小麦氮素利用效率基因TaARE1-A等位变异与产量相关性状之间的关系分析

以黄淮海麦区261个小麦品种为材料,分析TaARE1-A基因等位变异与小麦产量相关性状之间的关系,以期获得对提高氮素利用效率、增加小麦产量有重要作用的优异等位变异类型,为小麦分子标记辅助育种提供新的基因资源。结果表明,在67个地方品种中,59个品种为TaARE1-A-a基因型,其余8个品种为TaARE1-A-b基因型;在194个现代品种中,184个品种为TaARE1-A-a基因型,其余10个品种为TaARE1-A-b基因型。在261个小麦品种中,基因型为TaARE1-A-a的小麦品种的千粒质量、粒长、籽粒周长均显著高于基因型为TaARE1-A-b的小麦品种,穗长、每穗小穗数、穗粒数、粒宽、粒长/粒宽在2种基因型中均无显著差异。综上,TaARE1-A-a基因型可增加小麦粒长、籽粒周长和千粒质量,是一种优良的基因型。

小麦氮利用效率相关基因TaARE1的生物信息学分析及等位变异

为进一步解析小麦氮素利用效率基因TaARE1的生物学功能,以14个小麦品种为试验材料,通过同源克隆、生物信息学分析以及PCR扩增、测序等方法分析该基因的序列特征、基因启动子区域的顺式作用元件以及该基因在13个小麦品种中的多态性情况。结果表明,本研究从普通小麦中克隆了3个同源基因TaARE1-A、TaARE1-B和TaARE1-D。这3个基因均包含7个外显子和6个内含子,CDS全长均为1 266 bp,编码421个氨基酸;TaARE1蛋白分子量为48.8 ku,理论等电点pI为5.02;它具跨膜结构,无信号肽,为亲水性蛋白;其蛋白二级结构由4种形式构成,包括α-螺旋(52.73%)、延伸链(17.10%)、β转角(4.28%)、无规则卷曲(25.89%)。TaARE1的启动子区富含3-AF1 binding site、LAMP-element、GATA-motif等8种与光响应有关的顺式作用元件。通过对小麦TaARE1基因的多态性筛选,分别在其启动子上游-261、-421、-819、-887、-969、-1 530 bp位置发现了6个SNP,这些位点可能与小麦产量相关联。本研究可为揭示与TaARE1功能有关的调控机制提供有用的信息,并为进一步开发与氮素利用效率有关的功能标记以及分子标记辅助育种奠定基础。

墨兰CsAP1-A基因克隆及表达分析

【目的】AP1基因在植物的花器官发育和开花调控中发挥重要作用,对墨兰AP1基因进行克隆与表达分析可为研究其在墨兰花发育和开花调控中的作用提供前期基础。【方法】以墨兰品种‘小香’为材料,克隆到1个AP1基因,命名为CsAP1-A。通过生物信息学分析其基因结构、蛋白结构域和进化关系,利用RTqPCR方法分别检测CsAP1-A在墨兰不同器官、不同花发育阶段和不同花组织部位的表达情况;通过转录组测序分析CsAP1-A在5个不同花型墨兰品种花组织部位的表达情况;通过蛋白互作预测软件分析CsAP1-A与其他蛋白的互作关系。【结果】CsAP1-A基因编码区为744 bp,编码248个氨基酸,含有高度保守的MADS-box和K-box结构域,符合MADS-box转录因子家族特征。CsAP1-A与其他兰科植物AP1蛋白相似性较高,其中与春兰AP1/FUL3(APY18447.1)和蕙兰MADS1(AGE15496.1)的同源性最高。RT-qPCR分析结果表明,CsAP1-A在墨兰不同器官中均有表达,在花中表达量最高,且集中在花芽分化初期(S1)高表达。在不同花型的墨兰品种中,CsAP1-A在WT(普通型)、MPV(重瓣花型)、LaPV(花瓣唇瓣化花型)和NLV(唇瓣萼片化花型)4种花型的合蕊柱中表达量均最高,而在萼片中表达量最低;在合蕊柱异常发育的MPV中,CsAP1-A在合蕊柱的表达量显著提高,而在花瓣蕊柱化的梅瓣花型(GPV)中整体表达量最高,且表达区域从合蕊柱扩展到花瓣。蛋白互作预测CsAP1-A蛋白可与MADS1、MADS6、MADS47、MADS8等10个蛋白存在互作关系。【结论】墨兰CsAP1-A的基因结构、进化关系、时空表达情况和蛋白互作预测可为墨兰花发育的研究提供理论依据,对进一步揭示CsAP1-A基因在墨兰成花过程中的作用奠定基础。

LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

LncRNA FOXD3-AS1靶向miR-127-3p对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)叉头盒转录基因D3反义RNA1(FOXD3-AS1)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用0.001 mol/L的AngⅡ处理人主动脉VSMCs。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FOXD3-AS1和miR-127-3p的表达水平。CCK-8、流式细胞术、Transwell、Western印迹检测细胞活力、凋亡、迁移、侵袭及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证FOXD3-AS1和miR-127-3p的靶向调控关系。结果AngⅡ诱导后VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、FOXD3-AS1、p-PI3K和p-AKT表达显著升高,凋亡率、miR-127-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制FOXD3-AS1表达或过表达miR-127-3p后,AngⅡ处理的VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、p-PI3K和p-AKT表达显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。FOXD3-AS1靶向负性调控miR-127-3p表达。抑制FOXD3-AS1能够逆转抑制miR-127-3p对AngⅡ处理的VSMCs细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p-PI3K和p-AKT表达的影响(P<0.05)。结论抑制FOXD3-AS1能够降低AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与上调miR-127-3p和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

青海土族人群HLA-A、B、DRB1基因多态性分析

目的:分析青海土族人群人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)A、B、DRB1的基因多态性特点。方法:应用聚合酶链反应-直接测序分型(Polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)法对土族人群中47名健康无血缘关系的个体进行HLA-A、B、DRB1基因座高分辨分型。并将青海土族人群的HLA-DRB1基因与国内其它少数民族人群进行比较。结果:检出HLA-A、B、DRB1的基因型数和等位基因数分别为34、41、42和17、28、30。这3个基因座分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。且HLA-DRB1基因座等位基因频率分布与蒙古族有相似之处,表现在基因频率较高的DRB1*04,DRB1*07,DRB1*09,DRB1*12等位基因。结论:青海土族人群具有独特的HLA-A、B、DRB1基因频率分布特征,且青海土族HLA-DRB1等位基因频率分布与蒙古族有相似之处。

延伸因子-1α-A和β-肌动蛋白启动子在青鳉转基因胚胎中的表达(简报)

转基因技术是二十世纪八十年代初发展起来的一项生物领域高新技术.近年来,外源基因经显微注射导人哺乳类、两栖类、昆虫类以及鱼类的受精卵或胚胎,从而使人们对在整个动物的系统发育期间外源基因表达的研究更加深入.

RASSF1-A基因和RASSF1-C基因在胃癌组织及细胞中的表达

目的探讨RASSF1-A基因和RASSF1-C基因在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法采用http://www.ncbi.nl m.nih.gov/及DNAstar软件对80例胃癌(胃癌组)及相对应的癌旁组织(对照组)标本RASSF1-A基因和RASSF1-C基因进行生物信息学分析。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测2组组织及胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中RASSF1-A mRNA、RASSF1-C mRNA相对表达量。结果经RT-PCR扩增后,RASSF1-C mRNA在肿瘤细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中的相对表达量分别为0.62±0.07、0.66±0.08RASSF1-A mRNA在肿瘤细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中的相对表达量分别为0.23±0.10、0.58±0.07,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF1-A mRNA在对照组组织中相对表达量为0.81±0.07,显著高于胃癌组0.31±0.03,差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF1-C mRNA在胃癌组组织中相对表达量为0.87±0.04,对照组组织中相对表达量为0.84±0.03,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RASSF1-A、RASSF1-C基因在胃癌组织中的表达下调。

