麻黄碱介导TSLP/OX40L通路调节变应性鼻炎大鼠Th2型免疫反应的作用研究

目的:探讨麻黄碱对卵白蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎大鼠Th2型免疫反应的抑制作用及可能机制。方法:将雌性SD大鼠随机分为4组,对照组、模型组、麻黄碱组(10 mg/kg)和氯雷他定组(2 mg/kg),每组10只。通过OVA诱导变应性鼻炎大鼠模型,并使用药物连续治疗7 d。治疗后,对大鼠进行鼻部症状评分,ELISA法检测大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、IL-4和IL-13水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠鼻腔组织形态,qRT-PCR和Western blot检测大鼠鼻黏膜组织TSLP和OX40L的mRNA和蛋白表达,免疫组织化学分析鼻黏膜组织中环氧合酶2(COX2)的表达。结果:与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组的鼻部症状评分显著降低,鼻腔组织病变明显减轻,COX2阳性细胞率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组大鼠血清中IgE、IL-4和IL-13水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组大鼠鼻黏膜组织中TSLP和OX40L的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:麻黄碱对OVA诱导的变应性鼻炎大鼠具有良好的治疗作用,麻黄碱可能通过TSLP/OX40L通路调节变应性鼻炎大鼠Th2型免疫应答,从而发挥治疗作用。

紫草素对特应性皮炎小鼠TSLP/OX40L通路及Th1/Th2平衡的影响

目的探究紫草素对特应性皮炎(AD)小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)/OX40配体(OX40L)通路及辅助性T细胞(Th)1/Th2平衡的影响。方法采用局部外涂2,4-二硝基氟苯(DNFB)法制备AD小鼠模型。采用随机数字表法将模型小鼠分为模型组,紫草素低(20 mg/kg)、中(30 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组和阳性对照组(泼尼松龙,10 mg/kg),每组15只;另取15只作为正常对照组。各给药组大鼠按10 mL/kg灌胃相应药物,模型组和正常对照组灌胃等体积溶剂,每日1次,连续15 d。分别于给药后第5、10和15天观察小鼠搔抓行为;于给药后第7、15天评价小鼠皮损状况;末次给药结束后,HE染色观察小鼠皮损组织病理学变化;流式细胞术检测小鼠外周血中Th1/Th2比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中TSLP、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ水平;Western blot法检测小鼠皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠搔抓行为增加,皮肤炎性损伤加重;皮损组织中表皮和真皮区域均有密集的炎性细胞浸润,表皮增厚;外周血Th2细胞、TSLP、TNF-α和IL-4水平以及皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平显著升高(P<0.05),外周血Th1细胞、Th1/Th2比例和IFN-γ水平显著下降(P<0.05)。与模型组相比,紫草素低、中、高剂量组小鼠第5、10、15天的搔抓行为减少,第7、15天皮肤炎性损伤依次减轻(P<0.05);小鼠表皮和真皮区域炎性细胞浸润和表皮增厚依次减轻,外周血Th2细胞、TSLP、TNF-α和IL-4水平以及皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平依次降低(P<0.05),Th1细胞、Th1/Th2比例和IFN-γ水平依次升高(P<0.05)。结论紫草素可能通过抑制TSLP/OX40L通路维持AD小鼠外周血中Th1/Th2平衡,改善皮肤炎性损伤。

橙皮苷对变应性鼻炎小鼠免疫反应及TSLP/OX40L/OX40信号通路的影响

目的基于胸腺间质淋巴细胞生成素(TSLP)/OX40L/OX40通路,探讨橙皮苷对变应性鼻炎小鼠鼻黏膜免疫炎性反应的影响。方法用卵清蛋白滴鼻法建立变应性鼻炎小鼠模型。小鼠随机分为正常对照组、模型组、橙皮苷组、OX40L阻断剂组、TSLP激活组、橙皮苷+TSLP激活组,每组20只,观察小鼠过敏症状并进行评分;ELISA法检测鼻腔灌洗液白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)表达;ELISA法检测血清免疫球蛋白E(IgE)、组胺水平;流式细胞术检测脾脏Th1/Th2比例;HE法检测鼻黏膜组织病理变化;免疫组化法检测OX40阳性表达;Western blot法检测TSLP、GATA3、T-bet、OX40L蛋白表达。结果与正常对照组相比,模型组小鼠鼻炎症状评分、血清免疫球蛋白E(IgE)及组胺水平升高,鼻黏膜组织损伤加重,IL-4分泌量、GATA3表达升高,Th1/Th2比例降低,TSLP/OX40L/OX40通路被激活(P<0.05)。橙皮苷及OX40L阻断剂的干预可改善小鼠鼻炎症状和鼻黏膜组织损伤、抑制TSLP/OX40L/OX40通路活化介导的IL-4分泌及GATA3表达(P<0.05)。TSLP激活剂促进了TSLP/OX40L/OX40通路活化介导的IL-4分泌及GATA3表达,加重小鼠鼻炎症状。此外,TSLP激活剂逆转了橙皮苷对小鼠免疫反应和TSLP/OX40L/OX40通路的抑制作用(P<0.05)。结论橙皮苷可能通过抑制TSLP/OX40L/OX40信号活化调节变应性鼻炎小鼠免疫反应,改善鼻炎症状;OX40L阻断剂与橙皮苷的效果相似,而TSLP激活剂可逆转橙皮苷对变应性鼻炎小鼠的治疗作用。

