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小麦根高亲和NO_3^-转运体全长基因(TaNRT2.1)的克隆和鉴定 被引量:2
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作者 印莉萍 黄勤妮 +2 位作者 黄海明 米国华 JamesOBerry 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期795-800,共6页
在前期获得的 pTaAF 的工作基础上,采用 RACE 方法进一步克隆和鉴定了小麦根 NO3 转运体全长基因-(TaNRT2.1)。将TaNRT2.1和已知的硝态氮转运体基因家族进行同源性比较,指出TaNRT2.1属于HATS中的NRT2家族。Southern 印迹揭示小麦基因... 在前期获得的 pTaAF 的工作基础上,采用 RACE 方法进一步克隆和鉴定了小麦根 NO3 转运体全长基因-(TaNRT2.1)。将TaNRT2.1和已知的硝态氮转运体基因家族进行同源性比较,指出TaNRT2.1属于HATS中的NRT2家族。Southern 印迹揭示小麦基因组中有1个TaNRT2.1拷贝。Northern 分析示出硝态氮可瞬时诱导TaNRT2.1 mRNA积累,NO 处理 1 h TaNRT2.1 mRNA很快增加,4 h 达到最大,24 h恢复至诱导前水平,具根专一表达特点。 - 展开更多
关键词 小麦 硝态氮转运系统 基因克隆 序列分析 tanrt2.1基因
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小麦硝酸盐转运蛋白基因TaNRT1.1的鉴定及其等位变异分析 被引量:3
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作者 王沙沙 黄绍敏 +1 位作者 张珂珂 宋晓 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期261-269,共9页
为解析小麦硝酸盐转运蛋白基因TaNRT1.1的生物学功能,本研究通过同源克隆的方法从普通小麦中克隆了小麦硝酸盐转运蛋白基因TaNRT1.1(TaNRT1.1-1A、TaNRT1.1-1B和TaNRT1.1-1D)。生物信息学分析表明,这三个同源基因编码的蛋白均为疏水蛋白... 为解析小麦硝酸盐转运蛋白基因TaNRT1.1的生物学功能,本研究通过同源克隆的方法从普通小麦中克隆了小麦硝酸盐转运蛋白基因TaNRT1.1(TaNRT1.1-1A、TaNRT1.1-1B和TaNRT1.1-1D)。生物信息学分析表明,这三个同源基因编码的蛋白均为疏水蛋白,含有丰富的α-螺旋和无未见则卷曲,主要定位于质膜上。小麦不同组织qRT-PCR分析表明,TaNRT1.1-1A和TaNRT1.1-1B基因在根中表达量最高,其次是叶和茎,TaNRT1.1-1D基因在茎中表达量最高,其次是叶和根。因此,推测TaNRT1.1-1A和TaNRT1.1-1B基因在硝酸盐吸收过程中发挥了重要作用,TaNRT1.1-1D基因在硝酸盐转运过程中发挥了重要作用。通过对小麦TaNRT1.1基因多态性筛选发现,在TaNRT1.1-1A基因启动子上游1120 bp的位置有一个8 bp(TGCATGCA)的插入位点,该位点可能与小麦氮利用效率相关。不同氮利用效率小麦品种qRT-PCR分析结果表明,氮高效小麦品种(基因型为TaNRT1.1-1A-b)苗期根中TaNRT1.1-1A基因的相对表达量显著高于氮低效小麦品种(基因型为TaNRT1.1-1A-a)。 展开更多
关键词 小麦 硝酸盐转运蛋白 tanrt1.1基因 生物信息学 表达分析
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水稻硝酸盐转运蛋白基因OsTNrt2.1的编码蛋白特征和表达 被引量:11
3
作者 徐海荣 谷俊涛 +3 位作者 路文静 邓若磊 曹云飞 肖凯 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期723-730,共8页
根据Nipponbare的OsNrt2.1cDNA序列,从氮效率较高的水稻品种TP309中克隆了与OsNrt2.1高度同源的硝酸盐转运蛋白(NRT)基因OsTNrt2.1。其开放阅读框为1 602 bp,编码533个氨基酸残基。OsTNrt2.1具有NRT共有的结构特征,与拟南芥、玉米、小... 根据Nipponbare的OsNrt2.1cDNA序列,从氮效率较高的水稻品种TP309中克隆了与OsNrt2.1高度同源的硝酸盐转运蛋白(NRT)基因OsTNrt2.1。其开放阅读框为1 602 bp,编码533个氨基酸残基。OsTNrt2.1具有NRT共有的结构特征,与拟南芥、玉米、小麦、大麦和烟草的NRT基因高度同源。OsTNrt2.1的表达表现器官特异性,在根中高于在叶中。此外,OsTNrt2.1的表达受NH+4的抑制和NO-3的诱导,并具典型的昼夜节律特征。在不同NO-3浓度下,OsTNrt2.1的表达水平相近,表明OsTNrt2.1可能是具有双亲和特征的NRT基因。在不同氮源及不同介质氮浓度条件下,OsTNrt2.1在根中的表达均高于在叶中,表明OsTNrt2.1对于根系吸收NO-3可能具有重要作用。 展开更多
