旋毛虫肌幼虫ES抗原基因TSPGⅡ在真核细胞中的表达

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中切出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因，经ＥｃｏＲⅠ和ＢｓｔＸⅠ酶切鉴定；表达载体用相同的酶切，经琼脂糖凝胶电泳，分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ｐＳＶ·ＳＰＯＲＴⅠ表达载体，用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向连接，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取重组子，经ＥｃｏＲⅠ，ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定，构建了重组表达质粒ｐＳＶ·ＴＳⅡ。利用脂质体作载体，将重组表达质粒转染ｃｏｓ７细胞，４８～６０ｈ后用酶联免疫吸附试验检测，显示表达产物能与猪旋毛虫病的阳性血清反应。

人参总皂苷对K562细胞促红细胞生成素受体的作用

目的:研究人参总皂苷(TSPG)对人红白血病细胞株(K562)促红细胞生成素受体(EpoR)的作用。方法:以50、100、200、3005、00mg/L TSPG刺激K562细胞24h,采用流式细胞仪检测细胞膜EpoR表达的变化;Elisa检测K562细胞膜、细胞浆EpoR表达量的改变;激光共聚焦显微镜观察K562细胞EpoR表达的分布。结果:以不同剂量TSPG作用K562细胞24h,流式细胞仪检测显示K562细胞膜表面EpoR呈剂量依赖性下降;细胞Elisa实验结果也显示K562细胞膜表面EpoR表达呈剂量依赖性下降,而细胞浆内EpoR表达呈剂量依赖性增加;激光共聚焦显微镜观察可见K562细胞经200mg/L TSPG作用24h后其膜上的EpoR数量明显减少,荧光强度明显减弱。结论:TSPG可使K562细胞浆EpoR的表达增强,且随着剂量的加大更加明显,而使细胞膜中EpoR的表达减少,这可能是TSPG抑制K562细胞增殖的作用机制之一。

人参总皂苷对造血细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的研究人参总皂苷(TSPG)对脐血造血细胞(UCB)红细胞生成素受体(EPOR)表达的影响。方法以25、50、75和100mg/LTSPG刺激脐血单个核细胞24h,采用流式细胞仪检测细胞膜EPOR表达的变化;细胞Elisa实验检测细胞膜EPOR表达量的改变;免疫细胞化学观察细胞EPOR阳性率的变化。结果流式细胞仪检测显示50mg/LTSPG均能提高脐血细胞膜表面EPOR的表达;细胞Elisa实验结果显示50mg/LTSPG能够提高脐血造血细胞膜表面EPOR的表达量;免疫细胞化学观察显示TSPG50mg/L组单个核细胞的EPOR表达阳性率较对照组显著增高(P<0.01)。结论适当剂量(50mg/L)的TSPG可增强脐血单个核细胞膜表面EPOR的表达。

人参总皂苷对人胚胎神经干细胞增殖及定向诱导为多巴胺能神经元的影响

目的：探讨人参总皂苷（TSPG）对人胚胎神经干细胞（NSC）增殖和分化为多巴胺（DA）能神经元的影响。方法：从7～12周人工流产胚胎脑组织中分离培养人胚胎NSC,免疫细胞化学鉴定NSC特异性nestin抗原表达,在NSC的培养体系中加入TSPG,采用流式细胞术和MTT法检测不同浓度TSPG以及TSPG与EGF,bFGF联合应用对人胚胎NSC增殖的影响;经免疫细胞化学检测培养细胞酪氨酸羟化酶（TH）表达,分析不同浓度TSPG以及TSPG与IL-1联合应用对NSC定向诱导为DA能神经元的影响。结果：TSPG对NSC的增殖有促进作用,TSPG与EGF、bFGF联合应用的促增殖作用是EGF和bFGF联合应用时的2倍;TSPG能促进神经干细胞定向分化为DA能神经元,TSPG与IL-1联合诱导的效果是单用IL-1的5倍。结论：TSPG能促进人胚胎NSC的增殖,并能诱导NSC向DA能神经元分化。

