TUBB2A基因新发变异导致癫痫伴发育迟缓及脑发育畸形一个家系的遗传学分析

目的探究1个癫痫伴发育迟缓及脑发育畸形家系的临床表现及致病基因变异情况。方法选取2022年7月2日于临沂市人民医院儿内科就诊的1个癫痫伴发育迟缓及脑发育异常家系为研究对象。收集患儿及其家系成员的临床资料,应用高通量测序技术对患儿及其姐姐与父母进行基因检测,采用Sanger测序法进行验证。结果患儿为6岁男性,自幼全面生长发育迟缓,间断抽搐4年余,癫痫发作存在热敏感特点,头颅影像学提示脑发育畸形,视频脑电图提示异常放电。高通量测序结果显示患儿及其姐姐均携带TUBB2A基因c.5G>T(p.Arg2Leu)杂合变异,其父母为野生型。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关标准及指南,该变异评定为致病性变异(PS2+PM2Supporting+PM5+PP1+PP2+PP3)。结论TUBB2A基因c.5G>T(p.Arg2Leu)杂合变异考虑是该家系的遗传学病因,可能存在生殖腺细胞嵌合的情况。

miR-29表达载体的构建及在HBV相关肝癌中靶基因的初步鉴定

目的通过构建miR-29的表达载体以及HBV相关肝癌中靶基因的初步鉴定,为探讨miR-29和其靶基因在HBV相关肝癌发生、发展中的作用奠定基础。方法利用生物信息学方法预测miR-29的靶基因,RT-PCR方法检测靶基因在肝癌细胞系及相应临床标本中的表达变化;构建miR-29及其靶基因的表达载体,利用双荧光报告检测方法检测miR-29与靶基因的靶向关系。结果成功构建miR-29及其靶基因核表达载体,分别命名为pS-miR-29a,pS-miR-29b,pS-miR-29c及pGL3-TUBB2A;靶基因TUBB2A在HBV相关肝癌中表达明显上调。结论 TUBB2A为miR-29的直接靶基因,本研究为下一步研究miR-29及其靶基因TUBB2A在HBV相关肝癌发生、发展中的作用奠定基础。

自噬在多氯联苯118致大鼠甲状腺组织损伤中的作用机制

目的探讨自噬在慢性低浓度[0~1 000μg/(kg·d)]多氯联苯118(PCB118)导致大鼠甲状腺组织损伤中的作用机制。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D组,每周腹腔注射0、10、100、1 000μg/(kg·d)PCB118 5次,共13周。PCB118处理结束后,处死大鼠取甲状腺组织,用透射电子显微镜观察大鼠甲状腺组织超微结构。采用蛋白免疫印迹法检测甲状腺组织自噬相关蛋白LC3、P62、BECLIN1及β-Ⅲ型微管蛋白(Tubb3)/死亡相关蛋白激酶2(DAPK2)-通路相关蛋白[Tubb3、DAPK2、肌球蛋白调节轻链(MRLC)、磷酸化MRLC(p-MRLC)、自噬相关基因9A(ATG9A)]。采用实时荧光定量PCR法检测Tubb3/DAPK2-通路相关基因[Tubb3、DAPK2、非肌肉肌球蛋白重链IIA(NMMHC-ⅡA)、ATG9A]。结果与A组比较,B、C、D组甲状腺滤泡细胞损伤、部分空泡化,线粒体密度下降、嵴膜消失,伴内质网扩张,且上述改变在C组最为明显,C、D组出现典型的自噬小体。与A组比较,B组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高(P均<0.05);C、D组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、BECLIN1蛋白表达升高,P62蛋白表达降低(P<0.01)。与B组比较,C组BECLIN1蛋白表达升高(P均<0.01);D组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、BECLIN1蛋白表达升高,P62蛋白表达降低(P均<0.05)。与C组比较,D组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、BECLIN1蛋白表达升高(P均0.01)。与A组比较,C、D组Tubb3蛋白表达降低(P均<0.01),DAPK2蛋白表达、p-MRLC/MRLC升高(P均<0.05)。与B组比较,C组Tubb3蛋白表达降低,DAPK2蛋白表达升高(P均<0.05);D组Tubb3蛋白表达降低,DAPK2、MRLC、p-MRLC蛋白表达及p-MRLC/MRLC升高(P均<0.05)。与C组比较,D组DAPK2蛋白表达降低,MRLC、p-MRLC蛋白表达及p-MRLC/MRLC升高(P均<0.05)。与A组比较,B组Tubb3 mRNA降低,DAPK2、ATG9A mRNA升高(P均<0.05);C组Tubb3 mRNA降低,DAPK2、NMMHC-ⅡA、ATG9A mRNA升高(P均<0.05);D组Tubb3表达降低,NMMHC-ⅡA、ATG9A mRNA升高(P均<0.05)。与B组比较,C组DAPK2、ATG9A mRNA升高(P均<0.01)。与C组比较,D组DAPK2、ATG9A mRNA降低(P均<0.05)。结论自噬在慢性低浓度PCB118导致大鼠甲状腺组织损伤中起重要作用,其作用机制可能与Tubb3/DAPK2-相关信号通路有关。