关键词 水稻(Oryza sativa) NRT基因 OsTNrt2.1 基因特征 基因表达
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菘蓝ItSnRK2.1基因的克隆及其序列特性分析 被引量:4
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作者 张春兰 满丽莉 +2 位作者 向殿军 包乌日娜 刘鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期119-128,共10页
SnRK2是ABA通路中至关重要的蛋白激酶,可通过调节下游相关蛋白质的活性来调节胁迫响应基因的表达,显著改进植物对高盐和干旱等非生物胁迫的抗性。基于SnRK2成员cDNA的UTR保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR方法从菘蓝中克隆得到一个SnRK2... SnRK2是ABA通路中至关重要的蛋白激酶,可通过调节下游相关蛋白质的活性来调节胁迫响应基因的表达,显著改进植物对高盐和干旱等非生物胁迫的抗性。基于SnRK2成员cDNA的UTR保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR方法从菘蓝中克隆得到一个SnRK2全长cDNA序列,命名为ItSnRK2.1。测序显示该基因长度为1 305 bp,包含一个1 071 bp的完整开放阅读框,编码356个氨基酸,在GenBank数据库的登录号为MF423122。ItSnRK2.1蛋白激酶理论等电点为5.64,理论分子量为40.6 k D,属于亲水性蛋白,存在二个显著跨膜结构域,含有42处磷酸化位点,没有信号肽,最可能定位的位置是在细胞质上。ItSnRK2.1蛋白激酶的二级结构具有151个α-螺旋、109个无规则卷曲、66个延伸链和30个β-转角。ItSnRK2.1蛋白包含一个ATP结合位点和一个丝氨酸/苏氨酸酶活结构域,同At SnRK2.1、At SnRK2.5和St SnRK2.6蛋白亲缘关系最近,处在同一进化分枝。实时定量RT-PCR检测结果显示,ItSnRK2.1基因在菘蓝幼苗的根部表达量最高,其次是叶,茎的表达量最低;ItSnRK2.1基因积极参与高盐和干旱胁迫应答反应,但对ABA胁迫不敏感,表明该基因可能与植物抗逆境胁迫有关,且不依赖ABA调控通路。 展开更多
关键词 菘蓝 ItSnRK2.1基因 克隆 特性分析
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SSX基因家族HLA-A2.1限制性CTL表位预测及其MHC-Ⅰ亲和力分析 被引量:1
5
作者 何仰东 吴玉章 +6 位作者 林治华 贾正才 姜曼 黎万玲 付晓岚 邓一静 倪兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期872-875,共4页
目的 通过对肿瘤基因SSX家族不同成员进行CTL表位预测,并对其与MHC-I亲和力进行分析,为探索基于SSX肿瘤基因家族的免疫治疗奠定基础。方法 利用基于超基序结合量化基序方案开发的HLA-A2.1限制性CTL表位预测软件,对SSX基因家族不同... 目的 通过对肿瘤基因SSX家族不同成员进行CTL表位预测,并对其与MHC-I亲和力进行分析,为探索基于SSX肿瘤基因家族的免疫治疗奠定基础。方法 利用基于超基序结合量化基序方案开发的HLA-A2.1限制性CTL表位预测软件,对SSX基因家族不同成员进行CTL表位预测,然后合成SSX相关待测表位肽P1(AMTKLGFKA)、P4(AMT-KLGFNV)、P5(AMTKLGFKV)和P6(VMTKLGFKV),再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力及其结合物稳定性进行实验分析。结果与实验阳性肽(HBcAg,18~27)相比,除P1外,P4、P5、P6均显示较高的结合亲和力;而结合稳定性实验(DC50)结果显示,P1、P4与阳性对照肽(HBcAg,18~27)DC。均大于8h,而P5和P6的DC50介于2~4h之间。结论 计算机软件预测的CTL表位肽,经过体外亲和力与结合稳定性实验筛选到2条理想的表位肽,为该表位的下一步体内鉴定奠定基础。 展开更多
关键词 SSX肿瘤基因 表位预测 HLA-A2.1限制性 结合亲和力
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2.1c亚群猪瘟病毒GXF29/2013株全基因组克隆测序及遗传进化分析 被引量:1
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作者 黄耀华 邵卫星 +5 位作者 杨雨辉 董雅琴 刘爽 吴发兴 张志 李晓成 《动物医学进展》 北大核心 2015年第8期1-7,共7页
