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猪带绦虫TSO18基因真核表达载体的构建及其表达
被引量:
2
1
作者
袁改玲
才学鹏
+3 位作者
景志忠
郑亚东
骆学农
郭爱疆
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2005年第7期529-532,共4页
采用PCR从重组克隆载体pGEMTSO18中扩增出猪带绦虫六钩蚴TSO18基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9k相连接,构建重组表达载体pPIC9kTSO18,转化大肠埃希氏菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确。制备重组质粒pPIC9kTSO18,用SalⅠ线性化,...
采用PCR从重组克隆载体pGEMTSO18中扩增出猪带绦虫六钩蚴TSO18基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9k相连接,构建重组表达载体pPIC9kTSO18,转化大肠埃希氏菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确。制备重组质粒pPIC9kTSO18,用SalⅠ线性化,并电转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到高拷贝重组菌株,以甲醇进行诱导表达,SDSPAGE和Westernblotting分析结果表明,诱导表达的培养上清中表达出具有反应活性的16ku重组蛋白,目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的80%以上,诱导72h目的蛋白表达量为0.5mg/mL。
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关键词
猪带绦虫
tso18基因
毕赤酵母
诱导表达
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职称材料
猪囊尾蚴疫苗候选基因TSO18在酵母中的高效表达
被引量:
9
2
作者
袁改玲
才学鹏
+5 位作者
景志忠
郑亚东
骆学农
贾万忠
李辉
丁军涛
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期563-567,共5页
将猪带绦虫六钩蚴TSO18基因亚克隆至毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K_TSO18,电转化毕赤酵母菌GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,并...
将猪带绦虫六钩蚴TSO18基因亚克隆至毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K_TSO18,电转化毕赤酵母菌GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,并对表达产物进行SDS_PAGE和Westernblot分析、脱糖基化分析、分子筛纯化和小鼠免疫接种等表明,目的蛋白得到了高效表达并进行了适度的糖基化,易于纯化且具有免疫活性。在5L发酵罐中目的蛋白表达量达到2·54mg/mL,为制备基因工程疫苗打下了坚实的基础。
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关键词
猪囊尾蚴
tso18基因
毕赤酵母
高效表达
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职称材料
猪带绦虫六钩蚴TSO18基因研究进展
被引量:
6
3
作者
周必英
陈雅棠
李文桂
《国际医学寄生虫病杂志》
CAS
2009年第6期417-420,共4页
猪囊尾蚴病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,疫苗是预防控制猪囊尾蚴病的重要手段。TSO18基因是猪带绦虫六钩蚴阶段重要的免疫原基因,被认为是最具有前途的疫苗候选基因。该文综述了猪带绦虫六钩蚴TSO18基因的分子生物学及...
猪囊尾蚴病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,疫苗是预防控制猪囊尾蚴病的重要手段。TSO18基因是猪带绦虫六钩蚴阶段重要的免疫原基因,被认为是最具有前途的疫苗候选基因。该文综述了猪带绦虫六钩蚴TSO18基因的分子生物学及其疫苗开发的研究进展。
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关键词
猪带绦虫
六钩蚴
tso18基因
疫苗
原文传递
猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达
被引量:
6
4
作者
周必英
刘美辰
杨凤娇
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期889-892,共4页
目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入...
目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为55kD,与预期结果相一致。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。
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关键词
猪带绦虫
tso
45W-4B-
tso
L
18
融合
基因
长双歧杆菌
表达
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职称材料
猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌诱导家猪免疫应答
被引量:
1
5
作者
周必英
刘美辰
万小波
《遵义医学院学报》
2015年第2期117-120,共4页
目的 观察猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌口服灌胃和肌肉注射家猪后诱导的免疫应答.方法 12头40日龄健康家猪随机均分为3组,每组4头.口服灌胃组每猪灌胃1011 CFU重组双歧杆菌[溶于50 mL双歧杆菌液体培养基(MRS)],肌肉...
