葛根异黄酮调控LncRNA TTTY15对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探讨葛根异黄酮对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响与机制。方法采用高糖诱导人肾小管上皮细胞HK-2建立糖尿病肾病模型,随机分为NG组、HG组、HG+葛根异黄酮L组、HG+葛根异黄酮M组、HG+葛根异黄酮H组、HG+si-NC组、HG+si-TTTY15组、HG+葛根异黄酮+pcDNA组、HG+葛根异黄酮+pcDNA-TTTY15组;噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;利用试剂盒检测超氧化物歧物酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-10水平;qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测TTTY15表达量。结果与NG组比较,HG组细胞增殖抑制率和细胞凋亡、TTTY15表达及MDA、TNF-α、IL-1β水平显著升高,SOD活性和IL-10水平显著降低(P<0.05);与HG组比较,HG+葛根异黄酮L组、HG+葛根异黄酮M组、HG+葛根异黄酮H组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率降低、TTTY15表达量及MDA、TNF-α、IL-1β水平显著降低,SOD活性和IL-10水平显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;与HG+si-NC组比较,HG+si-TTTY15组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及MDA、TNF-α、IL-1β水平显著降低,SOD活性和IL-10水平显著升高(P<0.05);与HG+葛根异黄酮+pcDNA组比较,HG+葛根异黄酮+pcDNA-TTTY15组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及MDA、TNF-α、IL-1β水平显著升高,SOD活性和IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论葛根异黄酮可通过抑制TTTY15表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、氧化应激、炎症反应从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

马齿苋总黄酮调控LncRNA TTTY15减轻MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞损伤

目的 探讨马齿苋总黄酮对1-甲基-4-苯基碘化吡啶(MPP^(+))诱导的人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH损伤的影响及其作用机制。方法 采用MPP^(+)诱导SK-N-SH细胞建立帕金森病体外细胞模型,不同浓度马齿苋总黄酮处理细胞,用脂质体法分别将si-NC、si-TTTY15转染至SK-N-SH细胞,转染成功后用MPP^(+)处理细胞,将pcDNA-TTTY15转染至SK-N-SH细胞,转染成功后用马齿苋总黄酮与MPP^(+)共同处理细胞;噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;利用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TTTY15、miR-7-5p表达量;双荧光素酶报告实验验证TTTY15和miR-7-5p的靶向结合关系;Western印迹检测酶切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达量。结果 马齿苋总黄酮以浓度依赖性的方式明显降低MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞增殖抑制率和TTTY15表达量,明显降低凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白水平、LDH活性和MDA水平(均P<0.05),而miR-7-5p表达量和SOD活性明显升高(P<0.05);转染si-TTTY15可明显降低MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白水平、LDH活性和MDA水平(P<0.05),而SOD活性明显升高(P<0.05);TTTY15可靶向结合miR-7-5p;TTTY15过表达可通过抑制miR-7-5p的表达而逆转马齿苋总黄酮对MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论 马齿苋总黄酮可通过调节TTTY15/miR-7-5p的表达而促进MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞增殖及抑制细胞氧化应激、凋亡从而减轻帕金森病模型细胞损伤。

绞股蓝皂苷A调控lncRNA TTTY15/miR-335-5p通路对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及机制

目的探讨绞股蓝皂苷A(GpA)对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其对lncRNA TTTY15/miR-335-5p通路的调控作用。方法采用白介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞建立骨关节炎软骨细胞损伤模型,用不同剂量的GpA处理细胞,pcDNA、pcDNA-TTTY15分别转染入软骨细胞后用GpA与IL-1β共同处理细胞;qRT-PCR法检测TTTY15、miR-335-5p的表达量;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的水平;用试剂盒检测SOD、MDA的水平;CCK-8实验、流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测TTTY15与miR-335-5p的靶向关系;Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果IL-1β诱导的软骨细胞中TNF-α、IL-6、MDA的水平升高(P<0.05),凋亡率与Bax蛋白水平升高(P<0.05),TTTY15的表达水平升高(P<0.05),而SOD的活性与细胞存活率降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),miR-335-5p的表达水平降低(P<0.05);随着GpA浓度的升高IL-1β诱导的软骨细胞中TNF-α、IL-6、MDA的水平降低(P<0.05),凋亡率与Bax蛋白水平降低(P<0.05),TTTY15的表达水平降低(P<0.05),而SOD的活性与细胞存活率升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05),miR-335-5p的表达水平升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;TTTY15可靶向调控miR-335-5p;TTTY15过表达可通过降低miR-335-5p的表达而逆转GpA对IL-1β诱导的软骨细胞炎性因子、氧化应激、细胞存活率及凋亡的作用。结论绞股蓝皂苷A可通过调控TTTY15/miR-335-5p通路而抑制炎性反应、氧化应激、凋亡及促进细胞增殖进而减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。