LEF1、TUBB2B在卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨LEF1、TUBB2B在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理特征关系。方法:采用多重荧光免疫组织化学方法检测143例卵巢癌组织中LEF1及TUBB2B的表达。结果:LEF1在复发卵巢癌组织的表达(3.55±1.99)明显高于未复发卵巢癌组织(2.90±1.49),差异具有统计学意义(P=0.035)。LEF1的表达与患者的年龄、病理类型、FIGO分期、肿瘤大小、淋巴结阳性、是否有远处转移没有相关性。TUBB2B的表达与以上临床病理特征均无相关性。TUBB2B表达与LEF1呈正相关(r^(2)=0.852,P<0.0001)。结论:LEF1与TUBB2B在卵巢癌中的表达存在一定相关性,可能共同作用促进卵巢癌的发生发展。

TUBB2B基因变异导致的灰质异位症合并癫痫1例报告并文献复习

目的报道1例TUBB2B基因新生杂合错义突变导致的灰质异位患者临床表型及基因突变位点,拓展TUBB2B突变的表型谱和突变谱。方法收集2017年7月就诊于空军军医大学第一附属医院神经内科的1例TUBB2B突变患者,分析其临床特征和突变位点,并对既往研究进行回顾总结。结果患者男性,18岁起病,主要表现为癫痫发作、左手精细动作不良和空间想象力差。磁共振成像提示右额叶底部结节状灰质异位,右侧额顶颞部局部脑回、脑沟浅平。全外显子基因检测结果提示该患者TUBB2B基因c.776 C>T(p.Pro259Leu)杂合错义突变,患者的父母均为野生型。该突变位点位于tubulin和tubulin-c结构域之间,未影响到重要结构域的功能。使用丙戊酸镁联合左乙拉西坦治疗后,患者的癫痫症状得到明显控制,至今已有3年未出现癫痫发作。结论TUBB2B基因c.776 C>T(p.Pro259Leu)杂合错义突变是导致灰质异位的新生错义突变。患者预后良好,两种抗癫痫药物联合治疗可完全控制癫痫发作。

一例复杂性皮质发育异常伴其他脑部畸形胎儿的TUBB2B基因变异分析

目的对一例胼胝体发育不全并伴有其他脑部畸形的胎儿进行遗传学分析,以明确其致病原因。方法应用全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)技术筛选与胎儿表型相符合的致病变异,并对先证者及其父母进行Sanger测序验证。结果WES发现胎儿TUBB2B基因第4外显子存在一处新发错义变异c.758T>A(p.L253Q),既往未见报道。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南,TUBB2B基因c.758T>A为可能致病性变异。生物信息学分析提示TUBB2B蛋白第253位亮氨酸在多个物种中高度保守,c.758T>A变异可能影响Leu253、Asp249和Met257残基之间氢键的形成,影响GTP/GDP的结合,最终影响蛋白的功能。结论TUBB2B基因c.758T>A(p.L253Q)杂合变异可能是导致胎儿脑部畸形的原因。上述发现拓展了TUBB2B基因的变异谱,为该家系的遗传咨询和产前诊断提供了依据。

一个共同性外斜视家系基因突变研究

目的研究一个共同性外斜视家系中患者的基因突变位点及其发病机制。方法对一个共同性外斜视一家系检查,抽取4例患者外周静脉血,及1名正常家系成员,3名非家系健康人外周静脉血作阴性对照,以外周血基因组为模板,通过PCR扩增ARIX基因外显子、TUBB2b基因外显子、TUBB3基因的外显子,并将PCR产物纯化后测序。测序结果与GenBank公布的基因正常序列进行比对。结果该家系成员在ARIX基因无任何外显子突变,而1例患者在TUBB2b基因外显子存在位点rs2259136同义突变,3例患者在TUBB3基因中3′UTR区域rs1135425位点出现突变。结论共同性外斜视遗传受多因素影响,TUBB3基因rs1135425位点突变可能是引起该家系外斜视的一种原因。