小麦TabHLH123-6A基因克隆与功能标记开发

根系是植物吸收水分与养分的重要器官,挖掘利用小麦根系相关调控基因对于粮食生产具有重要意义。b HLH(basic Helix-Loop-Helix)是植物中广泛存在的一类转录因子,参与调节植物的生长发育。本研究克隆了小麦基因Tab HLH123-6A,其开放阅读框1386 bp,编码461个氨基酸,含有保守的HLH结构域,具有典型的b HLH家族成员特性。对其互作蛋白预测分析发现,Tab HLH123-6A与HLH家族的其他蛋白以及锌指蛋白存在相互作用。组织表达模式分析表明,Tab HLH123-6A在小麦不同生育时期的各个组织中均有表达,在根和根基中表达量较高。启动子序列分析显示Tab HLH123-6A启动子区含有多种顺式作用元件,包括生长素、脱落酸和茉莉酸甲酯等激素应答元件。q RT-PCR检测结果表明在生长素、脱落酸和茉莉酸甲酯的处理下Tab HLH123-6A表达均上调,但是在PEG模拟的干旱处理下其表达受到抑制。利用小麦多态性群体材料检测到Tab HLH123-6A基因25 bp处有1个核苷酸变异位点(C/T),表示为Tab HLH123,根据该位点开发了功能标记d CAPS-Kpn I。关联分析发现Tab HLH123与小麦深根比显著相关,且等位变异类型为Tab HLH123的小麦深根比高于Tab HLH12325-T,Tab HLH123在小麦育种历史中受到了正向选择。本研究结果为小麦根系构型改良提供了理论依据和基因资源。

HPV阳性宫颈癌细胞中NFX1-123与HPV16 E6的细胞定位关系及其可能作用机制

目的:构建并验证NFX1-123基因真核表达质粒,初探其在HPV阳性宫颈癌细胞中与HPV16 E6的细胞定位关系及可能作用机制。方法:获取NFX1-123基因片段,插入真核表达载体,构建并鉴定重组表达质粒。通过免疫共沉淀和免疫荧光方法对NFX1-123和HPV16 E6的相互作用与细胞定位关系进行研究。结果:酶切鉴定和测序确认了重组表达质粒nHA-NFX1-123/pRK5构建成功。NFX1-123蛋白可在HEK-293T细胞中正常表达且主要表达在细胞质中。通过免疫共沉淀法验证了NFX1-123和HPV16 E6蛋白结合。免疫荧光观察到与HPV16 E6共表达时,NFX1-123从细胞质迁移至细胞核并与细胞核中的HPV16 E6发生共定位。结论:成功构建nHA-NFX1-123/pRK5重组质粒。NFX1-123蛋白可与HPV16 E6蛋白结合,并受HPV16 E6影响从细胞质转移至细胞核,补充解释了为何胞质中的NFX1-123可与胞核中的HPV16 E6结合并通过多途径促进HR-HPV感染的宫颈上皮向宫颈癌发生。