TSG101-siRNA对肝癌耐药细胞株QGY／CDDP的逆转作用

目的构建TSG101(tumor susceptibility gene101)小干扰RNA(TSG101-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物顺铂(CDDP)对肝癌耐药细胞株QGY/CDDP增殖的影响。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;RT-PCR检测TSG101-siRNA对QGY/CDDP细胞tsg101mRNA表达的影响;Western blot检测TSG101-siRNA对TSG101基因表达蛋白的抑制效率;采用MTT法测定TSG101-siRNA联合化疗药物CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制作用。结果测序显示干扰载体构建成功,TSG101-siRNA能抑制tsg101mRNA表达,使QGY/CDDP细胞TSG101蛋白的表达下降,抑制QGY/CDDP细胞的增殖,明显增强CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制。结论TSG101-siRNA的真核表达载体能有效地抑制QGY/CDDP细胞的增殖,提高化疗药物CDDP对QGY/CDDP的抑制率,能逆转肝癌耐药细胞株QGY/CDDP对CDDP的耐药性。

鼻咽癌中TSG101基因的突变研究

应用PCR SSCP方法对鼻咽癌中TSG101基因的编码区进行突变检测,以探讨该基因在鼻咽癌变过程中的作用.16例鼻咽癌标本中未发现TSG101基因编码区存在突变.以上结果可以初步排除TSG101基因在鼻咽癌中突变的可能.

TSG101基因研究进展

TSG101基因是近年来发现的一个新的抑癌基因候选者，定位于11p15．1-p15．2，其产物TSG101蛋白具有多种重要功能，例如调控蛋白及囊泡运输，与细胞存活增殖有关等，其N端与泛素结合酶（UBC）有一定的同源性。近年来的研究表明，TSG101基因与多种肿瘤密切相关，其转录本在某些肿瘤细胞中发生了异常剪接；TSG101也有可能作为一种显性负调节子参与泛素系统对细胞周期的调节。它还参与艾滋病毒的感染过程。现对该基因的最新研究进展作一综述。

TSG101小干扰RNA对SH-SY5Y细胞生长和药物敏感性的作用

目的:探讨TSG101基因对人神经母细胞瘤细胞生长和药物敏感性的调节作用。方法:构建TSG101基因的小干扰RNA载体并将其转导入SH-SY5Y细胞,G418筛选后获得稳定转染的阳性克隆后,应用RT-PCR和Western blotting进行鉴定;MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化;DNAlad-der法和流式细胞仪检测细胞转染前后对顺铂诱导的凋亡的变化;Western blotting检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达变化。结果:成功构建了TSG101的小干扰RNA载体并将其转染SH-SY5Y细胞;筛选到稳定的TSG101低表达的神经母细胞瘤细胞模型;MTT和流式细胞仪检测结果显示,转染TSG101小干扰RNA后的细胞的生长速度显著减慢于对照组(P<0·05),且G1期的细胞比率显著高于对照组(P<0·05);DNAladder法和流式细胞仪检测结果显示,用10mg/LCDDP处理36h后,转染TSG101小干扰RNA后的细胞的凋亡数显著多于对照组(P<0·05),形成DNA条带;Western blotting显示,转染TSG101小干扰RNA后的细胞中Bcl-2和P-gp的表达明显低于对照组。结论:下调TSG101基因能抑制神经母细胞瘤细胞生长,增加细胞对化疗药物的敏感性,提示TSG101在基因治疗中具有较好的临床应用前景。

TSG101 siRNA表达载体的构建及其作用研究

目的构建TSG101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)小干扰RNA(TSG101 siRNA)的真核表达载体并鉴定,初步研究其与胃癌多药耐药的相关性。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;将TSG101 siRNA的真核表达载体转染胃癌长春新碱(VCR)耐药细胞SGC7901/VCR,通过Western blot鉴定TSG101 siRNA的抑制效率;以MTT实验检测细胞生长曲线和对VCR、阿霉素(ADM)的药物敏感性。结果所构建的载体经酶切后释放出预期大小的片断并经测序证实;TSG101 siRNA真核表达载体瞬时转染胃癌耐药细胞SGC7901/VCR后,发现TSG101的表达被显著抑制;细胞生长减慢,且对VCR、ADR的敏感性增加。结论成功构建了TSG101 siRNA的真核表达载体,并初步提示其参与了胃癌的多药耐药,为下一步工作奠定了基础。

