TW-37对肺癌细胞生长和血管生成的影响及其机制研究

探究TE-37对肺癌细胞生长和血管生成的影响及机制。方法 应用A549肺癌细胞建立21只肺癌小鼠模型,分别设为A组(7只,空白对照,尾静脉注射生理盐水)、B组(7只,尾静脉注射0.5mg/kg TW-37)、C组(7只,尾静脉注射10.0mg/kg TW-37),三组均每日注射1次,共治疗27d时,以免疫组化法检测CD31抗体、Ki67、VEGF抗体水平;取对数生长期A549肺癌细胞,分为2组,形成对照组(生理盐水孵育8h)、TW-37组(8μmol/L的TW-37孵育8h),提取样品RNA,通过质谱高通量检测分析生物信息学多组学结果。结果 A组肿瘤体积、Ki67、CD31水平较B组、C组高,B组肿瘤体积、Ki67、CD31水平较C组高(P<0.05);与对照组相比,TW-37组p-VEGF、p-ERK、HIF-1α、AP-1、AP-2水平与癌细胞增殖比例显著下降,癌细胞凋亡比例明显偏高(P<0.05)。结论 TW-37具有抑制肺癌细胞生长及血管生成作用的效果,其作用效果存在剂量依赖性,其对肺癌生长及血管生成抑制作用可能与抑制ERK/VEGF通路有关。

TW-37调节NF—kB信号通路抑制体外胰腺癌细胞转移的实验研究

目的观察TW-37干预对胰腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭及血管生成的影响，探讨其可能机制。方法应用TW-37干预胰腺癌细胞株BxPC3和HPAC，以转染NF-KBp65eDNA（p65eDNA）、靶向NF—KBp65的siRNA（siRNA—p65）细胞及未干预细胞作为对照组。采用MTT和ELISA法检测细胞增殖和细胞凋亡；应用Transwell小室检测细胞侵袭能力；采用体外人脐静脉内皮细胞（HUVECs）成管实验观察细胞培养上清对血管生成的影响；ELISA法检测细胞NF．KB活性；蛋白质印迹法检测细胞NF-kB靶向调节蛋白VEGF、MMPO表达。结果TW-37呈浓度和时间依赖性抑制BxPC3、HPAC细胞的增殖，诱导两株细胞的凋亡（A405值1．29±0．21比0．09±0．01，1．07±0．18比0．08±0．01），抑制细胞NF．KB活性及NF-kB p65、VEGF、MMPO蛋白表达，差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。对照组、0．75μmoVLTW．37干预组的穿膜细胞数分别为（46．7±5．24）、（10．3±1．26）＋／200倍视野；HUVECs形成的血管数分别为（39．4±4．36）、（7．84±1．25）＋／200倍视野，差异均有统计学意义（P值均为0．001）。转染p65eDNA的两株细胞的NF—KB活性较对照组显著增加，用TW-37干预后NF—kB活性下降；转染siRNA．p65的两株细胞的NF-kB活性较对照组显著下降，用TW-37干预后NF—kB活性进一步下降，差异均有统计学意义（P〈0．05或〈0．01）。转染p65eDNA对两株细胞凋亡无明显影响，用TW-37干预后凋亡略有变化；转染siRNA—p65的两株细胞凋亡显著增加，用TW-37干预后又进一步增加，差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。结论TW-37通过NF—kB抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和血管生成，诱导细胞凋亡。

肾损伤分子1介导游离轻链内吞致近端肾小管上皮细胞损伤

目的:探究近端肾小管上皮细胞中肾损伤分子1(KIM-1)介导免疫球蛋白轻链(FLCs)内吞对肾小管损伤的影响及机制。方法:(1)选取4例多发性骨髓瘤肾损伤患者尿标本,采用离子交换层析法纯化FLCs;(2)体外实验构建纯化的FLCs诱导人肾脏近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤模型,继续给予FLCs刺激,并予KIM-1抑制剂TW-37干预;体内实验向小鼠腹腔注射FLCs,14 d后建立FLCs致小鼠肾小管损伤的动物模型,并予TW-37干预。Western Blot检测HK-2细胞和小鼠肾组织KIM-1、megalin、核因子E2相关因子2(Nrf2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β(TGF-β)等水平,ELISA法检测小鼠尿白蛋白/肌酐比值、尿液KIM-1的含量,天狼星红染观察小鼠肾间质纤维化程度等。结果:(1)体外实验中FLCs刺激HK-2细胞诱导KIM-1表达增加,并与FLCs存在共定位,TW-37处理后可减少HK-2细胞中FLCs内吞,减轻FLCs刺激所致的肾小管细胞溶酶体的核周聚集,降低氧化应激及纤维化指标表达。(2)动物模型结果显示,TW-37干预可缓解FLCs所致的肾小管损伤,包括尿KIM-1水平及肾组织KIM-1表达下降,肾组织氧化应激和纤维化指标表达下降,肾组织胶原沉积减轻。结论:KIM-1可介导肾近端小管细胞内吞FLCs,抑制KIM-1有助于缓解FLCs造成的肾损伤。