人参总皂苷诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 研究人参总皂苷诱导白血病细胞凋亡及其机制 ,为进一步开发人参总皂苷提供实验依据。方法 采用细胞体外培养、图象分析技术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法 ,研究人参总皂苷诱导 K5 6 2细胞凋亡。结果 人参总皂苷对 K5 6 2细胞有增殖抑制作用 ,并可诱导 K5 6 2细胞凋亡明显增加 ,同时 K5 6 2细胞癌基因产物 C- MYC,BCL- 2表达明显降低。结论 人参总皂苷能诱导 K5 6 2细胞凋亡 ,其机制可能与调控癌基因产物的表达有关。

硫酸化人参总皂苷体外对免疫活性细胞功能的调节

采用MTT法及形态学观察法研究4种硫酸化人参总皂苷衍生物对体外ConA促淋巴细胞增殖、转化的影响,并采用乳酸脱氢酶释放法探讨了其对NK细胞杀伤活性的影响。结果表明,人参总皂苷对淋巴细胞增殖影响不明显,较高质量浓度(>150 mg/L)能抑制淋巴细胞增殖(P<0.01);硫酸化人参总皂苷衍生物2、3在一定质量浓度下都能明显或极明显增加淋巴细胞(鸡的外周血淋巴细胞,小鼠脾淋巴细胞)增殖活性(P<0.05,P<0.01),且所试质量浓度硫酸化人参总皂苷衍生物的D值显著或极显著高于同质量浓度人参总皂苷(P<0.05,P<0.01);人参总皂苷、衍生物2、3都能提高小鼠NK细胞的活性(P<0.01),且衍生物2、3的作用比人参总皂苷更强(P<0.05,P<0.01)。结果提示,人参总皂苷经硫酸化修饰后,在体外能明显增强免疫活性细胞功能。

三种中药皂甙对K_(562)细胞诱导分化作用的实验研究

目的研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）、绞股蓝总皂甙（ＧＰ）、三七总皂甙（ＰＮＳ）对Ｋ５６２细胞诱导分化的影响；方法采用细胞体外培养技术，通过细胞形态学、细胞化学、表面膜抗原（ＨＩＲ２、ＣＤ１５、ＣＤＷ４１）等检测方法；结果经三种皂甙诱导后，ＴＳＰＧ、ＧＰ不能诱导Ｋ５６２细胞合成过氧化物酶（ＰＯＸ）而能合成血红蛋白（Ｈｂ），仅有表达ＣＤＷ４１，ＨＩＲ２的阳性细胞数明显增加；而ＰＮＳ不能诱导Ｋ５６２细胞合成Ｈｂ而能合成ＰＯＸ，表达ＣＤＷ４１、ＨＩＲ２、ＣＤ１５的阳性细胞数均明显增加；结论ＴＳＰＧ、ＧＰ、ＰＮＳ均能诱导Ｋ５６２细胞向多系分化为较成熟的细胞，ＴＳＰＧ、ＧＰ主要诱导其向红系分化。

人参总皂甙诱导人肝癌细胞分化初探

目的 探讨人参总皂甙 (TSPG)对人肝癌细胞株HepG2的诱导分化作用。方法 以MTT法 ,光镜 ,电子显微镜和流式细胞仪分析法观察TSPG对人肝癌细胞生长增殖 ,形态 ,超微结构及细胞周期的影响。结果 癌细胞在 4 0 0ug mlTSPG处理后 ,生长受到明显抑制。光镜 ,电子显微镜表明经TSPG作用细胞形态向正常肝细胞方向逆转。流式细胞仪分析发现TSPG使细胞生长阻滞于S期。

大孔吸附树脂纯化人参总皂苷的工艺研究

目的应用大孔吸附树脂纯化人参提取物中人参皂苷,并对其工艺进行优化。方法以人参总皂苷的含量为指标,比较不同型号树脂和不同工艺条件对人参皂苷的分离纯化能力。结果 X-5树脂具有较好的吸附和解吸附性能,其最佳工艺条件为上样液质量浓度为5.99mg/ml,上样体积为2倍柱体积,吸附流速为1.1ml/min,用70%乙醇洗脱,用量5倍柱体积,洗脱流速为1.0ml/min,人参总皂苷纯度可达60%以上。结论该工艺简便,适宜于人参总皂苷的工业化分离纯化。

