结节性硬化症TSC2基因5238-5255 del 18 bp及2713 C>T基因突变分析

目的检测并分析2例中国汉族结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)患者TSC2基因突变特点。方法采用直接测序法对31个家系的34例TSC患者及其父母33名进行TSC1基因和TSC2基因全长编码外显子基因检测。测序后发现第25家系先证者为TSC2基因外显子40的框内移码突变5238-5255 del 18 bp,第11家系先证者为TSC2基因外显子23错义突变Arg905Trp。进一步采用变性凝胶电泳及内切酶技术在患者与120名正常对照中检测这两种突变。结果第25家系先证者外显子40出现5238-5255d el CATCAAGCGGCTCCGCCA突变,导致6个氨基酸缺失的框内移码突变(1746-1751del His-Ile-Lys-Arg-Leu-Gly),第11家系先证者外显子23出现2713 C>T(Arg905Trp)错义突变,2713位碱基由胞嘧啶(C)改变为胸腺嘧啶(T),导致第905位氨基酸精氨酸被色氨酸替代。120名正常对照未检测到这两种突变。结论TSC2基因5238-5255 del 18 bp及2713 C>T突变为两种致病性突变。

结节性硬化症TSC2基因突变的分析

目的分析结节性硬化症(TSC)致病基因TSC2突变方式。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术,对TSC一家系4例TSC患者(其中1例疑似)、1例散发性TSC患者外周血TSC2的41个外显子进行检测,并与家系中健康对照组和无血缘关系健康对照组进行比较。结果此1家系中4例TSC患者(包括1例疑似)的TSC2基因外显子33发生了1346丝氨酸(S)→脯氨酸(P)(4037T→C)错义突变,1例散发性TSC患者及两健康对照组未检测到TSC2基因突变。结论在TSC患者中TSC2外显子33错义突变(1346S→P,4037T→C)是一种尚未报道的新发现的基因突变方式。

结节性硬化症TSC1和TSC2基因型与临床表型相关性研究

目的探讨结节性硬化症TSC1和TSC2基因型与临床表型相关性。方法对2016年8月至2017年8月就诊的30例临床诊断为结节性硬化症的患儿行TSC1、TSC2基因分析,并进行基因型-表型关系分析。结果 30例患儿中,男22例、女8例,中位年龄6.45岁。5例发现TSC1基因突变、22例发现TSC2基因突变,突变率90%。TSC1和TSC2基因突变类型有5种,错义突变、无义突变、大片段缺失、移码突变和剪切突变,以无义突变、剪切突变和移码突变的发生率最高。其中TSC1基因仅发现剪切突变和移码突变;TSC2基因上述5种突变均有发现。共发现12种结节性硬化症的临床表型,其中以面部血管纤维瘤、癫痫和智力低下的发生率最高。癫痫发生在TSC2和TSC1基因型之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论结节性硬化症临床表型和突变类型较多,TSC2基因突变频率大于TSC1基因,TSC2基因突变更易引发严重的结节性硬化症的临床表现。

结节性硬化症双生子中TSC2基因突变的检测

目的:对一对结节性硬化症双生子患者及其父母候选基因的突变进行检测,揭示该病的遗传基础。方法:采用聚合酶链式反应,扩增结节性硬化症双生子患者TSC2基因的全部外显子,以及内含子外显子交接区,进行DNA直接测序分析;利用限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测了患者的父母和500个健康人的突变,并分析本突变是否和结节性硬化症有关。结果:双生子患者中均发现一个TSC2基因的错义突变c.G2032A,该突变导致TSC2蛋白678位的丙氨酸被替换为苏氨酸(p.A678T);RFLP结果显示患者的父亲有c.G2032A突变,500个正常人中有3人也携带此突变。结论:在结节性硬化症人群中发现TSC2基因新的突变,这一发现丰富了该基因引起结节性硬化症的突变谱。

TSC2基因突变致儿童肺淋巴管平滑肌瘤病1例并文献复习

肺淋巴管平滑肌瘤病(PLAM)是一种病因未明,由平滑肌异常增殖导致支气管、淋巴管和小血管阻塞,呈进行性发展的全身性疾病。目前关于儿童PLAM的相关报道较少见。该文报道了1例由TSC2基因10号外显子c.856A>G,p.Met286Val杂合突变引起的儿童PLAM。

