姜黄素通过抑制TXNIP/TRX-1/GPX4通路介导的铁死亡减轻脓毒症小鼠肺损伤

目的探究姜黄素(Cur)是否通过调控TXNIP/TRX-1/GPX4通路抑制铁死亡减轻脓毒症肺损伤。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为Sham组、脓毒症(盲肠结扎穿孔术,CLP)组、CLP+各浓度Cur(50、100和200 mg/kg)组、CLP+Cur(200 mg/kg)+TRX-1抑制剂PX-12(25 mg/kg)组,10只/组,检测各组小鼠肺组织炎症因子及铁死亡关键因子MDA、MPO、GSH水平。Beas-2B细胞分为Con组、脂多糖组(LPS,1μg/mL)、LPS+各浓度Cur(2.5、5、10μmol/L)及LPS+Cur(10μmol/L)+PX-12(5μmol/L)组,检测MDA和Fe^(2+)水平,DHE染色评估ROS变化。Western blotting检测肺组织和Beas-2B细胞TXNIP、TRX-1、GPX4和X-CT蛋白表达水平。结果与Sham组相比,CLP组小鼠肺损伤严重,IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA、MPO含量增加,GSH含量下降(P<0.01);与CON组相比,LPS组MDA、Fe^(2+)、ROS水平升高;CLP组肺组织和LPS组Beas-2B细胞TXNIP蛋白表达增加,TRX-1、GPX4及X-CT蛋白表达减低(P<0.01);与CLP组相比,CLP+Cur各浓度组肺损伤减轻,炎症因子和脂质过氧化因子含量降低,GSH水平升高;与LPS组相比,LPS+Cur各浓度组Fe^(2+)、MDA和ROS水平下降(P<0.05);TXNIP蛋白表达降低,TRX-1、GPX4及X-CT蛋白表达增加(P<0.01)。PX-12干预后,取消了Cur对脓毒症肺组织和Beas-2B细胞的保护作用(P<0.05)。结论姜黄素通过升高TRX-1、GPX4,降低TXNIP抑制铁死亡,减轻脓毒症肺损伤。

TXNIP/Trx-1/GPX4通路促进新生大鼠缺氧缺血后海马神经元铁死亡的作用机制

目的 观察新生大鼠缺氧缺血后海马神经细胞铁死亡的变化,并从TXNIP/Trx-1/GPX4信号通路探讨其机制。方法 将健康7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组(n=30)、缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)组(n=30)及siRNA (TXNIP siRNA)组(n=12)。采用经典Rice-Vannucci法建立新生大鼠HIBD模型。造模后6 h、24 h、72 h、7 d,Western blot法检测新生大鼠损伤侧海马组织铁死亡蛋白GPX4蛋白表达水平变化;造模后24 h,采用激光散斑成像结合苏木精-伊红染色法鉴定模型;采用NeuN/GPX4、GFAP/GPX4免疫荧光双标染色结合Western blot等方法检测各组新生大鼠损伤侧海马组织GPX4、TXNIP、Trx-1蛋白表达水平;检测新生大鼠血清铁和损伤侧海马组织铁含量的变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组新生大鼠TXNIP、Trx-1、GPX4 mRNA的表达水平。结果 造模后6 h、24 h、72 h、7 d,HIBD组GPX4蛋白表达水平低于假手术组(P<0.05)。造模后24 h,HIBD组损伤侧脑血流量低于假手术组(P<0.05),HIBD组损伤侧海马CA1区神经细胞排列疏松紊乱,形态不规则。HIBD组损伤侧海马CA1区TXNIP^(+)细胞数高于假手术组,Trx-1^(+)细胞数、NeuN^(+)GPX4^(+)/NeuN^(+)低于假手术组(P<0.05),海马CA1区几乎未见GFAP^(+)GPX4^(+)细胞。HIBD组和siRNA组血清铁、损伤侧海马组织铁含量高于假手术组,且siRNA组血清铁、损伤侧海马组织铁含量低于HIBD组(P<0.05)。HIBD组和siRNA组TXNIP mRNA及蛋白表达水平均高于假手术组,且siRNA组TXNIP mRNA及蛋白表达水平低于HIBD组(均P<0.05);HIBD组和siRNA组损伤侧海马组织Trx-1、GPX4 mRNA及蛋白表达水平均低于假手术组,且siRNA组损伤侧海马组织Trx-1、GPX4 mRNA及蛋白表达水平高于HIBD组(均P<0.05)。结论 新生大鼠缺氧缺血通过激活TXNIP/Trx-1/GPX4通路,导致新生大鼠海马神经元铁死亡,进而导致HIBD。