硫酸化人参总皂苷对人工感染MDV鸡淋巴细胞活性的调节

鸡马立克氏病病毒(MDV)经腹腔注射感染8日龄雏鸡,攻毒15 d后检测硫酸化人参总皂苷对鸡外周血白细胞数和淋巴细胞增殖活性的影响,并利用半定量RT-PCR方法分析外周血淋巴细胞IFN-γmRNA的表达水平。结果表明,MDV感染能引起鸡淋巴细胞百分比相对增多(P<0.01),人参总皂苷及其硫酸化人参总皂苷不能改变MDV所致变化(P>0.05),且硫酸化人参总皂苷与人参总皂苷之间没有差异(P>0.05);MDV感染极显著抑制淋巴细胞增殖(P<0.01),人参总皂苷能明显改善MDV对感染鸡淋巴细胞增殖的抑制(P<0.01),硫酸化人参总皂苷促进了MDV所致的抑制状态(P<0.01);人参总皂苷及其硫酸化人参总皂苷均能增强MDV所致鸡淋巴细胞IFN-γmRNA的表达,与健康组相比,硫酸化人参总皂苷极显著增加IFN-γmRNA表达(P<0.01)。结果提示,硫酸化人参总皂苷对人工感染MDV鸡的淋巴细胞活性具有调节作用,其作用比人参总皂苷的作用更强。

人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理初探

以不同浓度的人参总皂苷与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖抑制作用,并通过琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理。实验结果表明:人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖存在抑制作用,并呈剂量-时间依赖性,人参总皂苷与MSB-1细胞培养72 h后的半数抑制浓度为:340.41μg/mL,其95%可信限为:(340.41±33.7)μg/mL。流式细胞术测定表明,人参总皂苷抑制了MSB-1细胞DNA的合成。琼脂糖凝胶电泳分析、荧光检测和透射电镜观察表明,人参总皂苷可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡。

人参总皂苷对K562细胞的增殖抑制及诱导分化作用

目的:研究人参总皂苷TSPG对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)增殖及分化的影响,探讨TSPG抗肿瘤作用。方法:取对数生长期K562细胞,分为阴性对照组、不同浓度TSPG组及阳性对照组进行体外培养,以噻唑蓝(MTT)比色法、台盼蓝活细胞计数法观察TSPG对K562细胞增殖的影响;用联苯胺染色及血红蛋白测定检测其诱导K562细胞向红系细胞分化情况;采用流式细胞术测定细胞凋亡。结果:MTT和台盼蓝计数显示TSPG浓度在200 mg/L-800mg/L范围内对K562细胞增殖有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性。联苯胺染色提示不同浓度TSPG作用K562细胞的阳性率与对照组比较无明显差异;血红蛋白测定结果显示不同浓度TSPG作用K562细胞的血红蛋白含量与对照组相比有显著差异(P<0.05),但不同浓度TSPG组间并无差异。流式细胞术检测结果显示TSPG400 mg/L组细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TSPG不仅能抑制K562细胞增殖,还可以诱导其分化,TSPG增殖抑制作用可能与诱导K562细胞凋亡有关。

人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响

目的 :研究人参总皂甙 (TSPG)诱导K5 6 2细胞凋亡的机理。方法 :采用形态学观察、原位末端标记法 (TUNEL)观察不同浓度人参总皂甙对K5 6 2白血病细胞凋亡的影响 ;用免疫组化法检测TSPG诱导K5 6 2细胞凋亡中Fas表达情况 ,并采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测可溶性Fas(sFas)。结果 :5 0、10 0 μg/mlTSPG可诱导K5 6 2细胞凋亡 ;同时实验组Fas表达明显增高 (P <0 .0 1) ,而sfas无明显变化。结论 :TSPG诱导K5 6 2细胞凋亡与其诱导细胞Fas高表达有关。

