一种快速精确测定Tth DNA聚合酶活性的方法

Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶,但在生产和改造过程中,缺乏准确、快速、简便测定酶活的方法。利用高灵敏度双链特异性核酸染料PicoGreen和特殊设计的发夹型探针,建立了一种测定Tth DNA聚合酶活性的新方法。该方法的标准曲线线性关系良好,决定系数R^(2)达到0.99以上,灵敏度和准确度高,操作简单,测定结果与商业化产品标定的活力相符,经荧光定量PCR验证能够反映真实使用环境下的酶活。该方法还可推广到测定其他DNA聚合酶活性,将为DNA聚合酶的生产和改造提供有效的检测手段。

Tth DNA聚合酶基因的分段PCR克隆及其表达载体构建

利用计算机软件对取自ＧｅｎＢａｎｋ的嗜热栖热菌ＴｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＨＢ－８的ＤＮＡ聚合酶基因（Ｔｔｈ）进行分析，并设计了两组引物进行ＰＣＲ，分段克隆该基因。将两个ＰＣＲ产物同时连接到另一个克隆载体上，使之成为完整基因，最后将完整基因克隆到表达载体上，构建了Ｔｔｈ基因的表达质粒，使之适合在以大肠杆菌为寄主的细胞中进行表达。

丹佛斯天磁~?高压比TTH/TGH系列屡获国际殊荣

在2018年度中国制冷展＂创新产品＂评选结果中,丹佛斯天磁~？磁悬浮无油压缩机再次榜上有名,全新丹佛斯天磁~？TTH/TGH高压比系列无油压缩机在继2016年的天磁TT700与2017年的TG系列之后,连续第三年获得中国制冷展制冷部件类别＂创新产品奖＂。2018年4月9日上午,2018制冷展创新奖丹佛斯奖项颁奖典礼在制冷展丹佛斯展台举行。

运用Tth聚合酶的快速非放射性差异展示方法

运用Ｔｔｈ聚合酶的快速非放射性差异展示方法目前，在已有的鉴定基因表达差异的方法中，随机引物ＰＣＲ得出的ＲＮＡ指纹图通常用于检测不同来源的ＲＮＡ表达差异。而引物结合位点的不同，可导致模板指纹图之间的差异。差异展示在生物学中有许多不同的应用，包括肿瘤形成...

利用核酸适配体封闭Tth DNA聚合酶突变体实现温启动一步法RT-qPCR

目的:Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶。为消除其在一步法逆转录-实时荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative real-time PCR,RT-qPCR)反应时的非特异性扩增,筛选可在较低温度下抑制其活性的核酸适配体,从而实现温启动一步法RT-qPCR。方法:在前期获得不依赖Mn2+的Tth DNA聚合酶突变体的基础上,检验四种DNA适配体及其对应的RNA适配体对Tth DNA聚合酶突变体的DNA聚合酶活性和逆转录酶活性的封闭效果以及解离温度,并通过分子对接模拟适配体与聚合酶的结合模式。结果:TQ21-11和TQ21-11-RNA两种适配体在40℃可有效抑制Tth DNA聚合酶的DNA聚合酶活性和逆转录酶活性,抑制率达到97%以上;两种适配体在50℃可几乎完全解离。这两种适配体均可用于温启动一步法RT-qPCR,其中TQ21-11-RNA的非特异性扩增更低。结论:利用TQ21-11和TQ21-11-RNA两种适配体在室温下封闭Tth DNA聚合酶突变体活性,可以实现温启动一步法RT-qPCR。

重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定

Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本.

紧张型头痛发病机制的研究

紧张型头痛(tension type headache,TTH)是最常见的头痛疾病,全球的每年患病率为26%~38%,大多数紧张型头痛为发作性,且具有自限性。目前,TTH主要的发病机制涉及到外周机制、中枢机制及遗传机制等方面,本文将对TTH发病机制的相关文献做一综述。

生活事件、防御方式与紧张型头痛的相关性研究

目的探讨紧张型头痛(TensionTypeHeadache,TTH)住院患者的生活事件、防御方式及其相关关系。方法将35例诊断为TTH的住院军人作为患者组,以35名正常军人作为对照组,分别用生活事件量表及防御方式问卷(DSQ)对他们的生活事件及防御方式进行评定,并对二者进行相关分析。结果TTH患者所经历的正性生活事件分值为5.73±7.16,对照组为14.66±9.98,二者差别有显著性(P<0.01),前者低于后者;TTH组负性生活事件分值为23.29±18.52,对照组为7.09±6.19,两组间差异有显著性(P<0.01),前者高于后者;两组间生活事件总值无统计学差异(P>0.05)。在防御方式上,TTH组的不成熟防御分值为4.73±0.86,对照组为3.67±0.88,前者高于后者(P<0.05);TTH组中间型防御分值为4.74±0.71,对照组为4.46±0.68,前者高于后者(P<0.01);TTH组成熟防御方式分值为4.66±0.89,低于对照组5.56±0.93(P<0.05);两组在掩饰维度上差异不显著。不成熟防御机制及中间型防御机制与负性生活事件之间呈正相关关系,不成熟防御机制与正性生活事件之间、成熟防御机制与负性生活事件之间呈负相关关系。结论TTH住院军人所经历的不良生活事件及对这些生活事件所采取的不适当心理防御机制在TTH的发病过程中起着重要作用。

