小麦热胁迫响应基因TaMYB165的克隆与功能分析

【目的】MYB转录因子在植物生长发育和抗逆过程中起着重要作用,克隆小麦MYB基因并对其功能进行研究,对植物MYB转录因子的调控机制具有重要意义。【方法】利用Affymetrix小麦芯片系统,分析2个小麦品种中国春(热敏感)和TAM107(耐热)在不同热胁迫处理下的转录谱,从热胁迫上调表达的EST序列中克隆得到小麦耐热相关TaMYB165基因,并对该基因的表达特性及功能进行研究;利用实时定量RT-PCR技术分析小麦不同发育时期、不同组织器官热胁迫处理下TaMYB165基因的动态表达模式,构建超表达载体并转化拟南芥,对获得的转基因拟南芥株系进行耐热性鉴定。【结果】克隆获得1个小麦MYB转录因子家族基因TaMYB165,该基因ORF长度为847 bp,编码282个氨基酸。同源序列分析表明,TaMYB165与高粱SORBIDRAFT 03g040120亲缘关系最近(73.2%),与水稻MYB蛋白和拟南芥AtMYB165的相似性分别为70.37%和33.0%。qRT-PCR结果显示,TaMYB165在小麦苗期和灌浆期都受热胁迫诱导表达,只是响应的早晚有所不同。在拟南芥中过量表达TaMYB165,转基因株系热胁迫后成活率提高,细胞膜热稳定性增强。【结论】TaMYB165是小麦热胁迫响应的重要转录因子,可作为小麦耐热育种的重要候选基因。

基于E165R基因非洲猪瘟LAMP快速检测方法的建立

【目的】建立特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)快速检测方法,为非洲猪瘟的实时实地快速检测提供参考。【方法】通过对非洲猪瘟病毒多种基因型66个毒株的E165R基因多序列比对,选取相对保守区域设计LAMP引物,并对反应条件及反应体系进行优化。在获得的最优反应条件及体系下考察方法的检测特异性和灵敏性。【结果】选取的LAMP检测靶标235 bp(29~264 bp)在不同基因型ASFV毒株中保守性较好,序列相似度达94.46%~100%;LAMP反应的最佳温度为64℃、时间为35 min、Mg 2+浓度为8 mmol/L、内外引物比为8︰1、Bst DNA聚合酶量为16 U。建立的ASFV环介导等温扩增检测方法最低检测限为50 copies/μL,较常规PCR检测提高1个数量级,且35 min即可完成扩增反应。LAMP检测方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)4种临床症状类似的猪病毒感染性疫病没有交叉反应。【结论】基于该新检测靶点的ASFV LAMP检测具有良好的特异性,可成功区分与ASFV感染临床症状相似的猪感染性疾病,且灵敏度优于常规PCR检测方法,方法简单、检测成本低,可实现ASFV的特异、灵敏、快速检测。

普通小麦籽粒Tamyb10基因等位变异的分子检测

小麦Tamyb10基因决定着种皮颜色,同时对穗发芽也具有一定影响。为了明确小麦种质的Tamyb10基因等位变异情况,以122份普通小麦品种(系)为材料,开发了能够直接检测B组染色体上Tamyb10基因等位变异的共显性标记,并利用该标记及先前已报道的Tamyb10基因功能标记分别对参试小麦品种中3A、3B和3D染色体上Tamyb10基因位点上的等位变异类型进行了检测。结果发现,参试材料中上述每一位点均发现有2种等位变异类型,共有8种基因型组合。其中,拥有Tamyb10-A1a/Tamyb10-B1a/Tamyb10-D1a基因型组合的小麦种皮表现为白色,共有51份,占供试材料总数的41.8%,其余基因型组合种皮均表现红色,分别为Tamyb10-A1b/Tamyb10-B1a/Tamyb10-D1a、Tamyb10-A1a/Tamyb10-B1b/Tamyb10-D1a、Tamyb10-A1a/Tamyb10-B1a/Tamyb10-D1b、Tamyb10-A1b/Tamyb10-B1b/Tamyb10-D1a、Tamyb10-A1b/Tamyb10-B1a/Tamyb10-D1b、Tamyb10-A1a/Tamyb10-B1b/Tamyb10-D1b和Tamyb10-A1b/Tamyb10-B1b/Tamyb10-D1b,这些基因型材料共有71份,占供试材料总数的58.2%。说明当Tamyb10基因在三个位点均为野生型时,种皮颜色为白色;而当任何一个位点发生突变时种皮颜色均表现为红色。