结节性硬化症一家系的TSC2基因变异分析和产前诊断

目的:探讨一个结节性硬化症(TSC)家系的遗传学病因。方法:选择2021年8月23日就诊于怀化市妇幼保健院产前诊断中心一孕12周胎儿,收集其TSC家系临床信息,运用全外显子测序筛查可疑致病位点,结合Sanger测序验证,确定致病位点并对胎儿进行产前诊断。结果:先证者(胎儿父亲)癫痫反复发作,背部、臀部多个大小不一色素斑,双侧侧脑室膜下多发小结节钙化灶,双肾多发高回声结节,肝脏多发血管平滑肌脂肪瘤;全外显子测序检测发现TSC2基因10号外显子存在c.968 T>C(p.F323S)杂合变异,临床诊断符合TSC。胎儿孕29+周、31+周超声检测均发现胎儿心脏、肾内、颅内多个强回声团,对胎儿及家庭成员进行Sanger测序验证发现胎儿变异位点与父亲一致,该变异在国内外数据库中均未收录,亦无相关文献报道。结论:根据先证者、胎儿临床资料以及测序结果家系验证分析,认为c.968 T>C(p.F323S)杂合变异是TSC2基因一个新的致病位点,是该家系的致病原因,为其遗传咨询和产前诊断提供了依据。

结节性硬化症一家系新发TSC2基因变异分析

目的 对一个结节性硬化症家系进行基因检测,明确其致病基因变异。方法 收集一个结节性硬化症家系的临床资料,分析其遗传学特点,采集先证者及其他家庭成员的外周血,提取基因组DNA,运用二代测序法筛查可疑致病基因变异,再通过Sanger测序验证。结果 该家系先证者皮损表现为面部红色丘疹、前额斑块,全身多处色素减退斑,伴有癫痫病史;先证者母亲皮损表现为面部肤色丘疹,全身多处色素减退斑。经二代测序及Sanger测序验证,先证者TSC2基因40号外显子存在c.5108dupT(p.Ser1704Valfs*2)杂合变异,先证者母亲也存在相同基因变异,其他家庭成员及100名无关正常对照未检测出该位点变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南,TSC2:c.5108dupT(p.Ser1704Valfs*2)为致病变异(PSV1+PM2+PP1+PP4)。结论 本研究新发现的TSC2基因40号外显子c.5108dupT(p.Ser1704Valfs*2)杂合变异是该家系的致病原因。

结节性硬化症家系TSC1/TSC2基因变异的分析及产前诊断

目的对29个结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)家系进行TSC1、TSC2基因的变异筛查,并对其中14个家系的高危胎儿进行产前诊断,探讨二代测序(next generation sequencing,NGS)联合多重连接探针扩增(multiple ligation-dependent probe amplification,MLPA)对TSC相关变异的筛查效果。方法采用NGS-Sanger测序和MLPA技术对29个家系的先证者进行TSC1/TSC2基因的变异检测;抽取胎儿羊水或绒毛样本,通过亲子鉴定试验排除母体污染;针对先证者携带的致病变异对胎儿进行基因诊断。结果在29个TSC家系中共检出27种疑似致病变异,其中TSC1变异5种(18.5%),TSC2变异22种(81.5%),12种未见文献报道。14个接受产前诊断的家系中,5个家系的胎儿为患者,其中2例胎儿携带TSC2基因新发变异,超声提示心脏多发横纹肌瘤,其余9个家系的胎儿判断为正常。结论本研究拓展了TSC1、TSC2基因的变异谱。高通量测序结合MLPA可以高效、准确地为TSC患者提供基因诊断。

