TTF1-NP诱导人原代培养肝癌细胞凋亡的内质网应激作用研究

目的探讨TTF1-NP诱导人肝癌原代培养细胞凋亡的作用及机制。方法分离和培养人原代肝癌细胞,采用MTT法测定不同浓度(25,50,100,200,400μmol/L)TTF1-NP对人原代培养肝癌细胞的增殖抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Survivin、cleaved caspase3和内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)相关蛋白GRP78、p-PERK和p-IRE1的表达情况。结果 TTF1-NP可明显抑制人原代培养肝癌细胞的增殖,且呈剂量依赖性。随TTF1-NP给药浓度的增加,凋亡率逐渐上升,ERS相关蛋白表达增多。结论 TTF1-NP可诱导人原代培养肝癌细胞凋亡,其作用机制与活化ERS反应有关。

珍珠梅黄铜纳米粒通过调节MAPK通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和保护性自噬的实验研究

目的探讨中药珍珠梅黄酮纳米粒(5,2’,4’-trihydroxy-6,7,5’-trimethoxy flavone nanoparticle,TTF1-NP)处理HepG2细胞后是否发生凋亡和自噬、自噬和凋亡关系及其可能的作用机制。方法不同浓度(0,40,80,120μmol·L^(-1)) TTF1-NP处理HepG2细胞24 h后,MTT法检测细胞的增殖能力;通过Hoechst染色观察TTF1-NP处理HepG2细胞后的形态学变化;利用流式细胞术检测细胞凋亡比例; HepG2细胞转染GFP-LC3质粒后,荧光显微镜观察自噬情况;Western blot检测自噬标志蛋白LC3B I/II,凋亡相关蛋白Cleaved caspase3,以及MAPK通路相关蛋白p38MAPK,ERK1/2,JNK活性变化;采用自噬抑制3-甲基腺苷(3-methyladenine,3-MA)处理细胞后,进一步检测细胞凋亡及MAPK通路相关蛋白的表达。结果 TTF1-NP能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡及自噬; Western blot结果显示,TTF1-NP增加LC3B-II蛋白表达,并上调MAPK通路相关分子JNK,下调ERK的活性;加入自噬抑制剂3-MA后,细胞增殖进一步下降,细胞凋亡进一步增加。结论 TTF1-NP可以诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡及保护性自噬,其作用机制可能与调节MAPK通路有关。