人血管内皮生长因子165基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达载体,并在大鼠骨髓基质细胞中进行表达。方法:利用基因克隆技术,将原核克隆载体pSP73中的目的基因VEGF165用 BamH I和Xho I双酶切后,再克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组质粒pcDNA3.1-VEGF165。对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定。通过脂质体介导,用重组质粒转染SD大鼠骨髓基质细胞,然后以G418筛选阳性克隆,用免疫细胞化学鉴定。结果:经酶切鉴定及基因测序证实,重组体中已插入目的基因片段VEGF165。免疫细胞化学证实,重组质粒转染的骨髓基质细胞中有VEGF165基因的表达。结论:成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165,并在骨髓基质细胞中得到表达,为将表达VEGF基因的骨髓基质细胞作为骨组织工程的种子细胞的可能性提供了实验依据。

人VEGF165基因真核表达质粒的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的 :构建人VEGF16 5基因的真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5 ,观察其在血管内皮细胞 (VEC)中的表达和表达产物对VEC增殖的影响。方法 :用RT PCR法从引产胎儿心脏组织中克隆VEGF16 5基因 ,并将其克隆至真核表达质粒pBud CE4 .1中 ,对重组真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5进行酶切鉴定和测序。以脂质体转染法将pBudCE4 .1/VEGF16 5导入VEC中 ,用Northernblot和免疫细胞化学染色法 ,分别从mR NA水平和蛋白质水平检测它们在转染的VEC中的表达 ,并检测表达产物对VEC增殖的影响。结果 :人VEGF16 5基因的RT PCR产物为 5 76bp。测序结果显示 ,扩增的VEGF16 5基因的序列与基因文库中登录的序列完全一致。经HindⅢ和BamHI酶切鉴定证实 ,VEGF16 5基因已成功地克隆至真核表达质粒pBudCE4 .1中。以其转染血管内皮细胞 (VEC)后 ,经Northernblot杂交和免疫细胞化学染色法检测均证实VEGF16 5基因表达。表达产物对VEC增殖有明显的促进作用。结论 :所构建的pBudCE4 .1/VEGF16 5真核表达质粒可在VEC中表达 ,表达产物可明显促进VEC增殖 ,为通过VEGF16

脑梗死大鼠经血管内皮生长因子165基因治疗后热休克蛋白70的表达

目的观察脑梗死大鼠经血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗后热休克蛋白70(HSP70)的表达。方法将25只大鼠随机均分为以下5组:正常对照组(A组);假大脑中动脉闭塞(MCAO)组(B组);MCAO组;空载质粒对照组(D组);hVEGF165基因治疗组(E组)。建模7 d后采用免疫组化的方法观察各组动物脑组织中的HSP70 的表达。结果(1)在皮质中,A、B两组HSP70均低表达(P>0.05);C、D两组表达均较高(P>0.05),与A、B两组相比有较显著的差异(P<0.01);E组表达最强,与各组相比均有显著差异(P<0.01)。(2)在半暗带中,C、D、E各组HSP70 表达均较高,C、D两组间无显著差异(P>0.05),而E组显著高于C、D组(P<0.01)。(3)在梗死灶内,E 组表达较高,显著高于C、D组(P< 0.01)。结论经hVEGF165基因治疗的脑梗死大鼠HSP70表达显著增高,提示VEGF165基因可诱导HSP70的表达。

人VEGF_(165)基因在狗骨髓基质细胞中的表达

目的 :检测转染 pcDNA3 hVEGF165狗骨髓基质细胞的VEGF165mRNA表达。方法 :用脂质体介导转染狗骨髓基质细胞 ,用免疫组化及RT PCR检测VEGFmRNA的表达。结果 :重组质粒 pcDNA3 hVEGF165转染骨髓基质细胞后 ,免疫组化及RT PCR检测有VEGFmRNA的表达。结论

热休克蛋白90^ α在血管内皮生长因子165基因治疗大鼠脑梗死中的表达及意义

目的观察热休克蛋白(HSP)90^ α在血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗大鼠脑梗死中的表达，为治疗脑梗死提供实验依据。方法雌性Wistar大自鼠25只，体重为250～300g，随机分为5组，每组5只。正常对照组(A组)予常规饲养；假手术组(B组)在建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型过程中，仅将栓线插入颈内动脉约1cm即可；单纯MCAO对照组(C组)，采用改进的线栓法制成永久性MCAO模型；空载质粒对照组(D组)在MCAO模型术后，头顶部剃毛，消毒后采用立体定位仪在梗死区相应部位钻一小孔，以5μl空载质粒(pUCCAGGS，20μg／μl)，然后缝合切口，精心饲养；治疗组(E组)的方法同D组。注入等量的pUCCAGGS／hVEGF165取代空载质粒。实验7d后断头取脑，采用免疫组织化学的方法显示脑中的hSP90^ α表达情况。结果A、B两组整个脑部均无HSP90^ α表达；C、D两组仅有少量表达；E组的半暗带内有明显表达，与C、D组的差异有显著性(P<0．01)，半暗带以外区域仅有少量表达或不表达。结论VEGF165基因可诱导HSP90^ α在特定部位表达。