目的 观察猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌口服灌胃和肌肉注射家猪后诱导的免疫应答.方法 12头40日龄健康家猪随机均分为3组,每组4头.口服灌胃组每猪灌胃1011 CFU重组双歧杆菌[溶于50 mL双歧杆菌液体培养基(MRS)],肌肉注射组每猪于猪后腿肌肉注射1011CFU重组双歧杆菌(溶于10 mL MRS),对照组每猪灌胃50 mL MRS.每次间隔2周,共免疫2次.于免疫后0、2、4、6和8周进行前腔静脉采血,采用ELISA法检测猪血清免疫球蛋白G(IgG)水平;制备猪外周血淋巴细胞(PBMC),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测猪PBMC增殖水平;收集粪便,测定分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平.结果 与免疫前和MRS对照组相比,口服灌胃组和肌肉注射组猪血清IgG水平、PBMC增殖水平均在免疫后2~8周升高,6周达较高水平;粪便sIgA水平在免疫后2~8周升高,4周达较高水平,差异均具有统计学意义(P<0.05).口服灌胃组的IgG、sIgA水平和PBMC增殖水平显著高于肌肉注射组(P<0.05).结论 猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌可诱导家猪产生有效的免疫应答,其免疫效果口服灌胃优于肌肉注射.
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关键词
猪带绦虫
tso
45W-4B-
tso
L
18
融合
基因
重组双歧杆菌
免疫应答
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职称材料
题名
猪带绦虫TSO18基因真核表达载体的构建及其表达
被引量:
2
1
作者
袁改玲
才学鹏
景志忠
郑亚东
骆学农
郭爱疆
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2005年第7期529-532,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划(973)项目(G1999011906)
文摘
采用PCR从重组克隆载体pGEMTSO18中扩增出猪带绦虫六钩蚴TSO18基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9k相连接,构建重组表达载体pPIC9kTSO18,转化大肠埃希氏菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确。制备重组质粒pPIC9kTSO18,用SalⅠ线性化,并电转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到高拷贝重组菌株,以甲醇进行诱导表达,SDSPAGE和Westernblotting分析结果表明,诱导表达的培养上清中表达出具有反应活性的16ku重组蛋白,目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的80%以上,诱导72h目的蛋白表达量为0.5mg/mL。
关键词
猪带绦虫
tso18基因
毕赤酵母
诱导表达
Keywords
Taenia solium
tso
18
gene
Pichia pastoris
induction expression
分类号
S852.734 [农业科学—基础兽医学]
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
猪囊尾蚴疫苗候选基因TSO18在酵母中的高效表达
被引量:
9
2
作者
袁改玲
才学鹏
景志忠
郑亚东
骆学农
贾万忠
李辉
丁军涛
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期563-567,共5页
基金
国家重点基础研究发展规划项目基金资助(No.G1999011906)~~
文摘
将猪带绦虫六钩蚴TSO18基因亚克隆至毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K_TSO18,电转化毕赤酵母菌GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,并对表达产物进行SDS_PAGE和Westernblot分析、脱糖基化分析、分子筛纯化和小鼠免疫接种等表明,目的蛋白得到了高效表达并进行了适度的糖基化,易于纯化且具有免疫活性。在5L发酵罐中目的蛋白表达量达到2·54mg/mL,为制备基因工程疫苗打下了坚实的基础。
关键词
猪囊尾蚴
tso18基因
毕赤酵母
高效表达
Keywords
Taenia solium,
tso
18
gene,Pichia pastoris,High-level expression
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
猪带绦虫六钩蚴TSO18基因研究进展
被引量:
6
3
作者
周必英
陈雅棠
李文桂
机构
重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所
贵州省遵义医学院寄生虫学教研室
出处
《国际医学寄生虫病杂志》
CAS
2009年第6期417-420,共4页
基金
国家自然科学基金(30801052
30671835
+1 种基金
30500423
30200239)
文摘
