TUNEL技术方法的探讨

探讨末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口标记技术 (TUNEL)的染色方法 ,以期提高特异性与敏感性。采用以去势 (经手术切除睾丸 )后天数不同的大白鼠前列腺 ,用 TUNEL 法染色 ,观察不同时期的细胞凋亡水平 ,对经典的 TUNEL 法进行改良 ,将染色结果与 TU NEL 经典法和 HE染色法进行对比。结果表明 :采用改良法后 ,阳性细胞明显增加 ,而且着色深 ,凋亡指数明显增高 (P<0 .0 1)。

运用TUNEL技术检测胃粘膜活检组织凋亡细胞

细胞凋亡，亦称程序化细胞死亡，是由基因调控的细胞主动死亡过程。当凋亡发生时，核内的核酸内切酶活化，将ＤＮＡ降解为１８０～２００ｂｐ及其倍数的片段。１９９２年Ｇａｖｒｉｅｌｉ等［１］创立了脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技...

TUNEL技术原位观察肝细胞凋亡

目的采用ＴＵＮＥＬ技术对福尔马林固定、石蜡包埋的肝组织和培养肝癌细胞进行染色，以探讨肝细胞凋亡的形态特征和分布．方法使用德国宝灵曼公司生产的原位末端标记试剂盒．石蜡包埋组织经微波处理后，行常规ＴＵＮＥＬ染色，观察凋亡细胞的形态和分布．结果ＴＵＮＥＬ阳性信号为黄绿色或黄色荧光，位于胞核，呈小圆形或环行．ＴＵＮＥＬ阳性细胞大多在形态学上表现为凋亡的细胞．对肝组织ＴＵＮＥＬＬＩ的分析显示，肝癌组织中细胞凋亡指数（０３９５）比肝硬变（００７５）和癌旁肝组织（０１０５）要高，且癌组织恶性程度越高，这种凋亡就越显著．结论改进的ＴＵＮＥＬ技术对福尔马林固定、石蜡包埋的难处理组织进行染色是一个有效的方法．

FLIP在非小细胞肺癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 研究FLIP在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达并观察其与细胞凋亡的关系。方法 采用免疫组化技术检测FLIP在 48例NSCLC和 16例肺良性疾病组织中的表达 ,并应用TUNEL技术检测 48例NSCLC的凋亡情况。结果 肺癌组织中FLIP的表达率为 83 .3 3 % ( 4 0 /4 8) ,明显高于肺良性病变组织( 2 5 .0 0 % ) (P <0 .0 1)。FLIP的表达水平与TNM分期及淋巴结转移有密切关系 ,但与肿瘤组织学分型、分化程度无明显关系。FLIP在肺癌组织中的表达水平与癌细胞凋亡指数 (AI)未见明显相关性 (r =-0 .2 11,P >0 .0 5 )。结论 FLIP的过量表达在NSCLC的发生发展中起重要作用 ,但与细胞凋亡无明显关系。

胃癌细胞凋亡与胃癌患者临床预后的关系

目的 研究胃癌组织中自发性细胞凋亡的发生情况及其与胃癌临床病理参数和胃癌患者预后的关系。方法 采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术对 5 3例有随访结果的胃癌组织中的凋亡细胞进行原位观察和比较。结果 胃癌组织自发性细胞凋亡指数平均为 5 .76 %。细胞凋亡指数与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度无明显关系 ,与胃癌细胞分化程度、淋巴结转移及临床分期有关 ,高、中分化腺癌凋亡指数显著高于低分化腺癌 (t =3 .0 5 4,P <0 .0 1) ,无淋巴结转移和临床Ⅰ、Ⅱ期胃癌凋亡指数显著高于有淋巴结转移和临床Ⅲ、Ⅳ期胃癌 (t=2 .16 0 ,t =2 .32 2 ,P <0 .0 5 )。高凋亡指数组的胃癌患者生存率优于低凋亡指数组 (Logrank时序检验 χ2 =4.5 70 ,P <0 .0 5 )。结论 胃癌组织自发性细胞凋亡与胃癌的某些生物学特性有密切的关系 ,细胞凋亡异常在胃癌发生发展过程中可能起重要作用。