hVEGF_(165)和嵌合水蛭肽融合基因的真核表达载体的构建及其表达

目的:克隆hVEGF165和嵌合水蛭肽(fused hirudin,FH)融合基因,构建hVEGF165-FH/pcDNA3.0基因表达载体,并在人内皮细胞株中表达。方法:分别通过PCR法扩增hVEGF165和引物退火法合成FH基因,将融合基因插入表达载体pcD-NA3.0,构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0。对重组质粒进行酶切鉴定和测序分析,将正确克隆的质粒分别作体外快速转录翻译鉴定,以及经脂质体介导转染人内皮细胞株,并对表达产物进行鉴定。结果:hVEGF165和FH成功融合,形成711 bp的目的片段,并成功构建重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0,重组质粒转染人内皮细胞株有hVEGF165-FH表达。结论:重组质粒hVEGF165-FH/pcDNA3.0在人内皮细胞株中得到表达,为其融合蛋白活性研究及基因治疗打下良好基础。

MMP-2与VEGF_(165)基因mRNA在卵巢癌中表达及相关性研究

目的:探讨MMP-2和VEGF165基因mRNA表达在卵巢癌发生和演进中的作用。方法:利用RT-PCR方法检测正常卵巢(n=5)、卵巢囊肿(n=5)、卵巢交界性肿瘤(n=9)和上皮性卵巢癌(n=60)中MMP-2和VEGF165基因mRNA表达。结果:MMP-2和VEGF165基因mRNA在卵巢交界性肿瘤和卵巢癌中的表达水平高于正常卵巢和卵巢囊肿(P<0.05),与卵巢癌的临床病理分期呈正相关(P<0.05),而与组织分化程度呈负相关(P<0.05);浆液性卵巢癌中MMP-2和VEGF165基因mRNA表达水平显著高于其他上皮性卵巢癌(P<0.05)。结论:在卵巢癌中MMP-2和VEGF165基因mRNA表达上调,与卵巢癌的发生和病理生物学行为关系密切;MMP-2和VEGF165基因mRNA表达上调参与了卵巢癌的发生,提高了卵巢癌的侵袭转移能力,因此,构成了卵巢癌发生和侵袭的分子基础。

抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与序列分析

目的 获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法 从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列分析。结果 抗体的轻链可变区基因 32 1 bp,属于小鼠第 亚群 ;重链可变区基因 35 4bp,属于小鼠第 ( B)亚群。结论 所克隆的基因经核苷酸序列分析分别为抗体的轻、重链可变区基因。

直接心肌植入VEGF_(165)基因的实验研究

目的 :评估VEGF1 6 5基因直接心肌内注射促进心肌血运重建的疗效。方法 :中国实验小型猪 11只 ,体重 (2 9 3± 4 3)kg。在左冠状动脉回旋支 (LCX)近心端放置Ameroid收缩环。术后 6周行冠脉造影示LCX狭窄 >95 %为慢性心肌缺血模型形成。将选用模型随机分为治疗组 (n =6 )和对照组 (n =5 )。治疗组将VEGF1 6 5质粒注射到左室侧壁 10处有标记的心肌中层。对照组只注射空白质粒。治疗前和治疗 6周后 ,采用体表超声心动图观察静息与小剂量多巴酚丁胺负荷 (LDDSE)状态下左心室壁运动及功能 (LVEF、RT、MVCF、WMSI) ,通过2 0 1 TI SPECT观察心肌灌注改变。处死动物后进行心肌血管密度和VEGF基因mRNA表达测定。结果 :治疗 6周后 ,在静息与LDDSE(10 μg min kg)状态下 ,A组RT和WMSI较治疗前显著改善 ,侧壁灌注缺损明显缩小 ,B组改善不明显。A组每个视野的血管面积、血管周长及血管数目均较B组多。A组 2 3例局部心肌VEGF基因mRNA的表达明显 ,B组 3 3例均无表达。结论 :直接心肌内注射VEGF1 6 5基因可促进慢性缺血心肌的血管再生 ,改善局部心肌灌注和室壁运动。

