TXNDC5在胃癌细胞中相互作用蛋白分子的筛选

目的筛选并分析硫氧还蛋白5(TXNDC5)在胃癌细胞中的关键相互作用蛋白分子。方法以pcDNA3.1为基础构建pcDNA3.1-TXNDC5-FLAG真核表达载体,并以此载体瞬时转染人胃癌细胞系SGC7901,RT-PCR法及Western blotting法检测TXNDC5融合蛋白表达。采用串联亲和纯化技术收集胃癌细胞内TXNDC5相互作用蛋白分子进行电泳分离及ESI-Q-TOF串联质谱分析鉴定TXNDC5相互作用蛋白质。结果构建的pcDNA3.1-TXNDC5-FLAG真核表达载体经DNA序列测定完全正确,转染胃癌细胞后RT-PCR法及Western blotting法可检测到TXNDC5分子表达。经串联亲和纯化及蛋白质组学分析,通过NCBI蛋白质数据库检索比对,筛选出TXNDIP等16个蛋白分子。结论本研究通过串联亲和偶联蛋白质组学技术成功的筛选出胃癌细胞SGC7901中与TXNDC5相互作用的蛋白质,并进行了初步分析,提出了TXNDC5可能的分子作用机制,为进一步研究打下基础。

TXNDC5蛋白在胃癌细胞及组织中相互作用蛋白的免疫共沉淀验证

目的 我们前期通过串联亲和偶联蛋白质组学技术成功地筛选出胃癌细胞SGC7901中与TXNDC5相互作用的蛋白质,在这些蛋白质中除去功能意义较为明确的蛋白,TXNIP、PRDX2、PDCD4和ADIPOR1可能在肿瘤发生发展中具有一定作用,但其具体分子作用机制尚不清楚。本研究进一步验证在胃癌组织和细胞中TXNDC5蛋白与上述蛋白的关键相互作用。方法 以pcDNA3.1为基础构建pcDNA3.1-TXNDC5真核表达载体,并以此载体瞬时转染人胃癌SGC7901细胞,RT-PCR法及Western blotting法检测TXNDC5蛋白表达。采用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)法验证TXNDC5高表达细胞系中其与TXNIP、PRDX2、PDCD4、ADIPOR1的相互作用。取人胃腺癌新鲜手术标本提取总蛋白,采用Western blotting法检测TXNDC5蛋白表达,选取确认为TXNDC5高表达的胃癌组织总蛋白采用Co-IP验证TXNDC5与TXNIP、PRDX2、PDCD4、ADIPOR1的相互作用。结果 通过Co-IP法验证,TXNDC5高表达胃癌细胞系中,TXNDC5与TXNIP、PRDX2、PDCD4存在相互作用;TXNDC5高表达胃癌组织中,TXNDC5与TXNIP、PDCD4存在相互作用。结论 本研究通过Co-IP技术成功地验证了胃癌细胞和组织中TXNDC5与TXNIP、PDCD4存在相互作用,提示TXNDC5在胃癌中的促癌分子机制可能通过与TXNIP和PDCD4相互作用影响其相关信号通路有关。

TXNDC5研究的新进展

TXNDC5基因编码的蛋白质属于蛋白质二硫键异构酶家族，可催化二硫键的重排，并且作为分子伴侣减少异常蛋白质的合成。它具有抗氧化、抑制细胞凋亡、促进血管形成、参与细胞炎症、能量代谢等多种生物功能。研究表明，TXNDC5在宫颈癌、胃癌和结直肠癌等多种肿瘤中高表达，同时也与类风湿关节炎、糖尿病、肝脂肪变性、白癜风等疾病密切相关。本文主要就TXNDC5的生化作用、与疾病的关系及其作用机制的研究进展进行综述。