山西汉族人类白细胞抗原-A B DRB1基因多态性与白血病关联性的研究

本研究采用流式聚合酶链反应-反向序列特异性寡核苷酸探针（PCR-RSSOP，简称流式反向SSO）的方法，对山西省汉族白血病患者的人类白细胞抗原（HLA）-A、B、DRB1 3个等位基因进行了基因分型，探讨这些基因的多态性与白血病的关系。

柔嫩艾美耳球虫杨凌株RB1-a基因的克隆表达及免疫保护性研究

【目的】对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)杨凌株RB1-a基因进行克隆与表达,检测表达产物的免疫保护性,为鸡球虫基因工程疫苗的研制奠定基础。【方法】以纯化的E.tenella杨凌株孢子化卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出其RB1-a基因,测序后进行序列分析。然后将RB1-a基因N端不含信号肽序列克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a-RB1-a重组质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白,将重组蛋白纯化后免疫雏鸡,对其免疫效果进行评价。【结果】柔嫩艾美耳球虫杨凌株RB1-a基因的开放阅读框(ORF)包含618个碱基,编码205个氨基酸,与GenBank报道的柔嫩艾美耳球虫PAPa46株ORF序列相似性为99.84%,两者推导的氨基酸序列相同。SDS-PAGE分析表明,重组质粒表达分子质量为42ku的融合蛋白。免疫效果测定结果显示,RB1-a免疫组和RB1-a+佐剂免疫组的相对增重率分别为64.2%和69.4%,卵囊减少率分别达37.22%和30.56%,抗球虫指数分别为146.2和150.4。【结论】RB1-a基因具有很强的保守性,种间差异不大;RB1-a重组蛋白具有一定的免疫保护效果。

NM23-H1和NM23-H2可切割血小板起源的生长因子-A基因启动子中的核酸酶敏感成分

PDGF A基因的转录由几个GC丰富的、高度单链的、非B型结构的增强子和沉寂成分所调节 其中一个沉寂子位于PDGF A启动子远上游 5’端 (- 14 18～ - 1388) ,命名为 5’SHS .重组人NM 2 3 H1和NM 2 3 H2可分别在 3’和 5’端切割单链、双链形式的 5’SHS的两条链 ,表明NM 2 3 H1和NM 2 3 H2在不同位点 ,以不同机制切割 5’SHS .NM 2 3 H1和NM 2 3 H2也可分别在 3’和 5’端切割双链形式的PDGF A启动子中的NHE成分 (- 82～ - 5 0 ) ;此外 ,NM 2 3 H1也可在 3’端切割PDGF ANHE成分的无意义链 (Py链 )

不含 SBTI-A_2的基因导入我国大豆的遗传表达

大豆 Glycine max(L.)Merrill 种子中的主要营养抑制因子是 Kunitz 胰蛋白酶抑制剂(SBTI—A_2)。经利用标准 SBTI 比较谱带的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析方法,证实了我国栽培大豆中豆19、临沂81-551、通县元豆、中作84-C_(42)和中作84-C_(02)均属 Ti^aTi^a 型。并利用上述5个黄淮海夏大豆品种或品系与美国不含 SBTI-A_2(titi)品系 L_(81-4590)和 L_(83-4387)杂交,在7个组合的 F_2代中得到了 titi 型。其表型比例为3∶1,符合孟德尔单基因遗传规律。进一步的研究正在进行中。

