癌胚性TUFT1异常表达与HBV相关肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的预防、早期诊断及精准治疗仍是亟需攻克的难题。肝炎病毒(HBV or HCV)慢性持续性感染、化学致癌物摄入和非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)等与HCC进展密切相关。最新发现,在牙釉质发育和矿化中起重要作用的釉丛蛋白(Tuftelin,TUFT1)异常转录,在人体组织中广泛分布。TUFT1作为酸性、磷酸化糖蛋白可促进肿瘤进展与转移。然而,TUFT1表达与HCC的研究报道尚不多见。本文综述了TUFT1基因结构、组织分布与肿瘤的关系,重点分析其在HBV-HCC进展中作用及其应用前景。

癌胚性TUFT1过表达及基因转录干预对肝细胞癌的抑制作用

目的分析肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)釉丛蛋白(tuftelin,TUFT1)表达及基因转录干预的抑制作用。方法收集术后HCC组织和癌旁组织,分析TUFT1表达;从不同肝癌细胞和对照肝LO2细胞株中提取TUFT1,以免疫印迹法筛选TUFT1低或过表达的癌细胞株;将已构建含TUFT1基因或干扰TUFT1-shRNA3的慢病毒质粒,分别转染低或过表达TUFT1的癌细胞株,以CCK-8法、划痕、Transwell法、流式细胞术等分析细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为;将稳定表达TUFT1的两种细胞株皮下接种裸鼠,分析对移植瘤生长的影响。结果肝癌组织TUFT1过表达,主要定位于细胞浆和细胞膜。肝癌组TUFT1阳性率为87.1%,均显著高于癌旁组(χ^(2)=18.563,P<0.001);肝癌细胞株中TUFT1表达明显高于LO2细胞(P<0.001)。体外研究,以有效的TUFT1-shRNA3质粒,转染高TUFT1表达的MHCC-97H细胞,在TUFT1功能丧失后癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著抑制,凋亡率升高;以插入TUFT1基因的质粒,转染低TUFT1表达的Hep3B细胞,在TUFT1功能获得后癌细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著增强。体内研究,将功能丧失的MHCC-97H细胞于裸鼠皮下接种,移植瘤中TUFT1下调,并显著抑制瘤体生长(Z=12.000,P<0.01)。结论TUFT1为癌胚性蛋白,对其干预有望成为潜在的HCC治疗的分子靶目标。

三阴乳腺癌组织中TUFT1和Rab5-GTP的表达水平及临床意义

目的研究三阴乳腺癌(TNBC)组织中TUFT1和Rab5-GTP的表达水平,分析两种蛋白表达的相关性及TUFT1与患者临床病理特征的关系。方法选取2021年3月至2021年12月住院手术的TNBC患者80例,收集其癌组织。免疫组化法检测TUFT1和Rab5-GTP在癌组织中的表达情况,分析两种蛋白表达的相关性;评估TUFT1与TNBC患者临床病理特征之间的关系。结果在TNBC组织中,观察到TUFT1主要在癌细胞胞膜上和胞质内均有染色,以胞质内染色最强,Rab5-GTP在胞质内染色,两种蛋白的表达呈正相关(P<0.05);TUFT1表达与患者年龄无关(P>0.05),而与肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移均呈正相关(均P<0.05)。结论TUFT1和Rab5-GTP的表达水平与三阴乳腺癌病程的进展关系密切。

TUFT1真核表达质粒的构建及其功能研究

设计合成引物,扩增出TUFT1的CDS序列,双酶切后连接到pEGFP-C2载体上,将过表达质粒转染至胰腺癌细胞株中。结果显示,过表达组细胞的增殖率,显著高于空白组和对照组;过表达组细胞的凋亡率,显著低于空白组和对照组。成功构建TUFT1的真核表达载体,并初步确定TUFT1可以明显增强人胰腺癌细胞株的增殖,同时抑制其凋亡,为进一步探索TUFT1基因功能、寻求治疗胰腺癌的新途径提供了细胞学基础。

姜黄素通过调控TUFT1/AKT信号通路抑制肝细胞癌增殖、迁移及侵袭研究

目的:探讨姜黄素对肝细胞癌细胞系HCCLM3体外增殖、迁移及侵袭的影响及潜在分子信号机制。方法:利用不同浓度的姜黄素(0、30、60μmol/L对应为空白对照组、姜黄素处理组1、姜黄素处理组2)处理HCCLM3细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,利用Transwell法检测细胞的迁移及侵袭能力改变;利用姜黄素(0、60μmol/L)处理HCCLM3细胞,利用qRT-PCR及Western blot法检测细胞内TUFT1表达改变及AKT蛋白磷酸化。结果:MTT实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素处理组1及姜黄素处理组2的HCCLM3细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。Transwell迁移实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素处理组1及姜黄素处理组2的HCCLM3细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素处理组1及姜黄素处理组2的侵袭能力显著降低(P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素处理组2的HCCLM3细胞内TUFT1 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。Western blot结果显示,姜黄素处理组2的HCCLM3细胞内TUFT1蛋白表达水平显著降低,AKT蛋白磷酸化显著降低(P<0.05)。结论:姜黄素可能通过抑制TUFT1/AKT信号通路活化,发挥抑制肝细胞癌增殖、迁移及侵袭的作用。

乙型肝炎病毒相关肝癌釉丛蛋白和KLF-5过表达及其临床病理特征

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)组织中釉丛蛋白(TUFT1)和锌指蛋白家族Krüppel样因子5(KLF5)表达,评估其对HCC的临床价值。方法依据The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库资料,比较癌及非癌组KLF5 mRNA及TUFT1 mRNA转录状态,分析组间差异及其预后价值;经伦理委员会批准,收集术后肝癌及其配对癌周组织制作组织芯片,以免疫组织化学法验证KLF5和TUFT1表达及其细胞内定位;以免疫印迹法分析组织中表达及其临床病理学特征;以SPSS软件行单/多因素分析其与患者预后的关系。结果依据TCGA资料,HCC组TUFT1或KLF5 mRNA转录水平均显著高于非癌组(P<0.001)。免疫组织化学检查和蛋白质印迹法证实人HCC组织TUFT1和KLF5过表达,主要定位于细胞质和细胞膜。HCC组织中TUFT1阳性率为87.1%(χ^(2)=18.563,P<0.001),KLF5阳性率为95.2%(χ^(2)=96.435,P<0.001),二者均显著高于癌旁组;在国际抗癌联盟的标准III~IV期其表达强度均高于I~II期(P<0.01)。临床病理特征显示,二者异常均与患者HBV感染、瘤体大小、伴肝外转移、TNM分期及伴腹水显著相关。单因素分析均与瘤体大小、HBV感染和患者生存率相关;多因素分析均是HCC患者的独立预后因素。结论TUFT1和KLF5可能均为HBV相关HCC诊断和预后具有临床价值的新标志物。