人参总皂甙对K_562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

采用细胞体外培养，流式细胞术、形态学观察、组化与免疫细胞化学等方法，研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对Ｋ＿６５２细胞增殖与分化的影响。结果表明：ＴＳＰＧ对Ｋ＿５６２细胞增殖具有明显的抑制作用，并能阻止Ｋ６５２细胞由Ｇ０／Ｇ１期向Ｇ２／Ｍ＋Ｓ期过渡：经２００μｇ／ｍｌ的ＴＳＰＧ诱导后，Ｋ５６２细胞形态趋向成熟分化；联苯胺染色、糖原染色和ＨＩＲ２．ＣＤｗ４１阳性表达细胞数显著提高，且阳性强度增加。推测ＴＳＰＧ是能抑制白血病细胞增殖并诱导其分化的天然诱导剂，但对其机理有待进一步探讨。

细胞因子联合人参皂甙及三氧化二砷诱导HL-60细胞向树突状细胞分化的实验研究

目的 研究HL- 60细胞在体外经细胞因子联合人参皂甙及三氧化二砷(AS2 O3 )诱导向树突状细胞(DC )分化的情况。方法 选用HL 60细胞与重组人粒单核细胞集落刺激因子(rh -GM - CSF)、白细胞介素- 4(I-L 4)、γ干扰素(INF γ)、TSPG及AS2 O3 共培养。根据细胞因子、TSPG及AS2 O3 不同组合分为12组。在培养后7天及14天以光学和电子显微镜观察细胞的形态学特征,用HLA- DR、CD- 1a、CD86等五种单克隆抗体标记流式细胞术检测细胞表型,用ELISA法测定HL- 60 - DC培养上清液中的IL- 12及INF γ的量,培养14天后的细胞再继续以1∶10的比例与HL 60细胞共培养2 4h ,观察HL- 60 - DC对白血病细胞的杀伤情况,用流式细胞仪检测凋亡率。结果 HL 60细胞在组合细胞因子并分别加入TSPG及AS2 O3 后,均可诱生出不同比例的DC。光镜及电镜下均有典型的树突状细胞的形态学特征,细胞表达DC的表面分化抗原,诱生的DC培养上清中可测出不同量的IL- 12及INF- γ。细胞凋亡率均明显高于对照组,联合中药各组的凋亡率均高于GM CSF与IL 4组。结论 ①GM - CSF、IL- 4与HL 60细胞共培养可诱导出HL 60- DC ,在此基础上加入适当浓度的TSPG、AS2 O3 可使树突状细胞的特异性抗原表达加强。②在DC诱生过程中,GM - CSF联合IL -4组DC特异性抗原表?

人参总皂苷对骨髓造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究

目的 探讨骨髓造血细胞的冷冻保存效果及人参总皂苷 (TSPG)降低冷冻损伤的作用。方法 以 5 %二甲基亚砜 (DMSO)为冷冻保护剂 ,采用逐步降温法将骨髓造血细胞在液氮中保存 3～ 5个月 ,复苏后应用台盼蓝拒染法、集落形成试验、CD34+及细胞总数回收率等 ,测定骨髓造血细胞生物学活性的变化 ;将不同剂量的 TSPG与复苏的骨髓造血细胞共培养 ,应用集落形成试验、MTT比色分析法及流式细胞术等方法检测 TSPG对骨髓造血细胞冷冻损伤可恢复性的影响。结果 骨髓造血细胞在低温保存时一部分细胞会失去增殖能力 ,但这种损伤并不与保存时间成正比。细胞复苏后 ,加入合适剂量的 TSPG(2 5 μg/ m L) ,可明显提高冻存骨髓造血细胞的集落产率 ;TSPG在一定浓度范围内 (2 5～ 5 0μg/ m L )能促进冻存骨髓造血细胞的增殖 ;TSPG (2 5μg/ m L )能促进冻存骨髓造血细胞进入细胞增殖周期。结论 TSPG能促进冷冻骨髓造血细胞的复苏、增殖 ,提高骨髓细胞冷冻损伤的可恢复性 ,对应用冻存骨髓造血细胞进行造血移植有一定意义。