人VEGF165基因的克隆、表达和活性鉴定

目的 克隆人VEGF165基因,构建其真核表达质粒,转染293细胞,并鉴定表达VEGF的生物学活性。方法 采用PCR法从人心脏cDNA文库钓取人VEGF165基因,插入pUC19载体测序后与真核表达质粒pAdTrackCMV连接,阳离子脂质体Lipofectamin介导VEGF基因转染293细胞,Northem blot和Western blot法分别检测VEGFmRNA和蛋白的表达,Miles试验进行活性鉴定。结果(1)琼脂糖凝胶电泳分析得到两个片段,分别为582bp的VEGF165cDNA和2.68kb的pUC19线性质粒,结果与理论值相符,VEGF165测序结果与GENE BANK中VEGF165序列完全一致。(2)转染293细胞后表达绿色荧光蛋白,转染后第3天(1 024pg／ml)和5天(986pg／ml)VEGF表达最高,明显高于转染前(102pg／ml)。(3)Miles试验结果显示,用转染AdTrackCMV-VEGF165细胞培养上清皮下注射后10分钟左右皮丘变为蓝色,成倍连续稀释后,出现蓝斑的时间延长,蓝斑范围也相应缩小。而注射未转染293细胞培养上清和生理盐水组则未见蓝斑出现。结论 成功克隆人VEGF165基因,并表达出具有生物学活性的VEGF蛋白。

重组双基因表达质粒pIRES-NGF-VEGF165转染大鼠BMSCs及表达鉴定

目的利用脂质体转染技术,将带有神经生长因子(NGF)基因和血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的重组双基因表达质粒pIRES-NGF-VEGF165转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),获得能稳定表达NGF和VEGF165的转基因BMSCs。方法采集和培养大鼠BMSCs;利用脂质体转染技术,将pIRES-NGF-VEGF165质粒转染大鼠BMSCs,经G418筛选,获得阳性细胞克隆,进行扩增培养;应用RT-PCR和Western blot检测NGF、VEGF165的表达,并分别利用PC12细胞生长实验和鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管形成实验进行NGF和VEGF165的活性检测。结果质粒pIRES-NGF-VEGF165成功转染入BMSCs,可正确表达NGF和VEGF165,并具有生物学活性。结论获得了能够稳定表达NGF和VEGF165的大鼠BMSCs,为进一步研究NGF及VEGF165双基因治疗脑梗死奠定了重要基础。

人血管内皮生长因子165基因联合间充质干细胞治疗对扩张型心肌病胶原重塑的影响

目的:探讨人血管内皮生长因子165基因(hVEGF165)联合间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)治疗对扩张型心肌病胶原重塑的影响。方法:将40只扩张型心肌病(DCM)大鼠模型随机分为4组:PBS组、MSCs心肌移植联合基因治疗组(MSCs-GENE组)、MSCs心肌移植组(MSCs组)以及基因治疗组(GENE组)。心肌局部注射所构建MLC-2v/pIRES2-EG-FP-hVEGF165与MSCs,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测I型、Ⅲ型胶原和转化生长因子-β(TGF-β)基因表达,蛋白免疫印迹(Westren blot)检测hVEGF165蛋白表达。结果:PBS组、MSCs+GENE组、MSCs组以及GENE组的I型胶原PCR产物灰度比分别为(0.359±0.010)、(0.240±0.012)、(0.313±0.058)、(0.230±0.011);而Ⅲ型胶原分别为(0.831±0.011)、(0.842±0.015)、(0.917±0.058)、(0.688±0.015);TGF-β1分别为(0.548±0.067)、(0.370±0.012)、(0.561±0.014)、(0.369±0.098);MSCs+GENE组TGF-β1与GENE组比较差异无统计学意义,但两者显著低于PBS组和MSCs组,提示TGF-β1表达下调;I型/III型胶原灰度比分别为(0.436±0.072)、(0.290±0.023)、(0.337±0.021)、(0.333±0.011),其中MSCs组与GENE组比较差异无统计学意义;MSCs组与GENE组的I型/III型胶原灰度比减低,2组比较差异无统计学意义,但MSCs-GENE组进一步使I型/III型胶原灰度比减低;TGF-β1表达分析结果显示,hVEGF165基因治疗较MSCs移植使TGF-β1表达下调的作用更显著。结论:MSCs移植与hVEGF165基因治疗有可能通过下调TGFβ1表达,降低I型/III胶原比值,增加心肌顺应性,减轻心肌胶原网络重塑而改善心功能。

hVEGF165基因克隆及其在COS-7细胞中的表达

目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Westernblotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcDNA3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达。结论构建的pcDNA3.1/hVEGF165转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白。