参考GenBank 登录的2.1 亚群猪瘟病毒(CSFV)的核苷酸序列,设计并合成4 对引物,应用RTPCR 技术,扩增出了CSFV 广西流行毒株GXF29/2013的全基因组,并进行核苷酸测序.结果GXF29/2013株的全基因组长度为12296个核苷酸.用MEGA5.0软件对GX... 参考GenBank 登录的2.1 亚群猪瘟病毒(CSFV)的核苷酸序列,设计并合成4 对引物,应用RTPCR 技术,扩增出了CSFV 广西流行毒株GXF29/2013的全基因组,并进行核苷酸测序.结果GXF29/2013株的全基因组长度为12296个核苷酸.用MEGA5.0软件对GXF29/2013与GenBank上登录的20株不同亚型(1.1、2.1、2.2、2.3和3.4)CSFV 参考株进行全基因组核苷酸序列及开放阅读框编码的氨基酸序列比较,发现GXF29/2013 与参考株核苷酸序列同源性在83.2% ~98.0% 之间,氨基酸序列同源性在91.2%~98.8%之间.用E2基因进行系统发生树分析,结果表明GXF29/2013属于最近出现的2.1c亚群.对E2蛋白进行分析,结果表明GXF29/2013株有2.1c亚群毒株的特征,与2.1b毒株的遗传进化关系比与1.1亚群毒株的近.该毒株既保留了CSFV E2蛋白的一些关键特征,又与疫苗毒株的一些关键抗原位点不同.GXF29/2013病毒株全基因序列的获得为下一步进行CSFV 反向遗传操作平台的建立奠定了基础. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 基因 序列分析 2.1c亚群
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2018年中国部分地区猪瘟病毒2.1d亚型新流行株的基因组特征分析 被引量:7
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作者 许浒 潘研 宋铭忻 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第8期2561-2570,共10页
为了解中国猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的分子流行病学及遗传变异情况,本研究应用RT-PCR方法对2018年采集自河南、河北、山东、黑龙江和辽宁5个省份的350份疑似CSFV感染的病料进行E2和NS5B基因扩增,并对PCR产物进行测... 为了解中国猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的分子流行病学及遗传变异情况,本研究应用RT-PCR方法对2018年采集自河南、河北、山东、黑龙江和辽宁5个省份的350份疑似CSFV感染的病料进行E2和NS5B基因扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析。结果显示,350份样品中21份为CSFV阳性,共获得14株CSFV的E2基因序列和7株CSFV的部分NS5B基因序列。E2全基因、NS5B部分基因序列分析表明,21份阳性样品均属于近年来在中国流行的CSFV 2.1d亚型,且新发现的2.1d亚型CSFV与中国较早2.1d亚型CSFV毒株间同源性差异不大,新发现的2.1d亚型CSFV分离株在E2基因的6个氨基酸(R^31、S^34、W^182、K^205、K^303、A^331)上具有相同的分子特征,E2蛋白中15个位点上的半胱氨酸均未发生变异。韩国2.1d亚型CSFV在E2蛋白上具有3个独特的氨基酸(N^97、K^159、R^205)特征,并且发现了韩国毒株YC11WB可能作为2.1b和2.1d亚型CSFV过渡毒株的证据,流行于中国和韩国的2.1d亚型CSFV可能分别来自于本国早期2.1b亚型CSFV的衍化。本研究证实,2018年中国及周边国家CSFV较为活跃,且流行毒株依然以2.1d亚型为主,为中国科学防控CSFV提供了依据。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) E2基因 NS5B基因 2.1d亚型 遗传变异 分子特征
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TaNRT2.1-6B is a dual-affinity nitrate transporter contributing to nitrogen uptake in bread wheat under both nitrogen deficiency and sufficiency 被引量:3
8
作者 Mengjiao Li Tian Wang +4 位作者 Hui Zhang Shuo Liu Wenhu Li Salah F.Abou Elwafa Hui Tian 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2022年第4期993-1005,共13页
