胃癌前病变患者148例,随机分为观察组和对照组,每组74例。对照组使用三联疗法抗Hp方案治疗,观察组加以半夏泻心汤加减口服治疗。分别对2组患者治疗前后血清G-17及血清硫氧还蛋白-1(TRX-1)水平进行检测,分析2组治疗有效率,使用自主研发的胃癌前病变前瞻性自动监测随访软件对2组患者进行随访,观测其胃癌发病率并进行分析。结果观察组治疗总有效率为89.19%,高于对照组的79.73%(P<0.05);2组血清G-17、TRX-1水平较治疗前均降低,且观察组优于对照组(P<0.05)。使用胃癌癌前病变随访软件对2组进行监控,观察组的在随访期间一、二级预警人数少于对照组,而三、四级预警人数多于对照组(P<0.05)。观察组再感染Hp率为6.76%,胃癌发病率为2.70%;对照组再感染Hp率为17.57%,胃癌发病率为6.76%,观察组优于对照组(P<0.05)。结论半夏泻心汤结合三联疗法治疗Hp阳性胃癌前病变患者,可有效改善患者的临床症状,降低Hp再感染率,有助于Hp的进一步根治,降低胃癌发病风险,值得推广借鉴。

川芎嗪对人骨关节炎软骨细胞的影响及作用机制研究

目的:探讨川芎嗪对人骨关节炎软骨细胞的影响及其作用机制。方法:收集接受膝关节置换术患者的膝关节软骨组织,分离并培养软骨细胞,采用肿瘤坏死因子-α诱导建立骨关节炎软骨细胞模型;将骨关节炎软骨细胞随机分为对照组和川芎嗪低、中、高浓度组,对照组加入正常培养基进行培养,川芎嗪低、中、高浓度组分别加入含川芎嗪浓度为25μg·mL^(-1)、50μg·mL^(-1)、100μg·mL^(-1)的培养基进行培养。培养24 h后,分别采用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法和MTT法测定软骨细胞的凋亡率和活力,分别采用实时定量PCR和蛋白印迹法分析软骨细胞凋亡相关基因硫氧还蛋白(thioredoxin, Trx)-2、凋亡信号调节激酶(apoptosis signal regulating kinase, ASK)-1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine aspartic acid specific protease, Caspase)-3的mRNA和蛋白表达。结果:(1)软骨细胞培养结果。原代细胞培养至第15天,可见组织块周围有细胞成簇生长,细胞呈梭形、三角形或多角形;第3代软骨细胞多呈长梭形。(2)软骨细胞鉴定结果。甲苯胺蓝染色显示,细胞呈长梭形,有1~3个细胞核,细胞质呈蓝色;免疫组化染色显示,细胞Ⅱ型胶原蛋白呈阳性,细胞质内可见黄色颗粒,细胞核无着色,表明为软骨细胞。(3)软骨细胞凋亡率测定结果。4组软骨细胞凋亡率比较,差异有统计学意义[(25.10±0.47)%,(22.08±0.25)%,(19.37±0.36)%,(16.05±0.58)%,F=13.776,P=0.000]。川芎嗪低、中、高浓度组软骨细胞凋亡率均低于对照组(LSD-t=12.685,P=0.000;LSD-t=21.642,P=0.000;LSD-t=27.107,P=0.000),川芎嗪中、高浓度组软骨细胞凋亡率均低于川芎嗪低浓度组(LSD-t=13.826,P=0.000;LSD-t=21.349,P=0.000),川芎嗪高浓度组软骨细胞凋亡率低于川芎嗪中浓度组(LSD-t=10.875,P=0.000)。(4)软骨细胞活力测定结果。4组软骨细胞活力比较,差异有统计学意义(吸光度值:0.25±0.04,0.41±0.02,0.54±0.02,0.60±0.01,F=131.875,P=0.000),川芎嗪低、中、高浓度组软骨细胞活力均高于对照组(LSD-t=8.000,P=0.000;LSD-t=14.500,P=0.000;LSD-t=18.981,P=0.000),川芎嗪中、高浓度组软骨细胞活力均高于川芎嗪低浓度组(LSD-t=10.277,P=0.000;LSD-t=19.000,P=0.000),川芎嗪高浓度组软骨细胞活力高于川芎嗪中浓度组(LSD-t=6.000,P=0.000)。(5)软骨细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达分析结果。4组软骨细胞Trx-2、ASK-1及Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量比较,组间差异均有统计学意义。川芎嗪低、中、高浓度组软骨细胞Trx-2的mRNA和蛋白相对表达量均高于对照组(mRNA:LSD-t=6.925,P=0.000;LSD-t=15.581,P=0.000;LSD-t=16.046,P=0.000;蛋白:LSD-t=2.479,P=0.000;LSD-t=23.000,P=0.000;LSD-t=33.988,P=0.000),川芎嗪中、高浓度组软骨细胞Trx-2的mRNA和蛋白相对表达量均高于川芎嗪低浓度组(mRNA:LSD-t=7.044,P=0.000;LSD-t=9.581,P=0.000;蛋白:LSD-t=6.149,P=0.000;LSD-t=15.321,P=0.000),川芎嗪高浓度组软骨细胞Trx-2的mRNA和蛋白相对表达量均高于川芎嗪中浓度组(LSD-t=3.994,P=0.004;LSD-t=18.605,P=0.000);川芎嗪低、中、高浓度组软骨细胞ASK-1和Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组(mRNA:LSD-t=8.808,P=0.000;LSD-t=10.398,P=0.000;LSD-t=19.350,P=0.000;LSD-t=3.796,P=0.000;LSD-t=5.096,P=0.000;LSD-t=10.028,P=0.000;蛋白:LSD-t=5.041,P=0.001;LSD-t=13.466,P=0.000;LSD-t=21.719,P=0.000;LSD-t=2.481,P=0.038;LSD-t=7.286,P=0.001;LSD-t=16.865,P=0.000),川芎嗪中、高浓度组软骨细胞ASK-1和Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量均低于川芎嗪低浓度组(mRNA:LSD-t=3.385,P=0.000;LSD-t=20.466,P=0.000;LSD-t=3.400,P=0.000;LSD-t=9.701,P=0.000;蛋白:LSD-t=8.296,P=0.000;LSD-t=17.303,P=0.000;LSD-t=6.228,P=0.000;LSD-t=17.365,P=0.000),川芎嗪高浓度组软骨细胞ASK-1和Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量均低于川芎嗪中浓度组(mRNA:LSD-t=9.550,P=0.005;LSD-t=3.619,P=0.007;蛋白:LSD-t=14.017,P=0.005;LSD-t=4.985,P=0.001)。结论:川芎嗪能够抑制人骨关节炎软骨细胞的凋亡,提高软骨细胞活力,且该作用在一定浓度范围内呈浓度依赖性;其作用机制可能与调控Trx-2/ASK-1/Caspase-3信号通路有关。