OX40L对儿童哮喘和哮喘小鼠模型辅助性T细胞分化的影响

目的:探讨OX40L对哮喘细胞免疫过程中辅助性T细胞分化的影响。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测哮喘患者和健康受试者血清OX40L、IL-4、IL-17、IFN-γ和TGF-β的浓度。3H-TdR渗入法测定T细胞的增殖。流式细胞仪分析Th1、Th2、Th17和Treg细胞数量。Western blot检测蛋白质表达和磷酸化。苏木精和伊红(HE)染色评价肺组织病理改变。结果:与稳定期哮喘患者或健康对照受试者相比,急性期哮喘患者的OX40L、IL-4和IL-17水平明显增加,而IFN-γ和TGF-β水平明显降低。用OX40L-Ig融合蛋白处理时,CD4^+T细胞的增殖进一步增加。OVA诱导的CD4^+T细胞中Akt的磷酸化水平升高,而OX40L-Ig融合蛋白处理的细胞中Akt的磷酸化水平进一步升高。PI3K/Akt抑制剂LY294002处理明显降低了OVA诱导的CD4^+T细胞的增殖。LY294002处理后,OVA诱导的CD4^+T细胞中IL-4、IL-17以及Th2和Th17细胞的数量明显减少。相反,LY294002显著升高了IFN-γ和TGF-β的表达以及Th1和Treg细胞的数量。用抗小鼠OX40L单抗处理时,与OX40L-Ig融合蛋白处理组相比,IL-4和IL-17水平以及Th2和Th17细胞的数量显著减少,而IFN-γ和TGF-β水平以及Th1和Treg的数量明显增加。HE染色显示,用抗小鼠OX40L单抗处理可抑制哮喘小鼠肺组织病变。结论:OX40L通过PI3K/Akt信号通路诱导了Th2和Th17细胞的分化,用抗小鼠OX40L单抗阻断OX40L可以诱导哮喘中的Th1和Treg细胞分化。

布地奈德抑制哮喘小鼠肺组织OX40、气道炎症和气道高反应性的研究

目的:研究布地奈德对哮喘模型小鼠肺组织OX40(CD134)表达、气道炎症和气道高反应性的干预作用。方法:18只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组。卵蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发建立哮喘模型。末次激发24 h后,测定气道反应性,HE染色观察炎症细胞浸润,ELISA法分别检测血清总IgE、OVA特异性IgE(OVA-sIgE)以及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的IL-4和IL-13。Western blot检测肺组织OX40蛋白表达。结果:随着氯化乙酰胆碱(Ach)浓度的增加,哮喘组小鼠气道阻力明显增加,正常组仅轻度增加,布地奈德组小鼠气道阻力的增加程度低于哮喘组小鼠(P<0.05);在BALF中炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞分类计数方面,哮喘组小鼠高于正常组小鼠(P<0.05),布地奈德组小鼠与哮喘组小鼠相比明显降低(P<0.05);在BALF中IL-4、IL-13和血清总IgE、OVA-sIgE方面,哮喘组高于正常组(P<0.05),布地奈德组低于哮喘组小鼠(P<0.05);哮喘组小鼠肺组织OX40高于正常组(P<0.05),布地奈德组与哮喘组相比小鼠肺组织OX40降低(P<0.05)。结论:布地奈德可抑制哮喘模型小鼠气道炎症和气道高反应性,可能与抑制OX40/OX40L协同刺激通路有关。