Multiple nitrate transporter(NRT)genes exist in the genome of bread wheat,and it is of great importance to identify the elite NRT genes for N-efficient wheat cultivar breeding.A candidate gene association study(CGAS)o... Multiple nitrate transporter(NRT)genes exist in the genome of bread wheat,and it is of great importance to identify the elite NRT genes for N-efficient wheat cultivar breeding.A candidate gene association study(CGAS)of six N use efficiency(NUE)related traits(grain N concentration(GNC),straw N concentration(SNC),grain yield(GY),grain N accumulation(GNA),shoot total N accumulation(STN)and N harvest index(NHI))was performed based on SNPs in 46 NRT2 genes using a panel composed of 286 wheat cultivars.CGAS identified TaNRT2.1-6B as an elite NRT gene that is significantly associated with four(NHI,SNC,GNA and GY)of the six NUE-related traits simultaneously.TaNRT2.1-6B is located on the plasma membrane and acts as a dual-affinity NRT.The overexpression of TaNRT2.1-6B increased the N influx and root growth of wheat,whereas gene silence lines resulted in the opposite effects.The overexpression of TaNRT2.1-6B also improved GY and N accumulation of wheat under either limited or sufficient N conditions.The data provide the TaNRT2.1-6B gene and the two associated SNP markers as promising powerful tools for breeding wheat cultivars with high N uptake ability and NUE. 展开更多
关键词 Candidate gene association study WHEAT tanrt2.1-6B Dual-affinity transporter Nitrogen use efficiency
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兔心房组织内向整流钾2.1通道基因表达的增龄性变化
9
作者 酉鹏华 陈海潮 +2 位作者 寿锡凌 程功 何晓敏 《广西医学》 CAS 2018年第5期546-548,共3页
目的观察家兔心房内向整流钾2.1(Kir2.1)通道mRNA表达的增龄性变化。方法选择家兔24只,分为幼年组(14~21 d)、成年组(8~10个月)、老年组(30~35个月),每组8只。采用实时荧光定量PCR检测各组家兔心房组织的钾内向整流通道超家族J成员2(KCN... 目的观察家兔心房内向整流钾2.1(Kir2.1)通道mRNA表达的增龄性变化。方法选择家兔24只,分为幼年组(14~21 d)、成年组(8~10个月)、老年组(30~35个月),每组8只。采用实时荧光定量PCR检测各组家兔心房组织的钾内向整流通道超家族J成员2(KCNJ2)mRNA表达情况。结果幼年组、成年组及老年组的KCNJ2 mRNA相对表达量依次升高(均P<0.05)。结论 Kir2.1通道在转录水平随着年龄增加而发生变化,这可能是老年人房颤高发生率的因素之一。 展开更多
关键词 心房颤动 增龄性 内向整流钾2.1通道 基因表达
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矮珍珠硝酸盐转运蛋白基因GeNRT2.1的克隆和功能研究
10
作者 黄赳 师双峰 +3 位作者 张二特 李梅 于跃 刘昱辉 《生物技术进展》 2022年第2期256-264,共9页