吸烟大鼠脑细胞凋亡与Fas蛋白表达

目的 观察吸烟诱导大鼠脑组织细胞凋亡与Fas蛋白表达及两者之间的关系 ,探讨吸烟的时间和数量对细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响。方法 利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术及免疫组织化学法检测细胞凋亡和Fas蛋白表达。结果 除戒烟组外各吸烟组凋亡细胞数量及Fas蛋白表达比对照组有显著性增加。凋亡细胞数量随吸烟时间及数量的增加而增加 ,Fas蛋白表达强度随吸烟时间延长而增加。结论 吸烟可诱导大鼠脑组织细胞凋亡及Fas蛋白过度表达。Fas介导吸烟诱导的细胞凋亡 。

Survivin在胃癌中的表达及其与细胞凋亡、p53的关系

目的 研究Survivin在胃癌及不典型增生组织中的表达情况以及与细胞凋亡和p5 3的关系。方法 采用免疫组织化学方法及TUNEL技术对胃癌及不典型组织分别进行检测。结果 Survivin、p5 3在胃癌中的表达明显高于不典型组织和正常胃粘膜,其中p5 3蛋白表达阳性91例中Survivin的阳性表达为5 6 (6 1 .5 %)例,p5 3蛋白表达阴性的5 9例中Survivin阳性表达为1 7(2 8.8%)例,两者阳性表达率有显著性差异(P <0 .0 5 )。Survivin蛋白阳性表达标本中的凋亡指数(0 .6 0 %)与其阴性组(0 .94 %)之间有显著性差异(P <0 .0 5 )。结论 Survivin可抑制细胞凋亡;在胃癌中的表达与p5 3有显著相关性。

根除幽门螺杆菌对胃窦黏膜萎缩的逆转作用

目的评价5a随访根除幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染对胃窦黏膜萎缩的逆转作用并探讨其机制。方法采用前瞻性队列研究方法,选择110例慢性萎缩性胃窦炎患者作为观察对象。Hp阳性患者根据自愿原则采用根除Hp治疗或采用对照治疗。全部病例跟踪随访5a。采用TUNEL技术及免疫组化染色检测胃黏膜上皮细胞凋亡和增殖情况。结果Hp阳性观察组患者胃黏膜萎缩程度在5a中加重的比例高达43%,显著高于Hp根除观察组及Hp阴性对照组(13%和20%,P<0.05)。Hp根除观察组胃窦黏膜萎缩程度减轻的病人比率为29%,显著高于Hp阳性观察组(9%,P<0.01)。Hp阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数及PCNA指数(12.7%,14.6%)均显著高于Hp阴性患者(2.9%,8.0%,P<0.01),Hp根除后胃黏膜上皮细胞PC-NA指数和凋亡指数(14.3%,12.9%)均显著下降(9.2%,3.6%,P<0.01),而Hp未根除者上述指标则无显著性变化。结论Hp感染可能通过刺激胃黏膜上皮细胞凋亡与增殖的调节紊乱,促进胃窦黏膜萎缩的形成与发展。根除Hp治疗可以使胃窦黏膜萎缩程度减轻和逆转。

常见舌苔舌上皮细胞凋亡与fas mRNA和蛋白产物关系的研究

目的 :探讨舌苔厚度变化与舌上皮细胞凋亡、fas基因表达的关系。方法 :运用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记 )技术、原位杂交、免疫组化技术 ,观察正常薄白苔、病理薄白苔、厚苔和剥苔等几种常见舌苔的舌上皮细胞凋亡指数的变化和fas的表达水平。结果 :与正常薄苔比较 ,剥苔AI(凋亡指数 )升高 (P <0 0 5 ) ,而厚苔AI降低 (P <0 0 5 )。剥苔fas基因表达阳性率高于其他各组。结论