儿童结节性硬化症TSC2基因突变2例报道

目的分析2例儿童结节性硬化症(TSC)散发病例TSC1和TSC2基因突变情况。方法采用高通量测序技术和多重连接探针扩增(MLPA)相结合的方式对两例TSC家系先证者外周血DNA行TSC相关基因(TSC1、TSC2)检测,确定基因突变位点,并针对突变位点设计扩增引物,采用聚合酶链反应和Sanger测序法对先证者及其父母外周血DNA行二代测序验证。结果家系1先证者存在TSC2基因(chr16),c.1228(外显子12)_c.1229(外显子12)insG(p.L410RfsX11)杂合突变,该突变为新发移码突变;家系2先证者存在TSC2基因(chr16),c.4925G>A(外显子38)(p.G1642D)杂合突变,该突变为新发错义突变。结论检测出2例TSC患者均出现TSC相关基因新发突变,但这2个新发突变与疾病的关系还需经突变蛋白功能细胞模型和动物模型的进一步验证。

一个结节性硬化症Ⅱ型家系TSC2基因的突变鉴定

先证者(图1,Ⅲ4)男,28岁,汉族。面部长有皮脂腺腺瘤(图2),头部CT检查发现多发点状钙化,腹部超声检查提示肾脏囊肿与肝脏血管瘤,心脏彩超未见异常。先证者的妻子共妊娠两次,首次妊娠孕中期超声提示胎心多发强回声团及心包积液,考虑为胎儿心脏横纹肌瘤,第2次妊娠孕中期超声提示胎儿心脏多发强回声团,再次考虑胎儿为心脏横纹肌瘤。胎儿磁共振提示脑部双侧基底节区出血。两次均于孕中期中止妊娠。经家系调查,先证者母亲与姨妈(Ⅱ2)面部均存在较大的皮脂腺腺瘤(图2),但其他部位均未做检查。

TSC2基因c.2355+1G>C变异致轻型结节性硬化症一例

目的探讨1例结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)患者可能的遗传学病因。方法应用高通量测序技术、多重连接探针扩增技术和Sanger测序技术对1例疑似结节性硬化症患者行基因变异分析,并在家系其他成员及100名正常对照中进行验证;通过反转录-PCR及Sanger测序技术确定该变异可能导致的mRNA转录变化。结果测序结果显示该家系中先证者发生了TSC2基因的c.2355+1G>C杂合变异,cDNA的序列分析表明该变异导致TSC2基因在第21外显子3′端插入62个碱基序列,这种剪切位点变化导致蛋白翻译提前终止,预测产生截短蛋白。结论TSC2基因c.2355+1G>C变异可能是该患者的致病原因。本研究结果不仅进一步丰富了TSC2基因的变异谱,同时为产前诊断和胚胎植入前遗传学检测的开展提供了理论基础。

结节性硬化症的两个TSC2基因新发框移突变

该研究采用高通量测序对两个结节性硬化症(TSC)家系先证者外周血DNA行TSC相关基因(TSC1、TSC2)及其拼接序列检测,确定基因突变位点,针对突变位点设计扩增引物,采用聚合酶链反应和Sanger测序法对先证者及其父母外周血DNA行一代测序验证。两家系先证者分别存在TSC2基因c.3981-3982ins A(p.Asp1327Aspfs X87)、c.4013-4014 delCA(p.Ser1338Cysfs)杂合突变。家系1先证者父母该位点均未见异常;家系2先证者母亲检出TSC2基因c.4013-4014 delCA杂合突变,先证者父亲、先证者外祖父母该位点未见异常。c.3981-3982 insA突变会导致氨基酸序列在第1413位提前终止编码,c.4013-4014 delCA突变导致氨基酸序列在第1412位提前终止编码,二者分别为家系1、家系2的致病突变,且均为新发框移突变,但与疾病的关系仍需要突变蛋白功能细胞模型和动物模型的进一步验证。

