miR-20b通过抑制JAK/STAT3信号通路逆转结肠癌细胞5-FU耐药性的研究

背景结肠癌是严重威胁人类生命健康的常见病.近年来,结肠癌的发病率呈明显上升趋势,其复发转移及化疗耐药则是影响结直肠癌患者长期生存的首要障碍,越来越多的研究提示表明miRNA参与了结肠癌的发病与耐药.目的探讨miR-20b在结肠癌细胞耐药中的作用,并对其机制进行了研究.方法通过细胞活性实验确认了普通结肠癌细胞(SW480)与耐药细胞(SW480/5-FU)对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的耐药性.通过逆转录实验,检测SW480/5-FU细胞中mi R-20b的表达水平.根据结果对SW480/5-FU细胞转染转入外源性miR-20b,观察其耐药性,转染和侵袭能力.最后我们通过免疫印迹法检测了几种Janus激酶/信号转导与转录激活子(januskinase/signal transducer and activator of tran-ions, JAK/STAT)信号通路在其中的变化.结果在细胞活性实验中,相比于SW480, SW480/5-FU表现出对5-FU明显的耐药性.在逆转录实验中, SW480/5-FU细胞中mi R-20b表达水平明显下调,将外源性mi R-20b转染入SW480/5-FU细胞中后,其耐药性明显下降,并且其转染和侵袭能力明显下降.免疫印迹法实验显示,转染miR-20b后的SW480/5-FU细胞络氨酸激酶(janus kinase, JAK)与转录因子(signal transducersandactivatorsoftranscription,STAT)磷酸化比例下调,JAK/STAT3信号通路被抑制.结论SW480/5-FU对5-FU的耐药性可由mi R-20b介导,其机制可能与JAK-STAT信号通路表达下调相关.

小麦CPP基因家族鉴定和TaCPP20-5B克隆分析

为了研究小麦TaCPP20-5B基因在小麦生长发育过程中的作用,对小麦中CPP(Cysteine-richpolycomb-like protein)家族基因进行了全基因组鉴定和生物信息学分析,并对该家族中的TaCPP20-5B基因进行了克隆、蛋白质理化性质和二级结构、基因表达量检测和亚细胞定位分析。结果表明,在小麦基因组中共鉴定出CPP家族成员26个,系统发育进化树共有A、B、C和D 4个亚族。小麦CPP家族基因在其他组织中表达量明显高于叶片,旱热胁迫后TaCPP13和TaCPP20表达量显著提升;TaCPP20-5B基因编码区全长为1083 bp,共编码360个氨基酸,蛋白质分子量为40.02 kD,不稳定系数为52.71,脂肪系数为57.69,总平均亲水性指数为-0.716,等电点为8。蛋白质二级结构分析表明,α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲和直链延伸分别占比20.83%、3.61%、61.94%和13.61%。TaCPP20-5B在小麦叶片中表达量最低,在根和茎中表达量相近,是叶片的2.6~2.7倍。亚细胞定位发现TaCPP20-5B定位于细胞核中。本研究结果可为进一步研究TaCPP20-5B基因在小麦中的功能提供参考依据。

LncRNA HOTAIR对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和EMT的影响和作用机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)HOTAIR对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响及潜在的作用机制。方法收集培养的宫颈癌细胞(Hela细胞)、人永生化宫颈上皮细胞(H8细胞),同时收集宫颈癌组织、癌旁正常组织标本,利用实时荧光定量PCR检测LncRNA HOTAIR、miR-20a-5p和KIF26B的mRNA表达;分别下调LncRNA HOTAIR、miR-20a-5p和KIF26B的表达,MTT试验检测Hela细胞增殖能力,Western blot检测Hela细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达,流式细胞仪检测Hela细胞凋亡情况。miRanda和双荧光素酶报告基因试验分析LncRNA HOTAIR和miR-20a-5p之间的作用靶点及相关性,TargetScan和双荧光素酶报告基因试验分析miR-20a-5p与KIF26B之间的作用靶点及相关性;检测LncRNA HOTAIR通过miR-20a-5p对Hela细胞增殖、凋亡和EMT的影响。结果Hela细胞内LncRNA HOTAIR和KIF26B表达明显高于H8细胞(P<0.01),miR-20a-5p表达明显低于H8细胞(P<0.01)。宫颈癌组织中LncRNA HOTAIR和KIF26B表达明显升高(P<0.01),miR-20a-5p表达明显降低(P<0.01)。LncRNA HOTAIR、KIF26B表达降低后明显抑制了Hela细胞增殖与EMT,促进Hela细胞凋亡;LncRNA HOTAIR靶向miR-20a-5p,miR-20a-5p靶向KIF26B;miR-20a-5p表达降低后促进Hela细胞增殖与EMT,抑制细胞凋亡;过表达LncRNA HOTAIR通过miR-20a-5p促进Hela细胞增殖与EMT,抑制Hela细胞凋亡。结论LncRNA HOTAIR通过miR-20a-5p/KIF26B轴抑制Hela细胞凋亡,促进了癌细胞增殖及EMT。

甘遂的化学成分及其活性研究

目的对甘遂Euphorbia kansui毒性部位的化学成分进行提取分离和鉴定;并对化合物进行细胞毒活性筛选。方法通过硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据波谱数据分析（MS、1H-NMR、13C-NMR）鉴定化合物结构;通过MTT法对单体化合物进行细胞毒活性测试。结果从甘遂乙醇提取物的醋酸乙酯部位分离得到9个化合物,分别鉴定为甘遂萜脂B（1）、3-O-（2,3-二甲基丁酰基）-13-O-十二烷酰基-巨大戟二萜醇（2）、5-O-苯甲酰-20-去氧巨大戟二萜醇（3）、大戟醇（4）、异东莨菪素（5）、腺苷（6）、羟基酪醇（7）、2′,4′,7-三羟基异黄酮（8）、大黄素（9）。其中化合物1为假白榄烷型二萜类化合物,2、3为巨大戟烷型二萜类化合物,4为三萜类化合物。结论化合物6~8为首次从该植物中分离得到的化合物,3和9对肠上皮细胞ICE-6具有较好的抑制作用。