藏红花素调控lncRNA TTTY15/let-7c-5p通路保护帕金森病细胞损伤模型机制研究

目的:探讨藏红花素对帕金森病细胞损伤模型的影响和可能机制。方法:不同浓度(10、50、100μmol/L)的藏红花素作用于1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SK-N-SH细胞,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测长链非编码RNA (lncRNA)睾丸特异性转录Y-连锁15 (TTTY15)和微小RNA (miRNA) let-7c-5p的表达水平。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定TTTY15和let-7c-5p之间的靶向关系。分别转染TTTY15小干扰RNA (si-TTTY15)、let-7c-5p模拟物至人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH),采用上述方法检测敲低TTTY15或过表达let-7c-5p对MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤的影响。结果:与Con组比较,MPP+组SK-N-SH细胞MDA含量升高,GSH含量显著降低(P<0.05);与MPP+组比较,MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组SK-N-SH细胞MDA含量降低,GSH含量升高(P<0.05)。MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组3组MDA、GSH变化与藏红花素剂量相关,MDA随剂量增加而降低,GSH随剂量增加而升高(P<0.05)。与Con组比较,MPP+组SK-N-SH细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与MPP+组比较,MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组SK-N-SH细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组之间各检测指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与Con组比较,MPP+组SK-N-SH细胞TTTY15表达升高,let-7c-5p表达降低(P<0.05);与MPP+组比较,MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组SK-N-SH细胞TTTY15表达降低,let-7c-5p表达升高(P<0.05)。MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组各指标组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,let-7c-5p组WT-TTTY15的SK-N-SH细胞荧光素酶活性降低(P<0.05);miR-NC组与let-7c-5p组MUT-TTTY15的SK-N-SH细胞荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-TTTY15组SK-N-SH细胞let-7c-5p表达降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-TTTY15组SK-N-SH细胞let-7c-5p表达升高(P<0.05)。与MPP++si-NC组比较,MPP++si-TTTY15组SK-N-SH细胞TTTY15的表达水平降低,凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量降低,Bcl-2蛋白表达、GSH含量升高(P<0.05)。与MPP++NC组比较,MPP++let-7c-5p组SK-N-SH细胞let-7c-5p的表达水平升高,凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量降低,Bcl-2蛋白表达、GSH含量升高(P<0.05)。结论:藏红花素对帕金森病细胞损伤模型具有保护作用,其机制可能与下调lncRNA TTTY15/let-7c-5p通路有关。

外周血长链非编码RNA TTTY15诊断ST段抬高型心肌梗死临床价值研究

目的探讨外周血长链非编码RNA(LncRNA)TTTY15诊断ST段抬高型心肌梗死(STEMI)的临床价值。方法选取自2018年1月至2019年6月收治的80例STEMI患者为STEMI组,另选取同期行健康体检的80例健康者为健康组。STEMI组患者分别于入院时及入院后4 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d采集外周血;健康组于体检当日采集外周血。实时荧光定量聚合酶链式反应PCR检测血浆中TTTY15表达水平。Spearman法分析TTTY15与肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的相关性。绘制受试者工作特征曲线,分析TTTY15早期诊断STEMI的效能,计算受试者工作特征曲线下面积、灵敏度、特异度和准确度。结果STEMI患者入院时及入院后4 h、6 h、12 h、1 d、3 d血浆TTTY15相对表达量均明显高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。其中,STEMI患者入院后12 h时血浆TTTY15相对表达量达到峰值,入院后7 d时恢复至正常水平。入院时TTTY15表达水平与CK-MB、cTnⅠ均呈正相关(r=0.895,r=0.832,P<0.05)。三支病变、双支病变患者血浆TTTY15相对表达量均高于单支病变患者,且三支病变患者血浆TTTY15相对表达量高于双支病变患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清TTTY15早期诊断STEMI的灵敏度、特异度为87.95%、80.49%,受试者工作特征曲线下面积为0.808。血清TTTY15、CK-MB、TnI早期诊断STEMI的截断值分别为2.21、27.03 U/L、48.51μg/L。结论STEMI患者发病初期血浆TTTY15表达水平明显升高,TTTY15与CK-MB和cTnⅠ呈正相关。TTTY15可能作为STEMI的生物标志物,对STEMI的诊断有一定价值。

长链非编码RNA TTTY15/MIF-AS1在HPV感染宫颈癌组织中的表达及其与细胞自噬的关系

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)TTTY15/MIF-AS1在人乳头瘤病毒(HPV)感染宫颈癌组织中的表达及其与细胞自噬的关系。方法选择2018年12月-2021年12月天津市第五中心医院妇产科收治的宫颈癌患者82例为宫颈癌组,选择同期医院进行宫颈检查的宫颈低级别上皮内病变(LSIL)和宫颈高级别上皮内病变(HSIL)患者各50例分别作为LSIL组和HSIL组。采用免疫组化法检测研究对象宫颈组织中LncRNA TTTY15、LncRNA MIF-AS1相对表达量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增自噬通路基因自噬相关基因-12(ATG12)、BECN1和微管相关蛋白1A/1B轻链3B(MAP1LC3B),均以2法计算其相对表达量。结果宫颈癌组、HSIL组和LSIL组LncRNA TTTY15、LncRNA MIF-AS1、ATG12、BECN1和MAP1LC3B基因相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),其中宫颈癌组高于HSIL组和LSIL组,HSIL组高于LSIL组(P<0.05);不同淋巴结转移、肿瘤大小和分化状态宫颈癌患者LncRNA TTTY15相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);不同淋巴结转移和分化状态宫颈癌患者LncRNA MIF-AS1相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌患者宫颈组织中LncRNA TTTY15、LncRNA MIF-AS1相对表达与自噬通路基因ATG12、BECN1和MAP1LC3B基因相对表达量均成正相关(P均<0.05)。结论LncRNA TTTY15、LncRNA MIF-AS1参与高危型HPV感染宫颈癌病理进展过程,其机制可能与自噬通路有关。

