过表达S100A13基因对甲状腺癌TT细胞增殖特性的影响

背景与目的:有研究表明,S100A13基因与肿瘤的发生有关,而S100A13基因在人甲状腺组织中高表达。本研究旨在探讨S100A13基因过表达对甲状腺癌TT细胞增殖特性的影响。方法:应用Lipofectamine 2000将真核表达载体pCDNA3.1/NT-GFP-S100A13和空载体pCDNA3.1/NT-GFP导入TT细胞,经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成细胞系,激光共聚焦显微镜观察外源性S100A13蛋白在细胞中的定位。采用real-time RT-PCR和Western blot鉴定稳定过表达S100A13的TT细胞。分别应用细胞生长曲线、流式细胞术方法检测过表达S100A13基因对TT细胞生长速率和细胞周期的影响。结果:成功建立了稳定过表达S100A13和空载体的细胞系TT-S100A13-GFP、TT-GFP。分别将1×104个TT-S100A13-GFP、TT-GFP和TT细胞培养7d后,各组细胞数目分别为(2.30±0.24)×105个、(1.40±0.25)×105个和(1.50±2.20)×105个(P<0.05);TT-S100A13-GFP、TT-GFP和TT细胞经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为(6.47±0.14)%、(5.86±0.23)%和(5.99±0.28)%(P<0.05),G2/M期的细胞比例分别为(50.27±0.66)%、(39.39±0.23)%和(39.64±0.64)%(P<0.05)。结论:过表达S100A13基因对甲状腺癌TT细胞的增殖具有促进作用,促进TT细胞周期从G0/G1期向S期及G2/M期过渡。

紫草素诱导甲状腺髓样癌TT细胞自噬的实验研究

目的探讨紫草素能否诱导甲状腺髓样癌细胞发生自噬。方法采用透射电镜观察不同浓度紫草素对甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬的形态。利用Western-blot分析紫草素作用甲状腺髓样癌TT细胞后自噬标志物Beclin-l和LC3蛋白的表达,利用荧光显微镜观察自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的点状聚集情况。结果不同浓度紫草素作用24~72h对TT细胞均有自噬现象发生。2μg/m L、4μg/m L紫草素处理组作用24h后透射电镜观察TT细胞自噬的形态,发现TT细胞出现典型的自噬囊泡：双层膜包绕的圆形或椭圆形结构。紫草素处理自噬相关基因Beclin-l的表达明显低于空白对照组,参与自噬降解的p62表达水平下降,其下降水平与剂量呈相关性,自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达明显提高。将TT细胞转染GFP-LC3质粒24h后,用紫草素处理24h,于荧光显微镜下观察,处理组与空白对照组相比,胞浆上出现大量的LC3-Ⅱ点状聚集。结论紫草素能诱导甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬,透射电镜下可见自噬体,荧光显微镜下可观察到自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ。紫草素诱导TT细胞自噬,可能与降低自噬抑制基因Beclinl表达水平相关。

三氧化二砷诱导人髓样甲状腺癌TT细胞凋亡

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人髓样甲状腺癌TT细胞体外生长的影响。方法选用不同剂量As2O3处理人髓样甲状腺癌TT细胞后,通过倒置相差显微镜、电子显微镜、MTT法、AO/EB荧光染色法和流式细胞术研究As2O3对人髓样甲状腺癌TT细胞生长的影响。结果As2O3具有抑制人髓样甲状腺癌TT细胞生长和促进其凋亡的作用,这种作用主要在中浓度(2.0～5.0μmol/L)产生,而在高浓度(10.0μmol/L)则可引起细胞死亡。结论As2O3明显抑制人髓样甲状腺癌TT细胞生长,并诱导细胞凋亡,在甲状腺癌的辅助治疗上具有很好的应用前景。

AG490对甲状腺髓样癌TT细胞放射敏感性的影响

为了研究AG490对甲状腺髓样癌TT细胞放射敏感性,本研究选择甲状腺髓样癌TT细胞作为研究对象,并采用不同浓度AG490 (0, 25μmol/L, 50μmol/L, 100μmol/L)处理细胞,利用MTT法、流式细胞术和克隆形成实验分别对细胞增殖、凋亡及放射敏感性进行检测,并采用Western blotting法检测各组JAK2、p-STAT3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果表明,与A组相比,B、C、D组的抑制增殖作用增强,呈浓度和时间依赖性;随着AG490药物浓度的增加凋亡率逐渐增加;与A组相比,C组细胞存活分数显著降低;JAK2、p-STAT3和Bcl-2的蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐降低,Bax蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐增加。AG490对甲状腺髓样癌TT细胞增殖有抑制作用,可促进细胞凋亡,提高放射敏感性。