姜黄素通过调控Trx-1/TXNIP/NLRP3通路减轻对乙酰氨基酚诱导的大鼠急性肾损伤

目的探究姜黄素(curcumin,CUR)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的大鼠急性肾损伤的保护作用及机制。方法48只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、阳性药NAC组、CUR低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组。NAC及CUR灌胃给药10 d后,一次性灌胃给予2 g/kg APAP建立急性肾损伤模型,造模24 h后,取血并分离大鼠,计算肾指数;检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;HE染色评价大鼠肾病理变化;检测大鼠肾组织谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平;Western blot检测大鼠肾组织Trx-1、TXNIP、NLRP3炎症小体等蛋白的表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠肾指数显著增加(P<0.01),血清Cr、BUN水平显著升高(P<0.01),病理切片显示大鼠肾组织出现明显的损伤,大鼠肾组织中GSH、T-SOD、CAT的活性显著降低(P<0.01),MDA的含量显著升高(P<0.01),大鼠肾组织中Trx-1的表达明显下调(P<0.05),TXNIP、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1、mature IL-1β蛋白的表达明显上调(P<0.01)。与模型组相比,CUR中、高剂量组肾指数显著降低(P<0.01),病理损伤改善,血清Cr、BUN水平显著降低(P<0.01),肾组织中GSH、T-SOD、CAT活性显著升高,MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01),Trx-1的表达明显上调(P<0.05或P<0.01)、TXNIP、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1、mature IL-1β蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论姜黄素预防性给药通过调控Trx-1/TXNIP/NLRP3通路减轻APAP诱导的大鼠急性肾损伤。

4⁃辛基衣康酸通过Keap1/Nrf2/GPX4通路减少癫痫大鼠海马神经元铁死亡

目的:探讨4⁃辛基衣康酸(4⁃OI)对癫痫大鼠海马神经元铁死亡的影响。方法:雄性SD大鼠45只,随机分为生理盐水组、戊四氮组(PTZ)和4⁃辛基衣康酸和戊四氮联合治疗组(4⁃OI+PTZ)。观察记录各组大鼠癫痫发作程度行为学及脑电图变化,应用尼氏染色观察海马区神经元变化,膜片钳技术评估海马CA1区的神经元兴奋性,试剂盒测定海马区铁离子、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,采用免疫组化与Western Blot检测各组大鼠海马区神经元核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)、Klech样ECH关联蛋白1(Keap1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)的表达情况。结果:与生理盐水组比较,PTZ组癫痫样发作明显,神经元尼氏体的含量显著减少,神经元的兴奋性显著增加,海马区铁离子、MDA、PTGS2与Keap1的表达明显升高,GSH、Nrf2、GPX4的表达明显下降(P<0.05);与癫痫组相比,4⁃OI处理组癫痫发作等级降低,神经元尼氏体的含量显著增加,神经元的兴奋性显著下降,海马区铁离子、MDA、PTGS2与Keap1的表达明显下降,GSH、Nrf2与GPX4的表达明显升高(P<0.05)。结论:4⁃OI可以通过抑制癫痫模型大鼠海马组织中Keap1的活性,进而上调Nrf2和GPX4表达,抑制神经元铁死亡并缓解癫痫发作。