硝酸盐转运蛋白(nitratetransporter,NRT)是植物识别、吸收和转运硝酸盐的关键蛋白,对促进作物根系发育、提高产量具有重要作用。通过筛选水生植物,利用NRT蛋白的保守区设计简并引物,并通过PCR和RACE技术,首次从矮珍珠(Glossostigmaelat... 硝酸盐转运蛋白(nitratetransporter,NRT)是植物识别、吸收和转运硝酸盐的关键蛋白,对促进作物根系发育、提高产量具有重要作用。通过筛选水生植物,利用NRT蛋白的保守区设计简并引物,并通过PCR和RACE技术,首次从矮珍珠(Glossostigmaelatinoides)中克隆得到GeNRT2.1基因。进化分析结果表明,GeNRT2.1与烟草NRT2.1在进化关系上距离最近。qRT-PCR结果表明,GeNRT2.1在矮珍珠根中表达量最高,其次是叶和茎,此外,低浓度硝酸盐(0.5 mmol·L^(−1))处理后,GeNRT2.1在根、叶、茎中的表达量分别是高浓度硝酸(2 mmol·L^(−1))处理后的1.89、1.93和2.07倍。功能互补实验发现,GeNRT2.1能使缺陷型酵母Δynr恢复生长,具有硝酸盐转运蛋白的功能。通过丰富NRT基因资源,以期为培育氮肥高效利用转基因作物,发展绿色农业,保证我国的粮食安全和环境安全提供理论依据。 展开更多
关键词 矮珍珠 硝酸盐转运蛋白 GeNRT2.1基因 功能互补实验
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拟南芥防御相关基因THI2.1启动子与GUS重组载体的构建与转化
11
作者 荣楠 蔡薇 +1 位作者 周舟 任春梅 《植物学研究》 2017年第2期25-30,共6页
THI2.1基因是植物防御系统中的一个重要基因,其编码的硫菫蛋白能有效的提升植物的抗病性,帮助植物抵御外界病原物的侵染。分析该基因在植物体内的表达模式有利于进一步了解该基因的表达调控。本试验对拟南芥THI2.1基因启动子与带GUS标... THI2.1基因是植物防御系统中的一个重要基因,其编码的硫菫蛋白能有效的提升植物的抗病性,帮助植物抵御外界病原物的侵染。分析该基因在植物体内的表达模式有利于进一步了解该基因的表达调控。本试验对拟南芥THI2.1基因启动子与带GUS标记基因的载体进行重组构建,并将重组载体转入拟南芥,为后续研究该基因的表达模式提供材料。结果如下:1) 成功的构建了拟南芥THI2.1基因启动子与GUS基因的重组载体。2) 成功的将拟南芥THI2.1基因启动子与GUS基因重组载体转入拟南芥植株,并筛选到了转基因植株。 展开更多
关键词 载体构建 THI2.1基因 启动子
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用HLA-A2.1转基因鼠研究丙型肝炎病毒自然感染时的表位排列
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作者 易绍琼 《国外医学(微生物学分册)》 2003年第4期42-43,共2页
丙型肝炎病毒(HCV)的治疗效果很大程度上取决于所感染HCV的基因型。有效的HCV疫苗必须能诱导强而持续的免疫反应,其中诱导广谱的CD8^+T细胞应答最为重要。
关键词 HLA-A2.1基因 丙型肝炎病毒 自然感染 表位排列 冶疗 HCV疫苗 免疫反应 病毒复制
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TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及结合力分析 被引量:3
13
作者 朱波 陈正堂 +3 位作者 程晓明 林治华 邹丽云 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期18-22,共5页
目的 寻找并鉴定TRAG 3来源的HLA A2 .1限制性CTL表位 ,为临床开展基于TRAG 3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法 应用超基序和量化基序方案预测TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位 ;采用标准Fmoc方案合成侯选表位 ,RP HPLC纯化、分析多... 目的 寻找并鉴定TRAG 3来源的HLA A2 .1限制性CTL表位 ,为临床开展基于TRAG 3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法 应用超基序和量化基序方案预测TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位 ;采用标准Fmoc方案合成侯选表位 ,RP HPLC纯化、分析多肽 ,质谱鉴定各肽 ;最后 ,用T2细胞株测定各肽与HLA A2 .1分子的结合力。结果 超基序和量化基序方案预测出了 4个侯选表位肽 ;标准Fmoc方案合成的各肽经纯化后纯度大于 90 % ,各肽的相对分子质量与理论值一致 ;在 4个侯选表位肽中 ,ILLRDAGLV( 58- 6 6 ) 九肽与HLA A2 .1的结合力最强。结论 表位预测的结果与结合力分析实验结果一致性较好 ,两者联合应用初步认为ILLRDAGLV( 58- 6 6 ) 九肽为TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位的可能性最大。 展开更多
关键词 TRAG-3 HLA-A2.1 CTL 表位 泰素耐药相关基因-3
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电压门控性钾通道亚型Kv2.1在低氧性肺动脉高压形成和恢复中的作用 被引量:2