增生性玻璃体视网膜病变增殖膜的免疫组织化学及细胞凋亡研究

目的 检测增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)增殖膜标本中细胞Fas、Fas配体 (Fasligand ,FasL)的表达和凋亡 ,并探讨Fas/FasL与凋亡的关系。方法 通过免疫组织化学的方法检测 12例增殖膜标本Fas和FasL的表达 ,TUNEL技术检测凋亡细胞。结果 PVR增殖膜标本中Fas和FasL阳性细胞百分率分别为 60 6%和 43 75 % ,偶见两者同时表达的细胞。 5例前膜和 2例下膜标本可见TUNEL染色阳性细胞核。凋亡与Fas、FasL相关系数均为 0 77(t =3 82 ,P <0 0 5 ) ,PVR病程与凋亡的r值为 0 74(t =3 11,P <0 0 1)。结论 Fas、FasL高表达与凋亡的正相关性提示 ,通过Fas/FasL系统诱导增殖细胞及炎症细胞凋亡 。

鼠慢性脊髓压迫及减压后骨骼肌细胞的凋亡

目的 :研究慢性压迫性脊髓损伤及减压后骨骼肌细胞的凋亡 .方法 :36只SD大鼠分成 3组 :①压迫组 16只 ;②减压组 16只 ;③正常对照组 4只 .应用HE染色和TUNEL技术观察慢性脊髓压迫及减压后肌细胞的萎缩和凋亡 .结果 :正常对照组偶见凋亡细胞核 ,慢性脊髓压迫性损伤后骨骼肌细胞凋亡的数量增加 ,减压后肌细胞凋亡数量明显减少 .结论 :慢性脊髓压迫性损伤后肌细胞出现凋亡有重要意义 ,它是引起骨骼肌萎缩的原因之一 .

丁型肝炎病人肝组织中HDAg和肝细胞凋亡双标记表达

目的 探讨肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机制中的作用。方法 采用免疫组化双重染色和TUNEL技术 ,检测 79例丁肝病人肝组织HDAg和肝细胞凋亡分布及其关系 ,以 5 4例乙型肝炎病人肝组织作对照。结果 HDAg以肝细胞核表达为主 ,HDAg、凋亡细胞表达分布与肝组织病理损害程度一致 (P <0 .0 1)。多数凋亡细胞位于HDAg阳性部位或附近 ,肝细胞凋亡在各型肝炎中的分布强度差别有显著性意义(P <0 .0 1)。结论 HDAg表达与肝细胞凋亡分布之间有显著的相关性 。

胃癌增生凋亡与调节基因的表达

目的:研究胃癌、癌前病变(异型增生、肠化生、萎缩性胃炎)细胞增生凋亡及其调节基因表达,探讨胃癌多阶段发生.方法:采用病理组织学对24例胃癌、14例癌旁异型增生、24例远离癌灶的慢性胃炎和32例肠化生胃黏膜进行分类、分期、分度,Ki67,P53及Bcl-2免疫组化染色,TUNEL(ISEL)技术检测细胞凋亡.计算各种病变的Ki67增生指数和凋亡指数、凋亡增生比、凋亡强度,和P53,Bcl-2的阳性例数和百分比.结果:胃癌、异型增生、肠化生和萎缩性胃炎的增生指数分别是12.4±6.8%,6.4±4.2%,6.6±3.4%和3.8±2.9%,浅表性胃炎与各组均有非常显著差异(P<0.01).凋亡指数分别是2.4±1.4%,2.6±1.6%、3.1±1.2%和3.8±2.0%;凋亡强度分别是0.3,0.6,079和1.3.以萎缩性胃炎最高,与其他各组间均有非常显著差异(P<0.01),中、重度异型增生和胃癌相互间无显著性差异(P>0.05).重度异型增生和早期胃癌的凋亡强度是浅表性胃炎的1/3,进展期胃癌仅为其1/5.P53蛋白在胃癌、异型增生、肠化生、萎缩性胃炎分别是25.0%,14.3%,3.1%和0%.Bcl-2的表达分别是58.3%,42.8%,9.4%和7.1%,在胃癌和异型增生P53蛋白和Bcl-2表达相互间存在显著相关性(P<0.05).结论:P53和Bcl-2基因不仅在胃癌表达,在癌前病变异型增生、肠化生也有部分表达,萎缩性胃炎不具有上述特点.

