糖尿病大鼠背根神经节神经元TTX-R钠离子通道电流变化及意义

目的：通过研究大鼠糖尿病神经病理性疼痛（DNP）中背根神经节（DRG）神经元TTX-R钠离子通道特征的变化,以探讨此疾病引起痛觉过敏可能的发生机制。方法：8只SD大鼠腹腔注射链尿佐菌素诱导制作糖尿病神经病理性疼痛模型（DNP组）,取L5~6DRG,贴壁消化法行神经元培养,电生理全细胞膜片钳记录离子通道电流;8只同月龄大鼠为正常对照。结果：大鼠糖尿病神经病理性疼痛小直径DRG神经元TTX-R INa电流密度较对照组增高。与对照组比较激活曲线向超极化移动3.9 mV（P〈0.05）,DNP组具有重复放电的神经元的比率增加。结论：大鼠糖尿病神经病理性疼痛小直径DRG神经元TTX-R钠通道电流的变化是痛觉过敏形成的原因之一。

东亚钳蝎毒素多肽纯化组份BmK AS-1对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠通道电流的作用

目的 研究国产东亚钳蝎 ( Buthusmartensi Karsch,Bm K)毒素多肽的纯化单体组份 Bm K AS- 1对大鼠背根神经节 ( DRG)神经元河豚毒素不敏感 ( TTX- R)钠电流的作用。方法 采用膜片箝全细胞记录方法 ,观察 Bm K AS- 1对单个DRG细胞 TTX- R钠电流幅值的影响。结果 Bm K AS- 1剂量依赖地抑制 TTX- R钠电流 ,且高剂量 ( 10 μg/m l) Bm K AS- 1几乎完全抑制 TTX- R钠电流 ,其抑制作用不可逆。结论 Bm K AS- 1显著抑制 TTX- R钠电流 。

μ-芋螺毒素——高特异性钠通道阻滞剂

μ-芋螺毒素是一类具有独特药理活性的海洋生物毒素,至今共发现有7种,均为16～22个氨基酸大小的小肽,其分子内部形成3对二硫键。它们高度特异性地阻断电压门控Na+通道,甚至能够区分Na+通道的不同亚型。最近发现的两种μ-芋螺毒素的特异性更强,可以选择性地作用于TTX-R型Na+通道,而对TTX-S型Na+通道几乎无任何影响,这种作用的特点对于研究Na+通道亚型及新药开发具有重要价值。

焦亚硫酸钠对大鼠背根节神经元钠电流的影响

应用全细胞膜片钳技术,研究了食品添加剂——焦亚硫酸钠(sodium metabisulfite,SMB)对大鼠背根节神经元河豚毒素敏感型(tetrodotoxin-sensitive,TTX-S)钠电流和河豚毒素不敏感型(tetrodotoxin-resistant,TTX-R)钠电流的影响。结果表明,SMB可增大TTX-S钠电流和TTX-R钠电流,且具剂量依赖性和电压依赖性。10μmol/L的SMB不影响TTX-S钠电流的激活过程,但却非常显著地影响其失活过程。TTX-S钠电流的半数激活电压在给药前后分别为(-28.06±1.30)mV和(-29.92±1.42)mV(n=8,P>0.05),斜率因子不改变;其半数失活电压在给药前后分别为(-71.33±0.87)mV和(-57.88±0.98)mV(n=8,P<0.01),斜率因子不改变。5μmol/L的SMB显著影响TTX-R钠电流的激活过程和失活过程,给药前后,TTX-R钠电流的半数激活电压分别为(-10.44±0.62)mV和(-16.62±0.82)mV(n=8,P<0.01),半数失活电压分别为(-33.39±0.38)mV和(-40.94±0.60)mV(n=8,P<0.01),均不改变其斜率因子。说明SMB显著增大TTX-S和TTX-R钠电流,使TTX-R钠电流的激活过程提前,抑制TTX-S和TTX-R钠电流的失活过程,从而导致神经细胞的兴奋性增加。这也意味着,二氧化硫及其衍生物亚硫酸氢盐对背根节神经元钠通道具有生理调节作用和病理生理学影响。

人神经母细胞瘤细胞株Nav1.5 Na^+通道编码基因Nav1.5/SCN5A的克隆

目的克隆人神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB-1)细胞河豚毒抵抗型(TTX-R)Nav1.5Na+通道编码基因Nav1.5/SCN5A。方法使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对NB-1细胞TTX-R Nav1.5Na+通道α亚单位编码基因Nav1.5/SCN5A进行克隆。结果人神经母细胞瘤Nav1.5Na+通道编码基因Nav1.5/SCN5A命名为hNbR1,其开放阅读框架可编码2016个氨基酸残基。序列分析显示其与心肌Nav1.5/SCN5A基因(hH1)编码的氨基酸相似性达99.1%;在DⅠ/SS1-SS2之间,存在一个半胱氨酸(c373)残基,提示hNbR1为TTX-RNa+通道;DⅠS3-S4之间一个位于第3号染色体的新的外显子(第6A外显子)编码了该通道α亚单位。另外,一个删除了DⅡ-Ⅲ之间第18外显子的选择性剪接体(hNbR1-2)被发现。结论 Nav1.5/SCN5A基因新的变构体参与编码神经肿瘤组织Nav1.5Na+通道,同时发现该基因的一个新外显子参与编码该通道,且发现Nav1.5/SCN5A基因比以往所知具有更加广泛的表达。