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作者 徐贤华 彭华生 +3 位作者 胡猛 肖欣荣 王万华 何晓英 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第21期2112-2115,共4页
目的研究电压门控性钾通道亚型Kv2.1基因表达变化在大鼠低氧性肺动脉高压形成以及恢复中的作用。方法32只雄性SD大鼠均分为正常对照组、高原慢性低压低氧组(CH组)、二氯醋酸钠(DCA)治疗组(CH+DCA组)和高原低氧返回平原恢复7d组(CHR7组)... 目的研究电压门控性钾通道亚型Kv2.1基因表达变化在大鼠低氧性肺动脉高压形成以及恢复中的作用。方法32只雄性SD大鼠均分为正常对照组、高原慢性低压低氧组(CH组)、二氯醋酸钠(DCA)治疗组(CH+DCA组)和高原低氧返回平原恢复7d组(CHR7组)。正常对照组在常压常氧平原条件下喂养,其余各组在模拟高原5000m低压氧舱内喂养21d,动物模型建成后用闭式胸腔法测平均肺动脉压(mPAP),荧光定量PCR法检测4组大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)的Kv2.1mRNA表达;免疫组织化学方法检测大鼠PASMCsKv2.1的表达;图像分析技术检测肺小动脉形态改变及Kv2.1表达强度变化;Westernblot法检测肺动脉平滑肌细胞Kv2.1蛋白表达。结果模拟高原5000m缺氧21d后,与正常对照组相比,CH组Kv2.1mRNA和蛋白表达明显下降,免疫组化显示PASMCsKv2.1表达的平均光密度值(mIOD)减少,而mPAP明显增高,肺小动脉管壁增厚,管腔狭窄,肺血管重构明显。与CH组相比,DCA+CH组和CHR7组Kv2.1mRNA和蛋白则明显恢复表达,PASMCsKv2.1表达的mIOD增加,mPAP下降,血管重构减弱。结论Kv2.1基因表达变化与高原低氧性肺动脉高压变化存在负相关性,表明Kv2.1在低氧性肺动脉高压的形成和恢复中可能起着一定的作用。 展开更多
关键词 低氧 肺动脉高压 基因表达 重构 恢复 Kv2.1
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HLA-A*0201/Kb及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用 被引量:1
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作者 宋淑霞 闫彩珍 +3 位作者 郑龙 尤红煜 王俊霞 刘福英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期679-682,共4页
目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利... 目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、流式细胞术(FCM)和Westernblot检测了HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和提呈。结果:RT-PCR、FCM和Westernblot检测到HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论:MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。 展开更多
关键词 HLA-A2.1基因 疫苗评价 肿瘤动物模型 基因共转染 MAGE-3 PIRES
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橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化 被引量:1
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作者 李哲 贺永国 +6 位作者 黄绵佳 曾宪海 林位夫 刘洁琼 张春红 李运合 马晓晓 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期597-603,共7页
