2017-2018年吉林部分地区规模化猪场猪细环病毒的遗传变异分析

为了解猪细环病毒(TTSuVs)在吉林部分规模化猪场的遗传变异情况,对2017-2018年来自吉林部分地区的10家规模化猪场的574份血清样品进行TTSuVs流行情况调查,并根据收集地点对20株TTSuVs进行ORF1全基因序列扩增及遗传变异性分析。结果显示:10家规模化猪场中,TTSuV1感染率为36.75%,TTSuV2感染率为63.2%,TTSuV1与TTSuV2混合感染率为30.3%。10株TTSuV1测序株之间的核苷酸同源性为75.7%~94.7%,氨基酸同源性为48.1%~88.2%;10株TTSuV2测序株之间的核苷酸同源性为77.5%~94.0%,氨基酸同源性为70.6%~87.4%。研究表明:吉林地区部分规模化猪场流行的TTSuV1均属于TTSuV1-lb型,而TTSuV2流行情况较为复杂,各种亚型均有涉及且呈现遗传变异多样性。

猪细环病毒2型环介导等温扩增检测方法的建立

为了能快速、特异的检测猪细环病毒2型(TTSuV2),本研究针对TTSuV2全基因序列的非编码区域和第1个开放性阅读框前端设计了2对引物,建立了TTSuV2的环介导等温扩增(LAMP)检测方法并对反应成分和条件进行了梯度摸索。试验结果显示,该LAMP检测方法最佳反应条件为64℃恒温90 min,可特异性检测TTSuV2,与猪细环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪博卡病毒无交叉反应,病毒最低检出限为100拷贝/μL。结果表明,建立的LAMP方法具有快速、特异且灵敏的特点,可在TTSuV2快速检测方面提供一定的技术支持。

川渝地区猪TTV血清流行病学调查及危险性因素分析

该试验用ELISA和"病例-对照研究"方法,对四川、重庆共23个区县的养殖场和散养农户进行猪TTSuV感染的血清流行病学调查及危险性因素分析.试验共检测1 918头份猪血清,检出阳性血清341份,平均抗体阳性率为17.78%,其中种公猪的阳性率为32.5%,种母猪31.4%,育肥猪19.6%和仔猪11.2%.四川地区猪的阳性率为15.98%(17.37%~23.26%);重庆地区为20.05%(12.22%~30.00%).试验结果表明,在四川、重庆地区存在TTSuV感染.调查发现,川渝两地的地理条件和养殖规模因素与猪发生TTSuV感染的关联程度很小(地理条件:OR=1.08,95%CI=0.49-1.58;养殖规模:OR=1.04,95%CI=1.01-1.47).生产期长或年龄大的种公猪、种母猪和育肥猪发生TTSuV感染的危险性则分别是仔猪的3.8,3.6和1.9倍(种公猪:OR=3.8,95%CI=1.878-7.752;种母猪:OR=3.6,95%CI=2.153-6.110;育肥猪:OR=1.9,95%CI=1.443-2.586),种公猪、种母猪发生TTSuV感染的危险性分别是育肥猪的2.0和1.9倍(种公猪:OR=2.0,95%CI=1.004-3.887;种母猪:OR=1.9,95%CI=1.165-3.026),表明饲养期或年龄这一暴露因素与猪发生TTSuV感染的危险性有较强或中等程度的关联.

广东猪输血传播病毒流行病学调查及其主要抗原编码区进化分析

为了解广东省猪群中猪输血传播病毒(TTSuVs)的感染情况,采用Nest-PCR方法对广东省7个不同地区规模化猪场抽检采集的159份育肥猪血清进行检测。结果表明,TTSuVs的2个种——TTSuV1和TTSuV2的阳性检出率分别为54.72%和35.22%,二者的共感染率为29.56%,说明TTSuVs在广东猪群中有较为广泛的传播。挑选Nest-PCR检测TTSuV1和TTSuV2为阳性的样品,分别在病毒保守区设计引物,扩增病毒基因,测序验证后,与其它已发表的不同属种TTVs ORF1序列进行进化树分析。结果表明猪TTVs与人、犬、猫、猴的TTVs分别处在进化树的不同分枝,具有很大差异;本次研究获得的TTSuV1ORF1序列与国内多株已发表的TTSuV1ORF1序列相似性为72%～75%;获得的TTSuV2ORF1序列与现有测序的多株TTSuV2的ORF1序列相似性为88%～97%。此研究为进一步研究TTSuVs流行状况、血清学诊断方法和临床防治技术奠定基础。

猪输血传播病毒检测方法研究进展

猪输血传播病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)是一种单链,无包膜的DNA病毒。在健康的或患有某些疾病的猪中,都能检测到它的存在,具有很高的流行率。目前,针对TTSuV的检测方法有多种,如PCR方法,血清免疫学方法等,但是各有优缺点,因此本文就现有的TTSuV检测方法做一个简单综述,使读者能够对TTSuV的检测方法有一个全面了解。

同时检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒和猪细环病病毒1型和2型的多重SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

在集约化养殖条件下,猪场常见多种病毒混合感染。本试验研究的5种病毒与多种猪病相关,在全球范围的猪场造成了严重的经济损失。本研究建立了能同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细环病病毒1型和2型(TTSuV1和TTSuV2)的多重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。该方法能够区分这5种病毒,且对其他DNA病毒检测证明了该系统的特异性。该多重实时荧光定量PCR灵敏度高,检测限为3.65×103～5.04×103拷贝DNA模板/反应。批内和批间变异系数低。该方法对临床样本的检测结果与特异性PCR方法检测结果符合率为100%。这种方法可能成为流行病学研究和疾病控制的有效工具。

猪细环病毒实时荧光PCR检测技术的建立及应用

为了实现猪细环病毒(TTSuV)快速检测,给TTSuV的调查、监测和防控提供可行性、操作性强的技术支持。本试验根据TTSuV的序列特点设计特异性引物、探针,应用实时荧光PCR技术检测TTSuV1a型和TTSuV1a1b型。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和重复性,TTSuV1a灵敏度可达9.2拷贝/μL,TTSuV1b灵敏度可达5.6×101拷贝/μL;批内变异系数均小于1%,批间变异系数均小于3%。将该方法与PCR法、PCR-DHPLC进行比较,结果证实该方法具有较好的准确性。对92份血清样本进行检测,发现有58份TTSuV1a阳性、62份TTSuV1b阳性、51份TTSuV1a和TTSuV1b共感染阳性。本研究建立的TTSuV实时荧光PCR法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于TTSuV感染的分子流行病学调查。