抗微小隐孢子虫TSP6蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的在大肠埃希菌中可溶性表达微小隐孢子虫TSP6抗原分子,并以其纯化产物为抗原,利用杂交瘤技术生产抗TSP6单克隆抗体(McAb)。方法将pGEX-4T-1-TSP6重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经0.1mmol/LIPTG诱导表达后超声破菌,获得可溶性表达产物,通过Gluthathione-Sepharose 4B磁珠纯化蛋白质,以纯化的重组TSP6为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA和有限稀释法筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及效价,Western blot分析其特异性。结果筛选出2株杂交瘤细胞能稳定分泌抗TSP6单克隆抗体,经鉴定均为IgG1。Western blot分析显示,制备的单抗均能与相应的重组蛋白特异性结合。结论制备的抗TSP6杂交瘤细胞株能分泌高特异性的McAb。