塞来昔布增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对甲状腺髓样癌TT细胞凋亡作用的研究

目的探讨塞来昔布（celecoxib）增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factorrelated apoptosis-inducing ligand，TRAIL）诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡的效应及相关机制。方法MTr法检测TRAIL、celecoxib及2者联合应用对TI’细胞的增殖作用；PI单染流式细胞仪检测联合用药对r丌细胞周期的影响；Hoehest33258染色和DNAladder检测联合用药对，ITI’细胞凋亡的作用；Westernblot检测cyclinA、Cdk2、caspase-8、c-FLIP、RIP蛋白表达改变。结果①MTT实验显示：TRAIL1000ng／ml与celecoxib50μM联合用药的增殖抑制率为（47．53％±1．34％），明显高于单用TRAIL（7．75％±3．84％）及celecoxib（24．49％±1．57％）之和组（t检验，F=5．234，P〈0．01），差异有统计学意义；②PI检测显示：celecoxib组和联合用药组G0／G1期细胞明显高于Control组和TRAIL组（F=242．694，P〈0．01）；③West—ernblot检测：celecoxib组及联合用药组CyclinA和Cdk2蛋白表达明显下调，且2者之间未见明显差异；④Hochest33258染色观察细胞核的凋亡形态学改变发现：联合用药组核固缩及核碎裂现象明显增多，其细胞凋亡率为（24．23％±2．91％），明显高于单用TRAIL（5．86％±1．41％）及celecoxib11（20％±1．24％）之和（t检验，F=1．824，P〈0．01），差异具有统计学意义；⑤Westernblot检测发现：联合用药组caspase-8活化裂解程度明显增加，C—FLIP及RIP蛋白表达亦明显下调。结论celecoxib能增强TRAIL对甲状腺髓样癌TT细胞增殖的抑制作用，其机制是通过celecoxib将TT细胞阻滞于GO／G1期，并下调c—FLIP及RIP的表达，促进TRAIL对caspase-8的活化，诱导细胞凋亡。

含有Mott细胞多发性骨髓瘤一例报告并文献复习

多发性骨髓瘤（MM）是一种单克隆浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，好发于老年人。含有Mott细胞MM是一种少见的MM亚型。我院收治1例含有Mott细胞MM患者，现报道如下并进行相关文献复习。

沉默CD147基因对人甲状腺髓样癌TT细胞相关蛋白表达的影响

目的探讨沉默CD147基因对人甲状腺髓样癌TT细胞相关蛋白表达的影响。方法利用免疫细胞化学技术方法检测TT细胞中膜联蛋白A2(ANXA2)、CD147、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)等蛋白表达情况;利用RNA干扰技术(RNAi)筛选可以有效沉默TT细胞CD147基因的小干扰RNA(siRNA)。在最佳时间点时利用Western blot检测mRNA表达情况,利用Western blot以和逆转率-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-2、ANXA2及TIMP-2等表达情况。检测CD147基因沉默后TT细胞的增殖情况和ANXA2、CD147、TIMP-2、MMP-2的表达情况。结果TT细胞中,ANXA2、CD147、TIMP-2及MMP-2等蛋白均有程度不同的阳性表达;成功筛选出2条可在72 h内有效沉默TT细胞CD147基因表达的siRNA序列。沉默CD147基因后,MMP-2 mRNA和蛋白相对表达量有所降低,但是ANXA2 mRNA和蛋白相对表达量未出现明显变化;TIMP-2 mRNA相对表达量未出现明显变化,但是其蛋白表达水平出现明显下降。沉默CD147基因后,各组TT细胞增殖表现为抑制状态,处于G0/G1期的细胞比例明显增加,处于G2/M期的细胞比例明显下降,不同时间段TT细胞平均生长抑制率比较差异均有统计学意义(均P<0.05),但是各组凋亡细胞比例未出现明显变化。结论沉默CD147基因可以有效抑制TT细胞生长并改变细胞周期,但是对TT细胞迁移、凋亡及侵袭无明显影响。

人甲状腺髓样癌细胞株的研究进展

甲状腺髓样癌是常见的头颈部恶性肿瘤,也是近年来发病率增加最快的恶性肿瘤之一,近年来对其基础研究较为关注。本文复习有关文献,对已建株的人甲状腺髓样癌细胞株(TT细胞株)的特性及研究进展全面总结,以期对临床及药物的研发提供帮助。