基于Nrf2/HO-1/GPX4信号通路探讨真武汤改善脾肾阳虚型糖尿病肾病小鼠的作用机制

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路探讨真武汤对脾肾阳虚型糖尿病肾病(DKD)小鼠肾脏氧化损伤的干预作用及机制。方法:将25只7周龄SPF级雄性db/m小鼠及95只7周龄SPF级雄性db/db小鼠适应性喂养1周。db/m小鼠作为空白组,其余小鼠进行运用灌服生大黄溶液和氢化可的松制备脾肾阳虚型DKD模型,成模后随机分为模型组、厄贝沙坦组(25 mg·kg^(-1))、真武汤高、中、低剂量(33.8、16.9、8.45 g·kg^(-1))组,每组15只,连续灌胃8周。观察小鼠生存状态和计算中医证候评分并测定脾肾阳虚相关、空腹血糖(FBG)及肾功能相关指标;苏木素-伊红(HE)染色观察各组肾脏组织病理学改变;生化试剂盒法测定肾组织中氧化应激相关指标;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肾组织中Nrf2、HO-1、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、GPX4 m RNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠中医证候积分明显升高(P<0.05),雌二醇(E2)含量明显升高(P<0.05),睾酮(T)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)含量明显降低(P<0.05);FBG明显升高(P<0.05),肾功能明显下降(P<0.05);肾脏病理显示肾小球肥大,肾小球系膜和基底增厚明显,肾组织中过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平均明显降低(P<0.05),丙二醛(MDA)的含量明显升高(P<0.05),肾组织中Nrf2、HO-1、GCLC、GPX4 m RNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05);与模型组比较,真武汤高、中剂量组中医证候积分明显降低、E2含量明显降低(P<0.05),T、T3、T4含量明显升高(P<0.05);肾功能明显改善(P<0.05),肾脏病理明显改善,真武汤高、中剂量组小鼠肾组织中CAT、T-AOC、GSH水平均明显升高(P<0.05),MDA的含量明显下降(P<0.05),各给药组小鼠肾组织中Nrf2、HO-1、GCLC、GPX4 m RNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:真武汤改善脾肾阳虚型db/db小鼠一般状态、肾功能,降低氧化损伤和减轻肾脏病理改变,其作用机制可能与调节Nrf2/HO-1/GPX4通路有关。

基于Nrf2/HO-1/GPX4通路探讨大戟脂总三萜抗类风湿性关节炎的作用

旨在探讨大戟脂总三萜对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的防治作用及其作用机制。采用完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,FCA)诱导大鼠关节炎模型,将雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为对照组,模型组,雷公藤多苷(7.5 mg·kg^(-1))组,大戟脂总三萜低、中、高剂量组(32、64、128 mg·kg^(-1));除对照组大鼠外,在大鼠右后足趾注射0.2 mL FCA。给药组灌胃给予药物,对照组和模型组给予相应体积0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液,每日1次,期间测量大鼠后足肿胀度并进行关节炎评分至第30天。给药结束后,采用HE染色观察大鼠关节组织病理学改变。采用生化比色法检测关节组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)因子和Fe^(2+)的含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。采用RT-PCR法检测关节组织中核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(gluta-thione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)mRNA的含量,Western blot法检测大鼠关节组织中Nrf2、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1]、超氧化物歧化酶(SOD2)、GPX4、ACSL4蛋白的表达。结果显示,与模型组比较,经雷公藤多苷(7.5 mg·kg^(-1))和大戟脂总三萜(32、64、128 mg·kg^(-1))治疗后,大鼠双侧后肢肿胀程度明显减轻,关节炎评分显著下降,关节组织病变程度减轻;关节组织中MDA和Fe^(2+)含量降低,GSH含量和SOD活性增加;氧化因子Nrf2、GPX4的蛋白表达和mRNA水平显著增加,ACSL4的蛋白表达和mRNA相对含量显著降低;Nrf2/HO-1/GPX4通路的Keap1、NQO1、HO-1、SOD2蛋白表达水平也显著升高。综上所述,大戟脂总三萜可通过抑制脂质过氧化从而抑制细胞异常铁死亡发挥抗RA作用,作用机制可能与其对Nrf2/HO-1/GPX4信号通路的调控相关。

4-辛基衣康酸对大鼠短暂性脑缺血再灌注模型的保护作用及机制探究

目的探究4-辛基衣康酸(4-OI)对短暂性脑缺血再灌注模型大鼠的保护作用及机制。方法选取36只清洁级SD级大鼠,采用随机数字表法分为对照组、模型组和治疗组,每组12只。对照组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水,治疗组大鼠腹腔注射4-OI 100 mg/kg。采用“线栓法”制作大鼠中动脉栓塞模型;对照组行假手术,缺血1 h后恢复血流。手术24 h后对3组大鼠神经功能损伤程度及脑组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量进行评估。比较3组大鼠梗死区脑组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠神经功能评分和脑梗死面积百分比增高(P<0.01)。与模型组比较,治疗组大鼠神经功能评分减低,脑梗死面积百分比减少,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,模型组MDA含量显著升高,SOD含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,治疗组MDA含量减低,SOD含量增高,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,模型组IL-1β含量、TXNIP、NLRP3、Nrf2和HO-1蛋白表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,治疗组IL-1β含量、TXNIP和NLRP3蛋白表达量均降低,Nrf2和HO-1蛋白表达量均增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论4-OI激活Nrf2/HO-1抗氧化应激通路,抑制TXNIP/NLRP3炎症通路,从而在脑缺血再灌注损伤方面起保护作用。