【目的】以3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶1基因(Hb HMGR1)乳管表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织,获得抗性转基因材料,为研究Hb HMGR1基因的乳管特异性表达及提高橡胶产量打下基础。【方法】用... 【目的】以3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶1基因(Hb HMGR1)乳管表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织,获得抗性转基因材料,为研究Hb HMGR1基因的乳管特异性表达及提高橡胶产量打下基础。【方法】用根癌农杆菌EHA105介导表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1转化橡胶树品种热研8-79花药易碎胚性愈伤组织,经卡那霉素筛选数月后,对抗性愈伤组织进行GUS染色和分子检测。【结果】经过对根癌农杆菌侵染的易碎愈伤组织进行4~6个月筛选,得到5个GUS检测呈阳性的抗性愈伤组织系;取其中的2号和11号抗性愈伤组织系进行PCR鉴定,均能扩增出与阳性对照相同的特异片段,uid A、NPTII和PHEV2.1-Hb HMGR1序列的目的片段大小分别为829、797和3592 bp。2号和11号抗性愈伤组织系经反向PCR鉴定,发现2号抗性愈伤组织系未扩增出目的条带,而11号抗性愈伤组织系扩增获得一条约2000 bp的条带,包含T-DNA序列和一段未知的DNA序列,其中未知DNA序列是橡胶树品种热研8-79基因组的一段连续序列。【结论】将植物表达载体的T-DNA整合到抗性愈伤组织系基因组DNA中,可获得一个含35S-NPTII-PHEV2.1-Hb HMGR1-35S-uid A的转基因愈伤组织系。 展开更多
关键词 橡胶树 HbHMGR1基因 乳管特异性启动子PHEV2.1 易碎愈伤组织 遗传转化
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靶向mrp1基因shRNA表达载体构建
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作者 邵淑丽 崔婷婷 +3 位作者 刘迁 陈丽 贾红双 吴敏 《现代肿瘤医学》 CAS 2010年第2期250-252,共3页
目的:构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体。方法:根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2.1U6-neo质粒上,构建重组载体。经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果。结果:成功构建靶向mrp1基因shRNA... 目的:构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体。方法:根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2.1U6-neo质粒上,构建重组载体。经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果。结果:成功构建靶向mrp1基因shRNA表达载体。结论:为进一步研究mrp1基因在肺癌多药耐药中的作用以及探索肺癌的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 mrp1基因 psilencer2.1U6-neo质粒 SHRNA 表达载体
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HLA-A0201/K^b及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用
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作者 宋淑霞 郑龙 +4 位作者 冯旭 尤红煜 张艳 刘春燕 刘福英 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期I0015-I0015,共1页
目的用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法采用基因共转染的方法,将HLA-A0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、细... 目的用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法采用基因共转染的方法,将HLA-A0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测了HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和递呈。结果RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测到HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。 展开更多
关键词 HLA-A2.1基因 疫苗评价 模型 动物 基因共转染 MAGE-3 PIRES
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CSFV陕西分离株SXCDK全基因的克隆与分析 被引量:4
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作者 李玲伟 张志 +7 位作者 吴发兴 程伟 杨若松 张燕霞 刘爽 郑辉 李晓成 陈德坤 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第1期1-7,共7页