紧张型头痛的治疗进展

紧张型头痛（Tension-type headache,TTH）是最常见的一种头痛类型,一般认为其患病率高于偏头痛,约占门诊头痛病人的半数。流行病学调查显示女性中患病率更高,而且TTH的患病率在两性中随着年龄增高而下降[1]。

紧张型头痛患者的生活事件、心身症状及其相关关系

目的探讨紧张型头痛(TTH)住院患者的生活事件、心身症状及其相关关系。方法将35例诊断为TTH的住院军人作为患者组,以35名正常军人作为对照组,分别用生活事件量表及症状自评量表(SCL—90)对他们的生活事件及心身症状进行评定,并对二者进行相关分析。结果TTH患者所经历的正性生活事件分值低于对照组(P<0.01)、而负性生活事件分值高于对照组(P<0.01),两组间生活事件总值无差异(P>0.05)。TTH患者SCL—90的躯体化、人际敏感、抑郁、焦虑、恐怖、偏执及精神病性因子分均高于对照组(P<0.05),强迫、敌对因子分与对照组无差别(P>0.05)。SCL-90总分及阳性项目数与正性生活事件之间呈负相关关系(P<0.01),与负性生活事件之间呈正相关关系(P<0.01),与生活事件总值之间无明显相关关系(P>0.05)。结论TTH住院军人经历了较多的不良生活事件,也出现较多的心身症状。

紧张型头痛颅周肌肉研究

紧张型头痛的病理机制仍不完全清楚 ,颅周肌肉障碍在其发病中的作用有待深入研究。本文综述了颅周肌肉紧张程度与肌肉压痛和紧张型头痛的关系 ,紧张型头痛患者颅周肌肉电生理学改变及针对颅周肌肉障碍机理治疗的临床效果。

偏头痛和紧张型头痛患者就诊因素分析

目的探讨影响偏头痛和紧张型头痛(TTH)的就诊因素。方法通过横断面调查,收集就诊于普通神经内科门诊的偏头痛和TTH患者,分别分析不同就诊状态的偏头痛和TTH的人口学特征与临床特征。结果共纳入偏头痛患者389例,TTH患者390例,68.6%(267/389例)的偏头痛患者和64.9%(253/390例)的TTH患者既往曾因头痛就诊过(P>0.05)。与未就诊过的人群比较,曾因头痛就诊过医疗机构的偏头痛患者年龄偏大,程度较重,病程较长,头痛频率频繁(P<0.05);曾就诊过的TTH患者的频率较频繁,病程也较长(P<0.05)。不同就诊状态的偏头痛和TTH患者的教育程度也有明显差异(P<0.05)。结论年长、中重度头痛、频繁头痛、长病程、低教育水平是影响偏头痛患者就诊的主要因素,频繁头痛、长头痛病程及低教育水平是影响紧张型头痛就诊的主要因素。

希望特质量表在中学生群体中的信、效度检验

通过对770名中学生施测,检验Snyder的希望特质量表(TTHS)的信度和效度。结果表明,总量表的重测信度、量表的结构效度和效标效度符合心理测量学要求。TTHS可以作为测量中国中学生希望特质的工具。在中国文化背景下,Snyder提出的希望特质仍然是一种积极的心理品质,希望特质也从某方面代表着中国中学生的心理健康水平。

紧张型头痛患者促肾上腺皮质激素释放激素的改变

目的探讨紧张型头痛的中枢性发病机制。方法用酶联免疫吸附实验检测受试者血清中肾上腺皮质激素释放激素的含量。结果与对照组相比,紧张型头痛患者血清中促肾上腺皮质激素释放激素含量显著升高。结论紧张型头痛患者下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进,其发病机制可能涉及下丘脑功能失调。

原发性头痛的发病机制和临床神经电生理特点

头痛是常见神经系统症候，2004年国际头痛学会发布了修订的第2版《头痛的国际分类ICHDⅡ》，仍将头痛分为原发性和继发性两大类。原发性头痛包括偏头痛、紧张性头痛（TTH）、丛集性头痛（CH）和其他三叉神经自主神经性头痛、其他原发性头痛4种类型。当前原发性头痛的诊断主要是临床诊断，缺乏客观评价的指标和检测方法。本文结合文献复习探讨原发性头痛的发病机制及临床神经电生理检测方法在诊断偏头痛、TTH、CH中的应用价值。

肌筋膜放松术结合颈部肌群平衡锻炼治疗频发型紧张性头痛的疗效观察

目的:观察肌筋膜放松术结合颈部肌群平衡锻炼治疗频发型紧张性头痛的临床疗效。方法:对60例频发型TTH患者(20-58岁,其中男性19例、女性41例)进行肌筋膜放松术结合颈部肌群平衡锻炼治疗。治疗效果采用患者头痛强度、头痛持续时间、头项部肌肉压痛、头部紧箍感、头重感以及倦怠感的改善程度评价。结果:三个疗程结束后,患者头痛强度明显缓解(P=0.018)、头痛持续时间缩短(P=0.028),而且头项部肌肉压痛(P=0.033)、头部紧箍感(P=0.005)、头重感(P=0.003)以及倦怠感(P=0.010)均显著减轻。结论:肌筋膜放松术结合颈部肌群平衡锻炼对频发型TTH有良好的治疗作用,且无明显不良反应,其作用机理值得进一步研究。