MAGE-A1和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取2006年1月至2010年1月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78例脑胶质瘤组织标本和15例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR法检测胶质瘤组织中MAGE-A1和MAGE-A3的表达,分析其表达水平与患者预后的关系;用MSP-PCR术检测MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的甲基化状态,分析两者表达与甲基化之间的关系;用RT-PCR法检测胶质瘤U251和U87细胞中MAGE-A1和MAGE-A3表达以及经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)联合作用后两者的表达水平。结果:78例胶质瘤组织中MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA阳性表达率分别为65.34%和38.46%,而在15例正常脑组织中未发现2种m RNA表达。MAGE-A1阳性组患者5年生存率较阴性组低(P<0.05)。MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性(均P<0.01)。未经5-Aza-CdR和TSA处理的U87细胞未见MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA的表达,U251细胞则有少量表达。单独给予TSA不能引起MAGE-A1和MAGE-A3基因的表达激活,单独给予5-Aza-CdR或与TSA合用可以引起该2个基因的表达激活,且两者合用的作用优于单独给药。结论:脑胶质瘤组织中有不同程度的MAGE-A1和MAGE-A3基因表达,MAGE-A1基因表达与患者的预后不良相关。DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是MAGE-A1和MAGE-A3基因表达激活的重要机制。

胃癌中CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3的去甲基化

目的:探讨肿瘤相关抗原基因(cancer associated antigen gene,CAGE)、黑色素瘤抗原基因-A1(melanoma antigen gene A1,MAGE-A1)、黑色素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene A3,MAGE-A3)启动子区去甲基化与胃癌临床特点的关系和意义.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)的方法检测30例胃癌和25例正常胃黏膜标本中CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的去甲基化状态,并分析其与胃癌临床病例参数间的关系.结果:胃癌组CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子去甲基化阳性率(80.0%、60.0%、46.7%)均明显高于正常胃黏膜组(4.0%、0.0%、8.0%,P<0.05).胃癌组中,CAGE基因启动子区去甲基化与淋巴转移和临床分期有关(P=0.016;P=0.026);MAGE-A1基因启动子区去甲基化与组织分化程度和临床分期有关(P=0.042;P=0.002);MAGE-A3基因启动子区去甲基化与淋巴转移和组织分化程度有关(P=0.034;P=0.026).结论:CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区去甲基化的检测可能有助于判断胃癌的组织分化程度、淋巴结转移和临床分期,有可能成为胃癌治疗及判断预后的分子标志物.

OIP5-AS1和miR-410在胶质瘤中的表达及调控机制

目的对比OIP5-AS1和miR-410在胶质瘤与正常脑组织中表达的差异并探讨OIP5-AS1与miR-410的关系及作用机制。方法收集胶质瘤患者标本65例,脑组织标本10例作为对照组。通过qRT-PCR方法检测2组标本中OIP5-AS1和miR-410的表达情况并进行比较。通过Starbase 2.0预测:OIP5-AS1与miR-410的关系。通过双荧光素酶报告基因检测miR-410和OIP5-AS1的靶向关系。结果与正常组织比较,胶质瘤组织中OIP5-AS1的表达水平明显升高,miR-410的表达明显降低(P<0.05)。OIP5-AS1在高级别胶质瘤组的表达显著高于低级别组,miR-410的表达趋势相反。相关性分析结果示,OIP5-AS1表达与miR-410表达呈负相关。Starbase 2.0预测:OIP5-AS1是调节miR-410的分子海绵。双荧光素酶活性测定:miR-410 mimics显著下调OIP5-AS1-wt的荧光素酶活性(P<0.05)。结论胶质瘤组织中OIP5-AS1的表达水平明显升高,miR-410的表达明显降低,且OIP5-AS1和miR-410的表达与胶质瘤的病理分级相关。OIP5-AS1表达与miR-410表达呈负相关,两者存在靶向调节关系。