TSG101在结肠癌中的表达及意义

目的:探讨TSG101在结肠癌中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测TSG101在结肠癌中的表达及其与肿瘤分化程度的关系。结果:TSG101在结肠癌的表达率为81/233(35%),其中在高、中、低度分化结肠癌的表达率依次为15/82(18%)、20/77(26%)、46/74(62%);在低分化结肠癌组织中的表达明显高于高分化和中分化结肠癌组织(P<0.05)。结论:TSG101在结肠癌的表达和肿瘤分化程度密切相关,可能在结肠癌的发生发展中扮演重要角色。

TSG101基因在肉瘤中表达的初步研究

目的检测肿瘤易感基因TSG101在肉瘤的表达情况,探讨其表达在肉瘤发生中的可能作用。方法福尔马林固定、石蜡包埋40例肉瘤标本进行HE和TSG101免疫组织化学染色,观察TSG101的表达情况。结果肿瘤易感基因TSG101在肉瘤中的表达率较低,仅为17.5%。结论TSG101基因的缺陷可能是间叶组织来源恶性肿瘤的常发事件,其表达情况与恶性上皮组织肿瘤中的显著差异对两者的鉴别诊断可能有帮助。

肿瘤易感基因101在胃癌细胞中的表达及意义

目的 探讨肿瘤易感基因 10 1(TSG10 1)在不同胃癌细胞系中的表达及其意义。方法 采用巢式RT PCR、DNA重组技术和Westernblot等方法从mRNA和蛋白水平检测TSG10 1的表达。结果 在 7株胃癌细胞系中均有野生型TSG10 1表达 ,经测序分析无基因突变 ;此外 ,尚存在 1个 2 88bp的剪接变异体 ;在胃癌细胞系MKN4 5、SGC790 1及其耐药亚系SGC790 1/VCR和SGC790 1/ADR中 ,还发现 1个 874bp的剪接变异体 ;并发现野生型TSG10 1在SGC790 1/VCR和SGC790 1/ADR中的表达较亲本细胞SGC790 1增高。结论 TSG10 1及其剪接变异体的表达在胃癌细胞系中常见 ,野生型TSG10 1可能参与了胃癌多药耐药的发生。

地西他滨体外对小鼠急性粒-单核白血病细胞WEHI-3的抗肿瘤作用及机制探讨

目的探讨去甲基化药物地西他滨对于小鼠急性粒-单核白血病细胞WEHI-3的凋亡、细胞周期的影响及其作用机制。方法急性粒-单核白血病细胞(WEHI-3)采用小剂量地西他滨0.25μmol/L连续体外处理3 d。采用瑞氏吉姆萨染色法观察细胞形态变化,AnnexinV-PI法检测WEHI-3不同时间的凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期变化情况,Q-PCR检测处理前后mRNA的表达情况。结果地西他滨处理后,WEHI-3细胞体积明显增大,胞质增多,形态不规则,染色质浓缩、边缘化;PBS处理的WEHI-3细胞G1期占39.64%,S期占49.43%,G2期占8.74%,地西他滨处理后WEHI-3细胞G1期增加至78.02%,S期减少至15.86%,G2期减少至2.91%,可见地西他滨处理后WEHI-3被阻滞于G1期;经地西他滨处理后WEHI-3细胞中MMD、TSG101、TAF7L、CITED2 mRNA表达水平显著提高(P均<0.01)。结论地西他滨可上调MMD、CITED2、TAF7L、TSG101基因表达,诱导小鼠急性粒-单核白血病WEHI-3细胞凋亡、细胞周期阻滞。