下调lncRNA TTTY15靶向miR-4500抑制胶质瘤细胞A172生物学特性的实验研究

目的探讨下调lncRNA TTTY15靶向miR-4500对胶质瘤细胞A172增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及机制。方法用qRT-PCR法检测胶质瘤细胞和组织中TTTY15表达的差异。用Starbase软件预测TTTY15的靶基因, 发现其与miR-4500存在互补结合位点, 用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。将胶质瘤细胞A172分为对照组、si-NC(转染siRNA对照组)、si-TTTY15(转染TTTY15 siRNA)、si-TTTY15+Anti-miR-NC(共转染TTTY15 siRNA、inhibitor对照组)和si-TTTY15+Anti-miR-4500组(共转染TTTY15 siRNA、miR-4500 inhibitor), 分别用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡, 用Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭, 用Western印迹法检测Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果胶质瘤细胞和组织的TTTY15表达均升高。TTTY15与miR-4500的表达呈负相关。TTTY15与miR-4500互为靶向关系。与对照组、si-NC组相比, si-TTTY15组胶质瘤细胞miR-4500表达升高, A172细胞存活率降低, 凋亡率升高, 细胞迁移数目和侵袭数目增多, Bax蛋白表达升高, Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P < 0.05)。与si-TTTY15+Anti-miR-NC组相比, si-TTTY15+Anti-miR-4500组胶质瘤细胞中miR-4500表达降低, 细胞存活率升高, 凋亡率降低, 细胞迁移和侵袭数目增加, 细胞中Bax蛋白表达降低, Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P < 0.05)。结论下调TTTY15靶向miR-4500可抑制胶质瘤细胞A172增殖、迁移、侵袭并诱导其凋亡。

LncRNA TTTY15通过调控miR-520a-3p表达对高糖诱导大鼠心肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA TTTY15(LncRNA TTTY15)对高糖诱导大鼠心肌细胞H9c2增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:高糖诱导H9c2细胞后,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测H9c2细胞中TTTY15和miR-520a-3p水平,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白印迹(Western blotting)法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和活化的半胱天冬酶-3(C-caspase-3)蛋白水平。转染TTTY15小干扰RNA或miR-520a-3p模拟物至H9c2细胞,用上述相同方法观察下调TTTY15或上调miR-520a-3p对高糖诱导的H9c2细胞存活率、凋亡率以及cyclin D1和C-caspase-3蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证TTTY15与miR-520a-3p调控关系。结果:高糖促进了H9c2细胞中TTTY15表达、细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白表达(P <0.05),降低了H9c2细胞存活率、miR-520a-3p表达及cyclin D1蛋白表达(P <0.05)。下调TTTY15或上调miR-520a-3p可提高高糖诱导的H9c2细胞存活率及cyclin D1蛋白水平(P <0.05),降低细胞凋亡率和C-caspase-3蛋白水平(P <0.05)。TTTY15在H9c2细胞中靶向负调控miR-520a-3p表达。下调miR-520a-3p可逆转下调TTTY15对H9c2细胞存活率、凋亡率及cyclin D1和C-caspase-3蛋白表达的影响。结论:TTTY15可能通过下调细胞中miR-520a-3p表达抑制高糖诱导的H9c2细胞增殖并促进细胞凋亡。

长链非编码RNA TTY15通过海绵miR337-3p上调JAK2促进舌鳞状细胞癌的生长和转移

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)TTTY 15在舌鳞状细胞癌生长和转移中的作用。方法采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TTTY15、miR-337-3p、JAK2在舌鳞状细胞癌组织和细胞系中的表达,采用CCK-8法检测舌鳞状细胞癌细胞的增殖,采用Transwel法检测舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭,采用荧光素酶报告基因法进行验证TTTY15与miR-337-3p的相互作用。Western blot分析TTTY15和miR-337-3p对JAK2表达的影响。结果TTTY15在舌鳞状细胞癌样本中表达明显上调,而miR-337-3p则下调。TTTY15敲低可显著降低舌鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而miR-337-3p转染则有相反的效应。此外,TTTY15可通过海绵miR-337-3p并下调其表达,而且在舌鳞状细胞癌样本中TTTY15和miR-337-3p有负向调节的关系,而miR-337-3p可直接靶向调节JAK2从而调节舌鳞状细胞癌细胞生长。结论TTTY15通过靶向调节miR-337-3p/JAK2的表达在舌鳞状细胞癌中发挥促癌效应。