蒺藜中甾体皂苷TTS-12对白念珠菌生物被膜形成的抑制作用

目的观察蒺藜甾体皂苷类化合物TTS-12对白念珠菌生物被膜形成的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用激光共聚焦显微镜观察TTS-12对白念珠菌生物被膜生长形态的影响;采用XTT法考察不同浓度TTS-12对白念珠菌生物被膜形成的影响;应用光密度值测定及实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)法考察不同浓度TTS-12对白念珠菌细胞表面疏水性(cell surface hydrophobicity,CSH)及相关基因表达的影响。结果与未加TTS-12的正常对照细胞相比,经TTS-12处理的白念珠菌生物被膜结构疏松,TTS-12可剂量依赖性地抑制白念珠菌生物被膜的形成,其生长动力学及细胞表面疏水性值下降,CSH1基因表达水平降低(P<0.01)。结论TTS-12可能通过降低白念珠菌CSH1基因表达来抑制白念珠菌生物被膜的形成。

天然化合物TTS-12对白念珠菌细胞凋亡的影响

目的研究天然化合物TTS-12(Tribulus terrestris S-12)对白念珠菌细胞凋亡的影响。方法应用透射电镜技术观察TTS-12作用于白念珠菌后细胞超微结构的变化,采用Annexin V及PI测定TTS-12对白念珠菌细胞凋亡率的影响,采用POLARstar多功能微板检测仪通过荧光强度检测TTS-12对白念珠菌细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。结果与空白对照组相比,TTS-12可明显诱导白念珠菌细胞凋亡;8μg/ml的TTS-12可诱导58%的细胞凋亡;TTS-12对白念珠菌细胞内ROS产生的促进作用具有剂量依赖性,并随着时间的延长对ROS产生的促进作用也随之增强。结论 TTS-12可诱导白念珠菌细胞凋亡,其机制可能与升高白念珠菌细胞内ROS水平有关。

蒺藜TTS-12对须癣毛癣菌的体内外抗菌活性研究

为考察天然产物蒺藜TTS-12对须癣毛癣菌的体外和体内抗菌活性,本研究采用CLSI的M38-A2方案对须癣毛癣菌进行最小抑菌和杀菌浓度的检测,选取多重指标考察TTS-12对须癣毛癣菌的抑菌作用;建立豚鼠感染须癣毛癣菌豚鼠体癣模型,分组给药观察低、中、高剂量蒺藜TTS-12凝胶剂对豚鼠体癣模型在背部病变程度评分,病灶皮肤真菌培养阴性率,病灶皮肤病理变化的影响。结果发现,TTS-12对须癣毛癣菌的标株菌株的MIC值为1μg/mL,MFC为8μg/mL,其还能够显著抑制须癣毛癣菌的菌丝生长,浓度为4μg/mL的TTS-12作用15天时,菌丝生长抑制率已经高于60%,且对须癣毛癣菌的孢子萌发抑制作用呈时间和浓度依赖性。动物实验中,低、中、高剂量蒺藜TTS-12凝胶剂均能显著降低背部病变程度评分(P<0.01),中、高剂量能增高病灶皮肤真菌培养阴性率(P<0.05),病灶皮肤HE染色切片表明高剂量组棘层肥厚降低,背部炎症减弱,使角质层恢复正常。以上结果表明蒺藜TTS-12在体外抗须癣毛癣菌和豚鼠体癣模型中均有较好的活性。

TTS-12原料药及泡腾片的含量测定

目的建立反相高效液相色谱法测定TTS-12原料药及其泡腾片的含量，用于进一步建立其质量标准。方法采用HPLC-ELSD法，选用Diamonsil C18柱（5mm×250mm，5μm），甲醇：水（90：10）（v／v）为流动相，流速1ml／min；票移管温度：40℃；气体（N2）压力：2×10^5Pa。结果线性范围为0．2008—1．0040mg·ml^-1，回归方程：1nA=1．663932lnC＋15，4126（r=0．9998），精密度，日内、日间稳定性和重现性试验的RSD分别为0．31％（n=6）、0．61％（n=6）、0．89％（n=4）、0．32％（n=E），加样回收率97．9％，RSD为0．57％。TIS-12原料药的平均百分含量为90．6％（w／w，n=3）。泡腾片中TIS-12的百分含量为96．3％。结论本法快速、灵敏、准确、简便，适用于TIS—12原料药及泡腾片的含量测定研究，为进一步建立质量标准奠定了基础。

蒺藜中甾体皂苷对新生隐球菌生物膜形成的抑制作用

目的观察蒺藜甾体皂苷类化合物TTS-12对新生隐球菌生物膜形成的影响,探讨其可能的作用机制。方法光镜观察TTS-12对新生隐球菌生物膜生长形态的影响;MTT法观察TTS-12对新生隐球菌生物膜形成的影响;实时定量RT-PCR观察不同浓度TTS-12对新生隐球菌细胞生物膜关键基因PMT4表达的影响。结果经TTS-12处理的新生隐球菌生物膜结构更疏松,TTS-12可剂量依赖性地降低新生隐球菌生物膜生长动力学指标及PMT4基因表达水平(P<0.01)。结论 TTS-12可抑制新生隐球菌生物膜的形成。通过降低新生隐球菌PMT4基因表达可能是其抑制新生隐球菌生物膜的形成作用机制之一。

一种蒺藜甾体皂苷对人工诱导耐药的红色毛癣菌体外抗菌活性研究

目的研究蒺藜的甾体皂苷成分TTS-12对于耐药皮肤癣菌的抗真菌作用。方法用含体外浓度递增法对真菌进行培养,分别诱导红色毛癣菌对氟康唑和酮康唑的耐药性,用微量液基稀释法评价菌株的耐药性、稳定性及对TTS-12的敏感度。结果经过诱导后,耐氟康唑菌株对氟康唑的最小抑菌浓度(MIC)>128μg·m L-1,耐酮康唑菌株对酮康唑的最小抑菌浓度>64μg·m L-1,且传代三次后耐药性相对稳定,TTS-12对氟康唑耐药菌株的最小抑菌浓度范围在4~16μg·m L-1,对酮康唑耐药菌株的最小抑菌浓度范围在4~8μg·m L-1。结论经过浓度递增方式的培养能够成功诱导红色毛癣菌耐氟康唑和酮康唑的菌株,并且TTS-12对两种耐药菌株有良好的生长抑制作用。