TSC2基因发生体细胞镶嵌突变导致结节性硬化症一例

目的报告1例TSC2基因发生体细胞镶嵌突变导致结节性硬化症患者的临床特点和基因突变情况。方法采集1例临床拟诊断结节性硬化症患者及其父母外周血提取基因组DNA，采用聚合酶链反应（PCR）及第二代测序法扩增TSC1和TSC2基因的全部外显子及其侧翼序列，并进行DNA测序分析，查找基因突变位点，以200例无关健康人DNA作为对照。提取患者皮损处皮肤组织DNA，利用PCR扩增TSC2基因目的片段并测序。结果患者临床出现面部血管纤维瘤、腰部色素减退斑、甲周纤维瘤及肾血管平滑肌脂肪瘤，符合结节性硬化症的诊断标准。患者TSC2基因存在c．5130_5131insT突变（p．V1711Cfs＊18），且瘤体DNA较外周血DNA携带更高频率突变。患者父母、无关正常对照及公开数据库均未发现该突变。结论TSC2基因发生体细胞镶嵌突变c．5130_5131insT是导致该患者较轻结节性硬化症表型的原因。

一例结节性硬化症TSC2基因的新发变异分析

目的对1例结节性硬化症患者进行基因变异分析,明确其可能的致病原因。方法收集患者及父母的外周血,提取基因组DNA,应用高通量测序对患者的致病基因进行筛查,再通过Sanger测序对患者及其父母进行验证。结果高通量测序提示患者TSC2基因存在可疑致病变异,经Sanger测序验证,患者TSC2基因第11外显子存在c.1053delG(p.Glu352SerfsX10)杂合变异,其父母及100名无关正常对照未检测出该位点变异,根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南,c.1053delG变异判定为致病性变异(PVS1+PS2+PM2)。结论TSC2基因第11外显子c.1053delG(p.Glu352SerfsX10)移码变异可能是导致患者发病的原因。

一例结节性硬化症新生儿的TSC2基因变异分析

目的:分析一例结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)新生儿的临床特点及遗传学特征。方法:采集1例以发色黄为首发表现的新生儿及其父母的外周血样,提取DNA进行基因高通量测序分析。结果:基因测序显示患儿TSC2基因第33外显子存在c.3914del(p.P1305Rfs*20)杂合变异,该变异为移码变异,可导致多肽链合成提前终止。结论:本例TSC新生儿以发色黄为首发表现,既往未见报道。TSC2基因第33外显子c.3914del(p.P1305Rfs*20)杂合变异可能为该患儿的致病原因。上述发现丰富了TSC2基因的变异谱。

一例TSC2基因嵌合变异致结节性硬化症患者的遗传学分析

目的对1个结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)家系进行TSC1和TSC2基因变异分析,明确其可能的致病原因。方法采集患者及其父母的外周血样,提取基因组DNA,应用靶向二代测序联合Sanger测序进行患者及其父母TSC1和TSC2变异检测。结果基因分析证实患者的TSC2基因存在c.3295_3298delG(p.Val1100CysfsTer3)嵌合杂合变异,父母TSC2基因均未检测出该变异,为新发变异,变异等位基因频率约为13.4%。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南,c.3295_3298delG变异判读为致病性变异(PVS1+PS2+PM2)。结论TSC2基因c.3295_3298delG(Val1100CysfsTer3)嵌合杂合变异可能为患者的致病原因。TSC的TSC2嵌合致病变异在国内尚未见报道。

小鼠单个卵母细胞和早期胚胎中结节性硬化综合征2型基因mRNA定量检测方法的建立

目的:建立在小鼠单个卵母细胞和早期胚胎中结节性硬化综合征2型(TSC2)基因mRNA定量检测的方法。方法:选择外源性内参,采用PCR技术,行微流电泳定量检测单个卵母细胞和早期胚胎中TSC2基因mRNA表达水平。结果:成功建立小鼠单个卵母细胞和早期胚胎中TSC2基因mRNA表达的定量检测方法,并绘制定量标准曲线,相关性好(r=-0.987)。结论:采用PCR技术,行微流电泳定量检测单个小鼠卵母细胞和早期胚胎中TSC2基因mRNA表达的方法可行,为从分子水平评价人类配子与胚胎质量提供了方法学基础。