VEGF-165/ANG-1双基因共转染血管内皮祖细胞复合多孔生物活性玻璃的生物相容性研究

目的制备一种具有诱导血管再生活性的新型复合骨组织工程材料,并评价其生物相容性。方法将血管内皮生长因子-165(VEGF-165)/血管生成素-1(ANG-1)双基因共转染的血管内皮祖细胞(EPCs)复合多孔生物活性玻璃,制成复合人工骨材料。采用Western blot、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测已转染EPCs中VEGF-165及ANG-1的表达。噻唑蓝(MTT)细胞毒性试验、骨植入试验及扫描电镜观察细胞在材料表面黏附情况等综合评价材料的生物相容性;CD31免疫组织化学法染色观察材料中血管再生的情况。结果Western blot检测、RT-PCR反应显示,实验组VEGF-165、ANG-1的表达较对照组升高。MTT细胞毒性试验、骨植入试验均显示,材料无毒性反应。扫描电镜显示,材料表面有较多血管内皮祖细胞黏附,并有较多伪足伸出。苏木精-伊红染色法(HE)染色显示,材料周围组织生长良好,未见明显的炎症细胞浸润,材料与周围组织交界处有大量的新骨生成。CD31免疫组织化学法染色显示,材料中有较多新生的毛细血管。结论 VEGF-165/ANG-1双基因共转染EPCs复合多孔生物活性玻璃的骨组织工程材料生物相容性良好,具备一定的诱导血管再生活性。

血管内皮生长因子165基因对大鼠血管损伤后重塑的实验研究

目的探讨局部转染血管内皮生长因子165基因(VEGF165cDNA)对大鼠血管球囊拉伤术后血管重塑的影响。方法制备VEGF165cDNA基因,将30只SD大鼠随机分为基因组、手术对照组及正常对照组(各10只),基因组通过尾静脉输入VEGF165cDNA基因,手术对照组及正常对照组只注入生理盐水,应用免疫组织化学、电镜、光镜等方法观察球囊拉伤后的大鼠股动脉内膜的变化,检测拉伤局部内膜VEGF165基因作用效果。结果基因组球囊拉伤血管24 h后内膜处有少量中性粒细胞浸润,手术对照组损伤内膜有较多的中性粒细胞浸润,14 d后基因组球囊拉伤血管内膜厚度小于手术对照组(P<0.01),管腔内径大于手术对照组(P<0.01),内膜有大量VEGF蛋白表达。结论病理性重塑是血管损伤后再狭窄的主要原因,而VEGF165基因可促进内皮细胞增生,加速损伤内膜的修复,抑制血管内膜平滑肌细胞的增生进而防治再狭窄。

低氧反应元件对缺血心肌转导hVEGF_(165)基因表达的调控

目的探讨低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)对缺血、复灌心肌转导人血管内皮生长因子165(human vascular endous growth factor 165,hVEGF165)基因表达的调控作用。方法在猪冠状动脉回旋支起始处以钛夹阻断回旋支血流,建立可复灌的心肌缺血模型。携带9拷贝HRE(9HRE)-hVEGF165的腺相关病毒转染模型心肌,转染后4天,复灌组二次开胸打开钛夹恢复缺血区血供。取各组心肌组织,RT-PCR法测定hVEGF165mRNA的表达情况;免疫组化及免疫印迹法测定hVEGF165蛋白的表达情况;Ⅷ因子免疫组化染色检测局部毛细血管情况。结果缺血心肌转导hVEGF165基因后,hVEGF165蛋白表达量明显增高,而复灌组表达明显减少(P<0.01)。结论9HRE作为调控缺血心肌组织内转导的hVEGF165基因的氧敏感开关灵敏、高效,使hVEGF165基因在缺血时高度表达,而复灌后表达水平下降。

重组VEGF_(165)基因表达与活性检测

目的为血管内皮生长因子(VEGF165)生物学分子机制的研究奠定基础。方法用RT-PCR法从人胎肝总RNA中逆转录扩增VEGF165,将其插入表达载体pET-32a(+)Vector中,将测序鉴定正确的重组表达载体转化至E.Coli XL-Blue中表达,并用纯化蛋白刺激人脐静脉内皮细胞,检测其促增殖活性。结果经异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)诱导后,VEGF165(His)6得到有效表达,Western blot分析可以观察到相对分子质量为26kD的诱导表达条带,该表达蛋白可与VEGF多克隆抗体发生特异性反应。用His-bind亲和层析纯化得到纯度较高的目的蛋白,该蛋白可促进内皮细胞增殖。结论基因工程技术可使大肠杆菌有效表达人VEGF165,并得到纯度较高、有增殖活性的VEGF蛋白;此为进一步研究VEGF的生物学分子机制奠定了基础。