人参皂甙对K562细胞表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响

目的 :进一步探讨人参皂甙 (TSPG)诱导K5 6 2细胞分化的作用机制及了解K5 6 2细胞的生物学特点 ,为开发TSPG临床应用提供理论与实验依据。方法 :采用形态学观察和流式细胞术等方法 ,研究TSPG在诱导K5 6 2细胞向较为成熟细胞分化过程中 ,对其表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响。结果 :TSPG可诱导K5 6 2细胞向较成熟的红系、粒系细胞分化 ,作用后细胞表达CD15、HIR2 、EPO -R和GM -CSF -R的阳性细胞率均有所升高。结论 :K5 6 2细胞为分化受阻滞的异常造血祖细胞 ,其生物学特点与正常人多向造血祖细胞 (CFU -Mix)相似 ;TSPG诱导K5 6 2细胞成熟分化的作用机理可能与TSPG促进K5 6 2细胞EPO -R、GM -CSF -R表达升高有关。

人参总皂甙抑制乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞的损伤

目的观察人参总皂甙(TSPG)对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致人腹膜间皮细胞(HPMC)损伤程度的影响,为其保护HPMC提供实验依据。方法采用酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型后分5组,F12完全培养液对照组、腹膜透析液组(2.5%L-PDS组)、2.5%L-PDS+TSPG组(终浓度为500μg/ml)、2.5%L-PDS+TSPG组(终浓度为50μg/ml)、单纯TSPG组。经各种因素处理后的细胞在培养60 min和300 min后用MTT法检测细胞的增殖,用自动生化分析仪检测各组培养液中乳酸脱氢酶的水平,来反映细胞的损伤程度。结果HPMC在终浓度为500μg/ml的TSPG和2.5%的乳酸盐腹膜透析液培养体系中培养1 h后,和对照组相比,HPMC增殖能力明显增强(P<0.05),培养体系中的LDH含量明显下降(P<0.05)。结论人参总皂甙能抑制乳酸盐腹透液导致的HPMC的损伤。

三种中药皂甙对HL-60细胞诱导分化的实验研究

目的 :研究人参总皂甙、绞股蓝总皂甙和三七总皂甙诱导白血病细胞分化及其机理 ,为进一步开发三种皂甙的临床应用提供理论与实验依据。方法 :采用细胞体外培养、流式细胞术、形态学观察、组化与免疫细胞化学等方法 ,研究人参总皂甙(TSPG)、绞股蓝总皂甙 (GP)和三七总皂甙 (PNS)对HL—60细胞诱导分化的影响。结果 :三种中药皂甙均能阻止HL—60细胞由G0/G1 期向G2/M +S期过渡 ;经三种中药皂甙诱导后 ,HL—60细胞形态趋向成熟分化 ,NBT还原反应阳性细胞数和过氧化物酶(POX)染色阳性细胞数增加 ,CD14、CD15 表达阳性细胞数也显著提高 ,但对照组细胞与实验组细胞非特异性酯酶 (NAE)染色均为阴性。结论 :提示TSPG、GP、PNS诱导HL—60细胞向粒系分化为主。

人参总皂苷体外定向诱导CD34^+细胞分化为粒系血细胞的研究

目的研究人参总皂苷(TSPG)协同造血生长因子对CD34+细胞体外定向诱导分化为粒系血细胞的影响。方法应用阴性磁性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC),通过甲基纤维素半固体培养法检测TSPG诱导CD34+HSC/HPC向粒系祖细胞集落(CFU-GM)增殖与分化的能力;在SCF+IL-3+GM-CSF+G-CSF(SIGG)液体培养体系中加入不同剂量的TSPG,检测对CD34+HSC/HPC增殖形成CFU-GM的影响以及CD33+细胞比例的变化。结果TSPG(10～50μg/mL)均能提高CD34+细胞形成CFU-GM的集落产率,以TSPG20μg/mL效果最为明显;不同质量浓度的TSPG协同造血生长因子在液体培养体系中诱导CD34+细胞2周,观察粒系血细胞的分化,TSPG10～70μg/mL均可不同程度地提高细胞总数、CFU-GM扩增倍数及CD33+细胞比例,TSPG20μg/mL是液体培养诱导CD34+细胞向粒系分化的最佳质量浓度。结论TSPG协同造血生长因子能促进CD34+细胞定向诱导分化为粒系血细胞。