奶牛瘤胃反-11-油酸氢化细菌分离培养条件的优化

本研究旨在建立奶牛瘤胃反-11-油酸(trans-11 18:1,TVA)氢化细菌体外富集和分离培养的优化条件。在厌氧培养基中添加TVA至不同终浓度(0、30、40、50、60μg.mL-1),接种瘤胃微生物后进行连续培养,每隔4h采集培养物,用于测定TVA含量及培养液OD值。另外,在厌氧培养基中添加TVA,使其终浓度为50μg.mL-1,传代培养6代收集每一代富集培养物,利用PCR-DGGE分析TVA氢化细菌种群的变化,并选取DGGE差异条带进行16SrDNA测序分析。结果,添加TVA后,连续培养至4h,培养基中TVA含量快速下降,培养至12h,TVA浓度保持恒定。当TVA添加浓度为50和60μg.mL-1时,培养12h后TVA降解率较其他浓度要高。此外,培养液OD值呈先升高后降低的趋势,且在12h达最大值。传代富集培养时,当传至第4代时,疑似TVA氢化菌种类和数量增加最显著。对差异条带的测序结果表明TVA氢化菌大多属于Lactobacillus gasseri和未培养细菌。本研究确定了奶牛瘤胃中TVA氢化细菌分离培养的适宜TVA添加量、传代时间及富集培养代数,为后续的选择性分离培养奠定了基础。