转录因子FOXP4在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其对喉鳞癌TU177细胞生物学特性的影响

目的:检测转录因子FOXP4(Forkhead box P4)在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织和细胞系中的表达,及其对LSCC细胞TU177体外增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的影响,并探讨其与上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)进程间的关系。方法:从河北医科大学第四医院生物标本库选取2013年6月至2015年12月收治的40例LSCC手术患者的癌及癌旁组织标本,应用qPCR法检测FOXP4在LSCC与相应癌旁组织中的表达水平,应用qPCR法和Western blotting检测FOXP4在人LSCC细胞系(AMC-HN-8、TU177、TU686及TU212)中的表达水平。采用小干扰RNA敲低TU177细胞中FOXP4的表达,MTS实验、克隆形成实验、Transwell实验及流式细胞术分别检测FOXP4敲低对TU177细胞增殖、迁移、侵袭、周期及凋亡的影响。应用qPCR法检测si-FOXP4转染TU177细胞后EMT标志物N-钙黏蛋白(N-cad‐herin)、β-连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)、扭曲蛋白(Twist)、转录因子Snail及锌指E盒结合蛋白1(zine finger E box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA的变化情况,应用Western blotting测定FOXP4敲低后N-cadherin、β-catenin、Vimentin及Twist蛋白水平的改变。结果:在LSCC组织中FOXP4的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),且与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移相关(均P<0.05)。FOXP4在LSCC细胞中的表达亦高于癌旁组织(P<0.05或P<0.01)。转染si-FOXP4的TU177细胞中FOXP4的表达显著低于对照组(P<0.01)。与对照组相比,敲低FOXP4可抑制TU177细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01),敲低FOXP4可使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.01),减少S期的复制(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01),敲低FOXP4可降低TU177细胞中N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Twist、Snail、ZEB1的mRNA水平(P<0.05或P<0.01)以及N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Twist的蛋白水平。结论:FOXP4的高表达可能与LSCC的发生和发展相关,FOXP4敲低可以抑制LSCC细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力,使细胞G0/G1期阻滞及促进凋亡,且可能参与EMT进程。

喉癌TU177细胞系中CD133^+CD44^+肿瘤干细胞分选及特性分析

目的:免疫磁珠分选喉癌TU177细胞系中的CD133^+CD44^+细胞,探讨CD133^+CD44^+细胞作为肿瘤干细胞的生物学特性。方法 :培养喉癌TU177细胞,采用免疫磁珠分选技术分选CD133^+CD44^+、CD133^+CD44~^-、CD133~^-CD44^+、CD133~^-CD44~^-细胞,流式检测分选效率,检测各组细胞的增殖、侵袭、迁移、粘附、克隆形成能力。结果:CD133^+CD44^+细胞的增殖、迁移、侵袭、粘附、克隆能力均明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.0001)。结论:免疫磁珠技术能有效进行TU177细胞系的分选,CD133^+CD44^+细胞亚群具有强增殖、侵袭、迁移、粘附、克隆形成能力,具有肿瘤干细胞特征,CD133作为干细胞标志物,其干细胞特性强于CD44,可为喉癌的进一步靶向治疗提供依据。

lncRNA DNM3OS在喉鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其临床和生物学意义

目的:检测lncRNA DNM3OS在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织和LSCC细胞株中的表达及其临床意义,探讨其对LSCC TU177细胞体外增殖、迁移及侵袭的影响,并分析DNM3OS与EMT的关系。方法:从河北医科大学第四医院生物标本库选取2014年3月至2018年12月收治的68例LSCC患者手术切除的癌及癌旁组织标本,应用qPCR法检测DNM3OS在LSCC组织和细胞株中的表达水平。采用siRNA敲低TU177细胞中DNM3OS的表达,应用MTS、克隆形成及Transwell小室等方法分别检测敲低DNM3OS表达对TU177细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响。应用qPCR和WB法检测转染si-DNM3OS后对EMT标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、扭曲蛋白(twist)、锌指转录因子2(SNAI2)mRNA和蛋白的变化。结果:LSCC组织中DNM3OS表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01),并与患者的TNM分期、淋巴结转移及生存期有关联(P<0.05或P<0.01)。DNM3OS在LSCC细胞株(Hep-2、AMC-HN-8、TU177、TU212及TU686)中均呈现不同程度的高表达(P<0.05或P<0.01),转染si-DNM3OS后TU177细胞中DNM3OS的表达显著降低(P<0.01)。与对照组相比,DNM3OS表达敲低可抑制TU177细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01),可上调TU177细胞中E-cadherin的表达而下调N-cadherin、vimentin、twist和SNAI2的表达(均P<0.01)。结论:DNM3OS高表达与LSCC的恶性进展有关,其可能为预测LSCC患者预后的潜在指标;DNM3OS可能通过影响EMT进程促进LSCC细胞的侵袭和转移。

c—fos在喉鳞状细胞癌耐药细胞株TU177／VCR中的表达及意义

目的研究原癌基因c—fos在喉鳞状细胞癌细胞TU177多药耐药形成中的作用。方法采用药物浓度梯度递增法建立稳定的喉鳞状细胞癌耐药细胞系TU177／VCR；采用RT—PCR及蛋白质印迹法检测TU177与TU177／VCR中c—fos基因和蛋白表达差异；构建靶向人c—fos基因的敲低和过表达质粒，分别转染TU177／VCR和TU177细胞；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测在TU177／VCR细胞敲低c．fos和在TU177细胞过表达c-fos后对化疗药物的敏感性。组间比较采用t检验。结果TU177／VCR与TU177相比较，对于长春新碱（VCR）、紫杉醇（TAX）、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）的耐药倍数分别为26．25、7．33、2．41、5．50，表明TU177／VCR耐药株构建成功；与TU177细胞相比，c-fos在TU177／VCR细胞中表达明显多，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；TU177／VCR细胞敲低c-fos后细胞耐药性降低，TU177／VCR空载组半抑制浓度（IC20）值为（306．2±6．3）μmol／L，敲低组IC50值为（81．3±3．9）μmol／L，敲低组IC50是空载组Ic50的27％（P〈0．05）；在TUl77细胞过表达c-fos后细胞耐药性增加，TU177细胞空载组IC50值为（55．3±9．4）μmol／L，过表达组IC50值为（288．1±7．3）izmol／L，过表达组IC50是空载组IC50的5．21倍（P〈0．05）。结论c—fos对喉鳞状细胞癌TU177／VCR细胞的多药耐药具有重要作用，有可能成为喉癌治疗新的分子靶点。