肺癌组织中细胞凋亡的初步观察

目的 探讨肺癌组织中细胞凋亡的状况。方法 对 3 8例肺癌组织及 2 1例肺良性疾病组织 ,应用TUNEL技术对细胞凋亡情况进行了检测 ,并对阳性细胞进行计数 ,对凋亡指数予以定义。结果 肺癌组织中的凋亡指数 (3 .73 %± 2 .42 % )高于肺良性病组织 (0 .77%± 0 .5 0 % ) (P <0 .0 1) ;Ⅰ～Ⅱ期肺鳞癌的凋亡指数 (1.9%± 0 .96% )明显低于Ⅲ期肺鳞癌的凋亡指数 (5 .2 8%± 1.89% ) (P <0 .0 1) ;而在肺腺癌中各期之凋亡指数无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 细胞凋亡可能在肺癌的发生发展中发挥一定的发作用 ,对肺癌的诊断、判断预后有重要的参考价值。

血管内皮生长因子防止脊髓运动神经元凋亡的研究

目的研究成年大鼠脊髓损伤后血管内皮生长因子对运动神经元的神经保护作用以及Caspase3mRNA表达与运动神经元凋亡的关系。方法用72只SD大鼠制作成脊髓损伤模型,随机分为对照组、应用VEGF组和VEGF拮抗组。伤后6、12、24h和3、7、14d取材。应用原位杂交、TUNEL技术研究运动神经元的凋亡。结果Caspase3mRNA在VEGF组脊髓组织中的表达下调,在VEGF拮抗组中表达增高。TUNEL阳性细胞计数显示脊髓损伤后VEGF拮抗组有多量神经元丢失,而VEGF组神经元丢失数量明显减少。结论VEGF可以防止成年大鼠脊髓损伤后运动神经元的凋亡,其作用可能是由Caspase3介导的。

舌上皮细胞bax,TGF-β3基因表达与厚苔关系的研究

目的 检测厚苔舌上皮细胞凋亡情况及凋亡相关基因bax ,TGF - β3mRNA和蛋白产物 ,以期从基因分子水平阐明厚苔的形成机制。方法 运用TUNEL技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术 ,进行定性和定量分析。结果 与正常薄苔比较 ,厚苔细胞凋亡减少 ,同时凋亡相关基因bax ,TGF - β3表达水平降低。结论 促凋基因bax ,TGF - β3低表达可能是引起舌苔上皮细胞凋亡减少从而导致厚苔形成的重要原因。

细胞凋亡及bax基因表达与舌苔变化关系的研究

目的:检测常见舌苔舌上皮细胞凋亡情况及凋亡相关基因baxmRNA和蛋白产物,探讨舌苔厚度变化与舌上皮细胞凋亡、bax基因表达的关系。方法:运用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记)技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术。结果:与正常薄苔比较,剥苔bax基因过度表达伴随细胞凋亡增多,而厚苔bax基因低表达伴随细胞凋亡减少。bax基因表达水平变化趋势与细胞凋亡水平变化趋势一致。结论:bax基因表达水平的变化可能是影响舌苔上皮细胞凋亡并导致舌苔厚度变化的重要原因。

Bcl-2/bax、Bak介导的肝细胞凋亡在丁型肝炎病情重型化机制中的作用

目的 探讨Bcl 2 /bax、Bak及其介导的肝细胞凋亡在病情重型化机制中的作用。方法 采用刊TUNEL技术和免疫组化单、双标记染色 ,检测 77例丁肝病人肝组织中HDAg、bcl 2、bax和Bak表达及肝细胞凋亡情况。以HDV阴性的 67例乙型肝炎作对照。结果 Bcl 2、bax和Bak均以肝细胞浆表达为主。HDAg以肝细胞核表达为主。HDAg、bax和Bak与肝细胞凋亡表达及分布有相关性 ,四成分在各型肝炎中的表达强度有显著性差别意义 (P <0 .0 5 )。结论 HDAg、bax、Bak和肝细胞凋亡表达强度和阳性细胞分布均与肝组织炎症活动及病理损害程度相关 ,HDV感染可诱导肝细胞表达bax和Bak ,增强肝细胞凋亡 。