猪囊尾蚴病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,疫苗是预防控制猪囊尾蚴病的重要手段。TSO18基因是猪带绦虫六钩蚴阶段重要的免疫原基因,被认为是最具有前途的疫苗候选基因。该文综述了猪带绦虫六钩蚴TSO18基因的分子生物学及其疫苗开发的研究进展。
关键词
猪带绦虫
六钩蚴
tso18基因
疫苗
Keywords
Taenia solium
Oncosphere
tso
18
gene
Vaccine
分类号
R725.622.5 [医药卫生—儿科]
R383.32 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达
被引量:
6
4
作者
周必英
刘美辰
杨凤娇
机构
遵义医学院寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期889-892,共4页
基金
国家自然科学基金项目(No.81160206)
遵义医学院博士启动基金(No.ZMKD2013-016)~~
文摘
目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为55kD,与预期结果相一致。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。
关键词
猪带绦虫
tso
45W-4B-
tso
L
18
融合
基因
长双歧杆菌
表达
Keywords
Taenia solium
tso
45W-4B-
tso
L
18
fusion gene
Bi fidobacterium longum
expression
分类号
R383.33 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌诱导家猪免疫应答
被引量:
1
5
作者
周必英
刘美辰
万小波
机构
遵义医学院寄生虫学教研室
出处
《遵义医学院学报》
2015年第2期117-120,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(NO:81160206)
贵州省科技厅科学技术基金资助项目(NO:黔科合J[2014]2178)
文摘
目的 观察猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌口服灌胃和肌肉注射家猪后诱导的免疫应答.方法 12头40日龄健康家猪随机均分为3组,每组4头.口服灌胃组每猪灌胃1011 CFU重组双歧杆菌[溶于50 mL双歧杆菌液体培养基(MRS)],肌肉注射组每猪于猪后腿肌肉注射1011CFU重组双歧杆菌(溶于10 mL MRS),对照组每猪灌胃50 mL MRS.每次间隔2周,共免疫2次.于免疫后0、2、4、6和8周进行前腔静脉采血,采用ELISA法检测猪血清免疫球蛋白G(IgG)水平;制备猪外周血淋巴细胞(PBMC),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测猪PBMC增殖水平;收集粪便,测定分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平.结果 与免疫前和MRS对照组相比,口服灌胃组和肌肉注射组猪血清IgG水平、PBMC增殖水平均在免疫后2~8周升高,6周达较高水平;粪便sIgA水平在免疫后2~8周升高,4周达较高水平,差异均具有统计学意义(P<0.05).口服灌胃组的IgG、sIgA水平和PBMC增殖水平显著高于肌肉注射组(P<0.05).结论 猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌可诱导家猪产生有效的免疫应答,其免疫效果口服灌胃优于肌肉注射.
关键词
猪带绦虫
tso
45W-4B-
tso
L
18
融合
基因
重组双歧杆菌
免疫应答
Keywords
bifidobacterium
TS(M5W - 4B -
tso
L
18
fusion gene
recombinant bifidobacterium
immune response
分类号
R383.32 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪带绦虫TSO18基因真核表达载体的构建及其表达
袁改玲
才学鹏
景志忠
郑亚东
骆学农
郭爱疆
《中国兽医科技》
CSCD
北大核心
2005
2
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职称材料
2
猪囊尾蚴疫苗候选基因TSO18在酵母中的高效表达
袁改玲
才学鹏
景志忠
郑亚东
骆学农
贾万忠
李辉
丁军涛
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
9
下载PDF
职称材料
3
猪带绦虫六钩蚴TSO18基因研究进展
周必英
陈雅棠
李文桂
《国际医学寄生虫病杂志》
CAS
2009
6
原文传递
4
猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达
周必英
刘美辰
杨凤娇
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
6
下载PDF
职称材料
5
猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌诱导家猪免疫应答
周必英
刘美辰
万小波
《遵义医学院学报》
2015
1
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