淫羊藿苷通过Nrf2/HO-1/GPX4信号通路调节破骨细胞铁代谢的机制研究

目的:观察淫羊藿苷对成熟破骨细胞铁代谢的影响,探讨其可能作用机制。方法:建立破骨细胞模型,随机分为对照组及低浓度淫羊藿苷组(0.1μmol/L)、中浓度淫羊藿苷组(1μmol/L)、高浓度淫羊藿苷组(10μmol/L),分组干预后,采用CCK-8测定各组细胞的增殖能力后选择合适的药物浓度进行后续的实验,加入合适浓度淫羊藿苷-NAC(氧化剂)组,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)特异性染色测定破骨细胞分化水平,采用ROS试剂盒及亚铁离子荧光探针检测破骨细胞中ROS、亚铁离子水平,采用谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒检测破骨细胞内GSH、GSH-PX水平,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法检测各组破骨细胞Nrf2/HO-1/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:淫羊藿苷可抑制破骨细胞形成,且抑制作用呈剂量依赖性,高浓度淫羊藿苷对破骨细胞活性抑制作用最强(P<0.05);与对照组比较,淫羊藿苷可促进破骨细胞内ROS含量、亚铁离子含量升高,GSH及GSH-Px含量下降;淫羊藿苷可上调氧化应激相关Nrf2/HO-1信号传导通路,促进Nrf2、HO-1基因表达,抑制破骨细胞铁代谢相关的GPX4基因及转录蛋白表达。结论:淫羊藿苷可能通过上调Nrf2/HO-1信号传导通路,促进破骨细胞氧化应激改变,增加破骨细胞内ROS水平,提高破骨细胞内亚铁离子水平,下调铁代谢相关的GPX4基因表达,进而调控破骨细胞内铁代谢水平,增加其氧化应激损伤,从而抑制破骨细胞形成和骨吸收。

木犀草素通过Nrf2/HO-1通路诱导耐多柔比星K562/ADR细胞发生铁死亡

目的:研究木犀草素(luteolin,Lut)对人耐多柔比星(adriamycin,ADR)慢性髓系白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)细胞K562/ADR增殖及铁死亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法:用不同浓度的ADR处理K562细胞和K562/ADR细胞,采用CCK-8法检测K562细胞和K562/ADR细胞对ADR的敏感性;采用CCK-8法检测不同浓度Lut对K562/ADR细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC_(50))筛选出后续实验的药物浓度。不同浓度的Lut处理后,在倒置光学显微镜下观察细胞形态的变化;CCK-8法检测Lut对ADR的增敏作用,FCM法检测Lut对K562/ADR细胞凋亡的影响;随后再用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(reactive oxygen specie,ROS)的含量,谷胱甘肽(glutathione,GSH)试剂盒检测各组细胞内GSH的含量;Fe^(2+)比色法检测各组细胞内Fe^(2+)的含量,蛋白质印迹法检测各组细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白的表达量。CCK-8法检测铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)干预后Lut对K562/ADR细胞增殖、ROS含量、GSH含量、Fe^(2+)含量及GPX4表达量的影响。结果:与Lut(0μmol/L)组相比,Lut可显著抑制K562/ADR细胞增殖(P<0.001),提高K562/ADR细胞对ADR的敏感性(P<0.05);Lut可明显提高K562/ADR细胞的凋亡率(P<0.001)以及细胞中ROS的含量(P<0.05),同时降低K562/ADR细胞内GSH并提高Fe^(2+)的含量(P<0.001和P<0.01);与Lut(0μmol/L)组相比,细胞内GPX4、Nrf2和HO-1蛋白的表达量随Lut浓度的升高而降低(P均<0.05);与Lut单药组相比,Fer-1干预后可部分逆转Lut对K562/ADR细胞增殖的抑制作用(P<0.05),K562/ADR细胞内ROS的含量降低(P<0.001),GSH的水平升高(P<0.001),Fe^(2+)的含量降低(P<0.001),GPX4蛋白的表达水平显著升高(P<0.01)。结论:Lut可通过铁死亡途径抑制K562/ADR细胞增殖,提高对ADR的敏感性,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路有关,这将为Lut通过铁死亡方式治疗白血病提供实验依据。