TLR4基因敲除对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:探讨TLR4基因敲除对哮喘小鼠气道炎症的影响及其意义。方法:利用卵清白蛋白(OVA)腹腔注射、雾化激发野生型(WT)和TLR4基因敲除(TLR4^(−/−))小鼠,分别建立小鼠哮喘模型;观察比较各组小鼠行为变化,HE染色观察肺组织病理切片,ELISA法检测BALF中IL-4、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β、TSLP,Western blot检测肺组织中GATA-3、T-bet、RORγt、Foxp3及OX40L蛋白水平,RT-PCR法观察GATA-3、T-bet、RORγt、Foxp3 mRNA水平。结果:与野生对照组小鼠相比,野生哮喘组小鼠肺组织及气管周围可见嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等大量炎症因子浸润,上层基底膜增厚;BALF中IL-4、IL-6、IL-17、TGF-β、TSLP浓度明显升高,IFN-γ、IL-10浓度显著降低(P<0.01);肺组织中GATA-3、RORγt、OX40L蛋白表达显著增高(P<0.01),T-bet、Foxp3蛋白表达显著降低(P<0.01);GATA-3、RORγt mRNA水平显著上升(P<0.01),T-bet、Foxp3 mRNA水平显著降低(P<0.01)。与野生哮喘组小鼠相比,TLR4基因敲除组哮喘小鼠肺组织炎症程度明显减轻,少见炎症因子浸润;BALF中IL-4、IL-6、IL-17、TGF-β、TSLP浓度明显降低(P<0.01),IFN-γ、IL-10浓度明显升高(P<0.01);肺组织中GATA-3、RORγt、OX40L蛋白表达明显降低(P<0.01),GATA-3、RORγt mRNA水平明显降低(P<0.01),T-bet、Foxp3蛋白表达及mRNA水平明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论:TLR4敲除可减轻哮喘模型小鼠气道炎症,其机制可能与TSLP浓度降低,OX40L水平下调,Th1/Th2、Th17/Treg失衡被纠正有关。

OX40/OX40L协同刺激通路在支气管哮喘中的作用

支气管哮喘(简称哮喘)是一种由T细胞介导的慢性气道炎症性疾病。T细胞活化需要两个不可或缺的刺激信号,即识别信号和协同刺激信号。OX40/OX40配体(OX40L)是T细胞激活通路中一对重要的协同刺激分子,参与T细胞的活化、增殖、迁移以及记忆性T细胞的形成,在哮喘的发生和发展过程中起重要作用。以OX40/OX40L信号通路作为靶点,有望为哮喘免疫治疗开辟新的途径。

OX40L对变应性鼻炎大鼠PI3K/Akt信号通路及T细胞亚群的影响

目的观察OX40L对变应性鼻炎(AR)大鼠PI3K/Akt信号通路相关蛋白及T细胞亚群的影响。方法将40只SPF级SD大鼠随机分为4组,各10只,各组采用既定方式造模,造模完成后对照组和模型组给予生理盐水鼻黏膜内注射干预,抗OX40L组给予抗OX40L单克隆抗体鼻黏膜内注射干预,OX40L-Ig组给予OX40L-Ig融合蛋白鼻黏膜内注射干预。造模完成后测定各组大鼠外周血OX40L表达,干预结束后观察PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达,检测T细胞亚群Th1、Th2、Th17、Treg细胞数量。结果模型组、抗OX40L组和OX40L-Ig组造模后未干预大鼠OX40L表达水平明显高于对照组(P<0.01)。模型组、抗OX40L组和OX40L-Ig组均可见杯状细胞化生、炎性细胞浸润、水肿、血管扩张等表现。对照组、抗OX40L组大鼠鼻黏膜组织p-PI3K、p-Akt表达明显低于模型组(P<0.05),抗OX40L组上述指标水平低于OX40L-Ig组(P<0.05),OX40L-Ig组上述指标水平高于模型组(P<0.05)。模型组血清Th1、Treg含量明显低于对照组(P<0.05),Th2、Th17含量明显高于对照组(P<0.05);抗OX40L组血清Th1、Treg含量明显高于模型组(P<0.05),Th2、Th17含量明显低于模型组(P<0.05);OX40L-Ig组血清Th1、Treg含量低于模型组(P<0.05),Th2、Th17含量高于模型组(P<0.05)。结论AR大鼠OX40L表达水平明显异常,可能参与PI3K/Akt信号通路中PI3K、Akt蛋白磷酸化的调控,影响Th2、Th17细胞分化,加重AR病理变化,抗OX40L单克隆抗体可降低PI3K、Akt蛋白磷酸化水平,纠正Th1、Th2、Th17、Treg细胞含量异常状态,有望成为治疗AR的新方法。

双共刺激通路阻断诱导小鼠胰岛移植耐受

有研究表明经典的共刺激分子CD154和一种新型的共刺激分子OX40在移植排斥中发挥重要的作用。我们通过联合阻断OX40／OX40L和CD40／CD154共刺激通路，观察其在胰岛移植排斥反应中的作用。