【目的】分离猪瘟病毒(CSFV)SXCDK株,测定其全基因组序列,研究其分子特性及与其他毒株的亲缘关系,为猪瘟病毒分子流行病学研究积累材料。【方法】从陕西省西安市采集疑似猪瘟病料进行病毒分离,获得猪瘟病毒SXCDK株。根据GenBank上发... 【目的】分离猪瘟病毒(CSFV)SXCDK株,测定其全基因组序列,研究其分子特性及与其他毒株的亲缘关系,为猪瘟病毒分子流行病学研究积累材料。【方法】从陕西省西安市采集疑似猪瘟病料进行病毒分离,获得猪瘟病毒SXCDK株。根据GenBank上发表的猪瘟病毒全基因序列及相关参考文献,合成11对引物,应用RT-PCR技术分11段扩增CSFV分离株SXCDK基因,拼接后获得其全基因组(GenBank登录号:GQ923951)。利用DNAstar、ClustalX1.83和Mega 4.1等软件,对分离株SXCDK与其他猪瘟病毒毒株的核苷酸和氨基酸序列进行比较分析。【结果】CSFV陕西分离株SXCDK基因组全长12 296 nt,由373 nt的5′非翻译区、编码3 899个氨基酸的11 697 nt开放阅读框和226 nt的3′非翻译区组成。分离株SXCDK和其他毒株的核苷酸序列同源性为83.6%~96.2%,氨基酸序列的同源性为91.3%~97.8%。从进化的角度来看,分离株SXCDK与台湾分离株96TD的亲缘关系最近,两者之间的进化距离为0.038,分离株SXCDK与2006年陕西省分离株SXYL2006进化距离较远,两者之间的进化距离为0.065。CSFV SXCDK株属于2.1a亚群毒株。【结论】分离株SXCDK是我国内地首株已确定全基因序列的猪瘟病毒2.1a亚群毒株,与同亚群的96TD亲缘关系最近。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 基因 分离株SXCDK 序列分析 2.1a亚群
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橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定 被引量:4
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作者 贺永国 李哲 +5 位作者 黄绵佳 曾宪海 林位夫 刘洁琼 张春红 马晓晓 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期163-168,共6页
【目的】克隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.1(PHEV2.1),构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(Hb HMGR1)的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础。【方法】根据已报道的HEV2.1序列(Gen Bank登录号AY247789.1)设计1对特... 【目的】克隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.1(PHEV2.1),构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(Hb HMGR1)的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础。【方法】根据已报道的HEV2.1序列(Gen Bank登录号AY247789.1)设计1对特异引物,采用PCR从橡胶树热研7-33-97基因组DNA中克隆PHEV2.1,与Hb HMGR1基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体,并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定。【结果】用特异引物可从热研7-33-97基因组DNA中扩增获得1852 bp的PHEV2.1片段,其与AY247789.1启动子序列的同源性为98.6%。将PHEV2.1与Hb HMGR1基因融合构建乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1,经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功。【结论】将PHEV2.1和Hb HMGR1基因先构建到p CAMBIA3301载体上再克隆至p CAMBIA2301载体上,能有效解决直接克隆至p CAMBIA2301载体上出现Pst I突变、阻碍载体构建的难题,成功构建获得乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1。 展开更多
关键词 橡胶树 乳管特异性启动子PHEV2.1 HbHMGR1基因 植物表达载体 构建 鉴定
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