白藜芦醇对大鼠脓毒症心肌病铁死亡的影响及机制

目的探讨白藜芦醇对大鼠脓毒症心肌病铁死亡的影响及作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症心肌病模型,将48只6~8周龄健康SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、白藜芦醇组、Ex527(SIRT1抑制剂)组。在不同组别中,通过心肌苏木精-伊红(HE)染色、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)观察心肌损伤程度,透射电镜观察心脏线粒体变化,试剂盒及免疫荧光检测铁离子浓度、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醇(MDA)、活性氧自由基(ROS)铁死亡相关信号表达,Western blotting方法检测心肌SIRT1、GPX4、FTH-1蛋白表达水平。结果与模型对照组比较,白藜芦醇组可明显改善心肌损伤程度,减轻线粒体铁死亡改变,显著抑制铁死亡相关信号表达(P<0.05),增加SIRT1、GPX4、FTH-1蛋白表达水平(P<0.05),而使用Ex527预处理大鼠可逆转上述改变。结论白藜芦醇通过SIRT1/GPX4信号途径抑制心肌铁死亡,改善脓毒症心肌病,其机制与减少ROS产生、减轻线粒体损伤密切相关。

基于网络药理学和动物实验探讨补肾启智方对血管性痴呆铁死亡的作用机制

目的:采用网络药理学方法和分子对接技术并结合体内实验,分析并验证补肾启智方调控海马神经元铁死亡改善血管性痴呆(vascular dementia,VD)认知功能的作用机制。方法:在TCMSP数据库、BATMAN-TCM数据库、ETCM数据库筛选补肾启智方的活性成分及其作用靶点;在GeneCards数据库、OMIM数据库、DisGeNET数据库筛选血管性痴呆的潜在靶点;在FerrDB数据库筛选铁死亡的相关靶点,以上所有靶点均经Uniprot数据库规范,并在微生信-免费在线绘制韦恩图——Venn Diagrams网站获得三者的交集靶点。采用Cytoscape 3.9.1软件绘制“补肾启智方药物-活性成分-潜在靶点”网络、“补肾启智方-血管性痴呆-铁死亡靶点”的蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并进行拓扑学分析以获得核心成分与核心靶点;在DAVID数据库进行交集靶点的基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析。采用AutoDock 4软件进行分子对接,并利用PyMol 2.5软件对分子对接结果进行可视化分析。通过动物实验验证关键靶点及信号通路。将32只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾启智方高剂量组(14.4 g·kg^(-1))、补肾启智方低剂量组(3.6 g·kg^(-1)),每组8只。除假手术组外,其余大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎(2-vessel occlusion,2-VO)法建立血管性痴呆模型。采用Morris水迷宫实验评估大鼠的空间学习与记忆能力;Western blot法检测大鼠海马组织中缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、细胞溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的蛋白表达;生化法检测大鼠海马组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平。结果:筛选得到补肾启智方调控海马神经元铁死亡治疗VD的活性成分40种,有效靶点30个,核心成分是槲皮素、茉莉酮、马兜铃酮,核心靶点是肿瘤蛋白P53(tumor protein P53,TP53)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,MTOR)、HIF-1α;GO功能富集分析结果显示,补肾启智方可能通过改善细胞对过氧化氢、缺氧、氧化应激的反应及促进血管生成等方面治疗VD,KEGG通路富集分析表明,其可能通过调控缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)信号通路、细胞衰老、活性氧、叉头盒蛋白O(forkhead box protein O,FoxO)信号通路、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路等治疗VD。经补肾启智方干预后,VD大鼠的空间学习与记忆能力得到改善,海马组织MDA表达降低(P<0.01)、GSH水平升高(P<0.01),HIF-1α与铁死亡核心调控蛋白SLC7A11和GPX4蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。结论:补肾启智方可通过多成分、多靶点改善VD认知功能,其关键机制可能与激活HIF-1α/SLC7A11/GPX4信号通路、抑制海马神经元铁死亡相关。