宫颈鳞状细胞癌组织LncRNA DCST1-AS1、LncRNA MCM3AP-AS1表达与增殖侵袭基因和预后的关系

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌(CSCC)组织长链非编码核糖核酸(LncRNA)DC-STAMP结构域1-反义1(DCST1-AS1)、LncRNA MCM3AP反义RNA 1(MCM3AP-AS1)表达与增殖侵袭基因和预后的关系。方法:选择2018年1月至2020年1月苏州大学第二附属医院收治的124例CSCC患者,取CSCC组织及其癌旁正常组织,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA DCST1-AS1、LncRNA MCM3AP-AS1以及增殖基因(YAP1、Piwil2、EZH2、PKCε)和侵袭基因(Rab11、TUG1、Gli1、FoxM1)m RNA表达。患者出院后随访3年。Pearson相关性分析Lnc RNA DCST1-AS1、Lnc RNA MCM3AP-AS1表达与增殖基因、侵袭基因的相关性。分析Lnc RNA DCST1-AS1、Lnc RNA MCM3AP-AS1表达与临床病理特征的关系。绘制Kaplan-Meier曲线分析预后情况,多因素COX回归分析影响CSCC患者预后的因素。结果:CSCC癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达高于癌旁组织(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1表达低于癌旁组织(P<0.05)。YAP1、Piwil2、EZH2、PKCε、Rab11、TUG1、Gli1、FoxM1 m RNA水平与CSCC癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达呈正相关(P<0.05),与Lnc RNA MCM3AP-AS1呈负相关(P<0.05)。低中度分化、FIGO分期Ⅲa期、盆腔淋巴结转移CSCC患者癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达高于高度分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无盆腔淋巴结转移宫颈癌患者(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1表达低于高度分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无盆腔淋巴结转移宫颈癌患者(P<0.05)。Lnc RNA DCST1-AS1高表达、Lnc RNA MCM3AP-AS1低表达CSCC患者3年总生存率低于Lnc RNA DCST1-AS1低表达、Lnc RNA MCM3AP-AS1高表达患者(P<0.05)。多因素COX回归分析显示盆腔淋巴结转移、Lnc RNA DCST1-AS1高表达是CSCC患者预后不良的危险因素(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1高表达是保护因素(P<0.05)。结论:CSCC组织中LncRNA DCST1-AS1表达上调,LncRNA MCM3AP-AS1表达下调,且与CSCC增殖侵袭和预后不良有关。

NY-ESO-1和MAGE-A3在进展期胃印戒细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨纽约食管鳞状上皮癌抗原-1(NY-ESO-1)和黑色素瘤抗原基因-A3(MAGE-A3)在进展期胃印戒细胞癌组织中的表达和临床意义。方法收集2004年4月至2014年7月进展期胃印戒细胞癌组织81例,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中NY-ESO-1和MAGE-A3的蛋白表达水平。统计分析两者表达与临床病理特征和预后的关系。结果81例胃印戒细胞癌组织中NY-ESO-1的阳性表达率为9.9%(8/81),MAGE-A3的阳性表达率为28.4%(23/81)。NY-ESO-1和MAGE-A3的表达呈正相关(r=0.25,P=0.024)。NY-ESO-1表达与TNM分期和神经侵犯有关(P<0.05),与年龄、性别、病理类型、Lauren分型、肿瘤位置和脉管侵犯无关(P>0.05)。MAGE-A3表达与年龄有关(P=0.020),而与性别、TNM分期、病理类型、Lauren分型、肿瘤位置、神经侵犯和脉管侵犯无关(P>0.05)。NY-ESO-1阳性表达患者的中位总生存时间(OS)为13.0个月(95%CI:0~40.7个月),阴性表达者为20.5个月(95%CI:16.6~24.4个月),差异无统计学意义(P=0.605)。MAGE-A3阳性表达患者的中位OS为20.5个月(95%CI:8.0~33.0个月),阴性表达者为20.0个月(95%CI:15.1~24.9个月),差异无统计学意义(P=0.922)。结论NY-ESO-1和MAGE-A3在进展期胃印戒细胞癌组织中均有一定程度的表达,两者作为靶点的免疫治疗在胃印戒细胞癌中的潜在价值值得进一步探索。

