基于T7RNA聚合酶／启动子的细胞融合报导系统载体的构建

目的：建立T7RNA聚合酶／T7启动子载体系统，作为观察细胞融合是否成功的报导系统。方法：设计并合成引物从BL21细菌中扩增T7RNA聚合酶序列，并将其克隆进入真核表达载体pRc／CMV2中，作为RNA聚合酶的供体。T7RNA聚合酶特异性识别的r17启动子人工合成，构建于荧光素酶的表达载体pGL3中，利用其荧光素酶基因作为报导基因。两质粒共转染A549细胞和VeroE6细胞，检测荧光素酶的表达。结果：共转染pRc／CMV2。T7RNAP和pGL3-T7的A549细胞和VeroE6细胞的荧光强度分别为57745±7747和43679±8616，转染质粒pGL3-T7的细胞空白对照荧光强度1034±201和1091±157，分别与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：成功构建了T7RNA聚合酶/T7启动子载体的细胞融合报导系统，可应用于细胞融合的相关实验研究中。