婴幼儿结节性硬化症5例基因结果及临床特点分析

结节性硬化症(Tuberous sclerosis complex,TSC)是一种常染色体显性遗传病,由外胚层和器官发育异常导致多器官、多系统受累的神经皮肤综合征[1]。TSC临床表现多样,包括神经系统、皮肤、心脏、肾脏、眼等多脏器损害。近年来,研究报道TSC基因突变具有遗传异质性,突变类型及方式复杂,即使基因突变位点相同,临床表现也可能完全不同;而临床表现相同,基因突变位点及突变方式仍不一致[2]。该病致病基因是TSC1、TSC2,其中TSC2基因突变约占90%,相比TSC1突变,可能会引起早发性癫痫脑病等更严重的临床表现,面临更大风险[3]。因此,本研究回顾性分析我院确诊的5例TSC2基因变异致婴幼儿结节性硬化症的基因结果及临床特征,进一步丰富TSC2基因变异谱,深入认识临床表现及遗传学特征,为临床早期识别、诊断及治疗该疾病提供依据。

结节性硬化症患儿52例临床表型及基因型特点分析

目的分析52例结节性硬化症患儿的临床表型及TSC1/TSC2基因变异情况。方法收集2017年1月至2022年10月就诊于临沂市人民医院的59例结节性硬化症患儿的临床资料,对其主要家系成员进行TSC1及TSC2基因检测,分析致病性,并将基因检测阳性患儿分为TSC1基因变异组和TSC2基因变异组,比较两组的临床特征差异性。结果59例患儿中有52例检出TSC1或TSC2基因变异(包括TSC1基因变异17例,TSC2基因变异35例)。52例患儿中男性28例(53.8%),女性24例(46.2%);家族性病例17例(32.7%,包括TSC1基因变异10例,TCS2基因变异7例),散发病例35例(67.3%);皮肤色素脱失斑46例(88.5%),面部血管纤维瘤13例(25.0%),鲨革斑5例(9.6%),室管膜下结节/钙化49例(94.2%),皮质结节47例(90.4.%),室管膜下巨细胞星型细胞瘤2例(3.8%),智力障碍/发育迟缓39例(75.0%),癫痫发作49例(94.2%),心脏横纹肌瘤8例(15.4%),肾血管平滑肌脂肪瘤9例(17.3%),视网膜错构瘤4例(7.7%)。基因检测共检出49种变异,4种为大片段缺失/重复变异,45种为点变异。其中致病性变异41种,可能致病性变异7种,意义未明确1种。共发现国内外尚未见报道的变异位点16种、重复大片段1种。3个高频变异位点为p.Arg692*、p.Arg228*和p.Arg1200Try。TSC1基因变异组和TSC2基因变异组患儿在阳性家族史占比[10/17比7/35(20%),χ^(2)=7.838,P=0.005]、癫痫起病月龄[38.0(0.5~134.0)个月比8.0(0.1~63.0)个月,Z=3.506,P<0.001]及智力障碍/发育迟缓发生率[8/17比31/35(88.6%),χ_(adj)^(2)=8.423,P=0.004]上差异具有统计学意义。结论TSC临床表型谱广泛,可累及全身各个系统,主要为皮肤及神经系统。致病基因为TSC1/TSC2。TSC1基因变异患儿多有家族遗传,TSC2基因变异患儿癫痫起病年龄更早且智力障碍/发育迟缓发生率更高。本研究发现了未见报道的变异位点16种、重复大片段1种,热点变异3种,扩展了结节性硬化症的基因谱。

结节性硬化症5家系临床及基因突变分析

目的分析结节性硬化症的临床表现及基因变异情况。方法回顾分析5个结节性硬化症家系成员的临床资料及基因检测结果。结果 5个家系受累者多表现为不同程度的癫痫发作、色素脱失斑、智力低下。家系1先证者TSC1基因存在c.2074C>T杂合无义突变,其父母该位点未见异常;家系2先证者TSC2基因存在c.2545+10C>T杂合变异,为新发现的剪切变异,其父亲该位点为杂合子;家系3先证者TSC1基因存在c.2497C>T杂合无义变异,其母亲和姐姐该位点均为杂合子;家系4先证者TSC2基因存在c.4375C>T杂合变异,为新发现的无义变异,其母亲、姐姐及哥哥该位点均为杂合变异;家系5先证者未发现明确致病变异。结论具有相同TSC1变异位点的结节性硬化症患儿的临床表现可各不相同;发现新的TSC1致病变异。