莪术醇下调FoxD2-AS1逆转胶质瘤细胞替莫唑胺化疗耐药的作用研究

[目的]初步明确长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)FoxD2-AS1与胶质瘤替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)耐药的关系,并探索莪术醇逆转胶质瘤替莫唑胺耐药与FoxD2-AS1基因表达的相关性。[方法]以生物信息学分析胶质瘤lncRNA表达谱;以胶质瘤A172、U251细胞系为研究对象,采用药物浓度递增法建立耐药细胞系A172/TMZ、U251/TMZ;以流式细胞术检测干扰FoxD2-AS1对耐药细胞凋亡的影响;莪术醇以不同浓度和时间梯度处理耐药细胞后,以Hoechst染色观察细胞形态变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测不同浓度莪术醇处理后耐药细胞中FoxD2-AS1的表达水平。[结果]lncRNA FoxD2-AS1在胶质瘤患者瘤体组织中高表达,其高表达与患者总生存率呈负相关;敲除FoxD2-AS1可显著增加耐药细胞对TMZ的敏感性并促进细胞凋亡,诱导细胞周期发生S和G2/M期阻滞;莪术醇和TMZ联用显著增加耐药细胞凋亡的典型变化。RT-qPCR结果显示,莪术醇处理后耐药细胞内FoxD2-AS1的含量明显下降,且具有浓度和时间依赖性。[结论]敲除FoxD2-AS1基因可以逆转胶质瘤细胞TMZ耐药。莪术醇可抑制胶质瘤耐药细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,其作用机制与下调FoxD2-AS1基因表达有关。

结直肠癌组织中lncRNA FOXC2-AS1与EZH2的表达及临床意义

目的探讨结直肠癌(CRC)组织中长链非编码RNA(lncRNA)RNA FOXC2-AS1、Zeste基因增强子同源物2(EZH2)表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测86例CRC癌组织和癌旁组织中lncRNA FOXC2-AS1、EZH2的表达。采用免疫组化法检测癌组织和癌旁组织中EZH2的蛋白表达。采用Pearson相关分析lncRNA FOXC2-AS1与EZH2表达的相关性。统计学分析癌组织中lncRNA FOXC2-AS1、EZH2的表达与临床病理特征之间的关系。Kaplan-Meier生存曲线分析不同lncRNA FOXC2-AS1、EZH2表达水平患者的5年总体生存率的差异。结果与癌旁组织比较,癌组织中lncRNA FOXC2-AS1及EZH2 mRNA表达水平升高(P<0.05),EZH2蛋白表达阳性率较高(P<0.05)。癌组织中lncRNA FOXC2-AS1与EZH2 mRNA表达水平呈正相关(r=0.623,P<0.05)。癌组织中lncRNA FOXC2-AS1及EZH2表达与肿瘤分期有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、肿瘤分化程度及是否伴淋巴结转移无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示lncRNA FOXC2-AS1及EZH2高表达的患者5年总体生存率低于lncRNA FOXC2-AS1及EZH2低表达患者(P<0.05)。结论CRC癌组织中lncRNA FOXC2-AS1及EZH2表达水平升高,lncRNA FOXC2-AS1及EZH2的高表达与肿瘤分期有关,二者有望成为新的评价肿瘤预后的分子标志物。

IFN-α2a-GFE-1融合基因的构建及表达

目的 构建IFN -α 2a -GFE - 1融合基因载体 ,检测其在转染细胞的表达 ,为肺癌基因导向药物治疗积累实验资料。方法 应用聚合酶链式反应技术 (PCR)对干扰素 (IFN) -α 2a羧基端的酶切位点进行改造 ,并人工合成肺特异性结合多肽CGFECVRQCPERC(GFE - 1)的寡核苷酸片段 ,二者连接后克隆入pGEM - 3zf质粒 ,连接产物转化感受态DH5α细胞 ,挑选阳性克隆经EcoRⅠ +PstⅠ酶切鉴定后测序 ,将测序正确的目的基因从测序载体相应酶切位点消化回收并纯化后 ,与上述酶处理过的PBV2 2 0质粒连接 ,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,经筛选后随机挑选阳性菌落 ,提取质粒酶切鉴定。结果 序列分析表明合成片段成功的插入IFN -α 2a羧基端 ,大小、位置、方向均正确无误 ;融合基因克隆入PBV 2 2 0表达载体在大肠杆菌中获得有效表达。结论 IFN -α 2a -GFE - 1融合基因载体的构建及表达 。