复方甘草酸苷联合他克莫司治疗过敏性紫癜性肾炎患儿的临床效果

【目的】探讨复方甘草酸苷联合他克莫司治疗过敏性紫癜性肾炎患儿的临床效果。【方法】选择2020年1月至2023年1月本院收治的88例过敏性紫癜性肾炎患儿,采用随机数字表法将其分为观察组与对照组,每组44例。对照组采用复方甘草酸苷治疗,观察组采用复方甘草酸苷联合他克莫司治疗,两组治疗时间均为2个月。比较两组患儿肾功能指标[免疫球蛋白G(lgG)、免疫球蛋白A(lgA)]、炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]及不良反应发生情况。【结果】治疗后,两组lgG、lgA水平均低于治疗前,观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组血清IL-6、TNF-α水平低于治疗前,观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者临床有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】复方甘草酸苷联合他克莫司可改善过敏性紫癜性肾炎患儿肾功能,缓解炎症反应,临床治疗效果较好,且不良反应发生率低,值得推广与应用。

雷公藤多苷联合他克莫司及激素治疗难治性肾病综合征的效果及对血清sTNF-R1、IGFBP-2、CFH水平的影响

目的 探讨雷公藤多苷联合他克莫司及激素治疗难治性肾病综合征(RNS)的疗效对血清可溶性肿瘤坏死因子受体1(s TNF-R1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)、补体因子H(CFH)水平的影响。方法 研究对象为2018年8月至2021年8月于江南大学附属医院治疗的RNS患者102例,以随机数字表法分为对照组(n=51,采取甲泼尼龙片加他克莫司胶囊治疗)和观察组(n=51,在对照组基础上给予雷公藤多苷片治疗)。评估两组的治疗效果、血清相关指标,统计两组的不良反应。结果 观察组治疗总有效率(96.08%)高于对照组(80.39%)(χ^(2)=6.044,P=0.014);治疗后,观察组患者血清白蛋白、CFH水平[分别为(36.54±8.11) g·L^(-1)、(586.20±100.72)μg·m L^(-1)],高于对照组[分别为(32.58±6.12) g·L^(-1)、(540.11±100.47)μg·m L^(-1)],差异均有统计学意义(t=2.783,P=0.006;t=2.314,P=0.023);观察组患者24 h尿蛋白、肌酐、s TNF-R1、IGFBP-2水平[分别为(2.67±0.69) g、(82.25±16.13)μmol·L^(-1)、(1.56±0.45) ng·m L^(-1)、(51.34±10.44) ng·m L^(-1)],低于对照组[分别为(3.24±1.02) g、(92.68±17.35)μmol·L^(-1)、(1.91±0.58) ng·m L^(-1)、(57.79±12.58) ng·m L^(-1)],差异均有统计学意义(t=3.306,P=0.001;t=3.135,P=0.002;t=3.405,P=0.001;t=2.820,P=0.005);观察组复发率(1.96%)低于对照组(13.73%)(χ^(2)=4.883,P=0.027)。结论 公藤多苷联合他克莫司及激素治疗RNS效果佳,降低复发率,改善肾功能,减轻炎症,有望作为辅助治疗RNS的药物。

肾移植受者代谢标志物与血脂水平的相关性研究

目的分析肾移植受者血脂代谢、高脂血症、他克莫司药物代谢中共表达的基因及其与血脂水平的相关性。方法从比较毒理基因组学数据库(CTD)中筛选出共表达的基因。收集25例肾移植受者的一般资料,检测ATP结合盒亚家族A成员1(ABCA1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、糖基磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1(GPIHBP1)的表达情况。对肾移植受者进行跟踪随访,收集术后1、3、6、12个月空腹血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、总蛋白、白蛋白、球蛋白、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、他克莫司血药浓度,并分析受者高脂血症的发生情况。分析ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ与临床指标的相关性,及其与相关指标对肾移植术后高脂血症的诊断效能。结果共筛选出3个共表基因ABCA1、PPAR-γ、GPIHBP1。ABCA1与术后6个月胆固醇、术后3个月他克莫司血药浓度成正相关,与术后3个月空腹血糖呈负相关(均为P<0.05);GPIHBP1与术前胆固醇、术前甘油三酯呈负相关,与术后3个月他克莫司血药浓度呈正相关(均为P<0.05)。PPAR-γ与术前球蛋白、术前低密度脂蛋白呈负相关(均为P<0.05)。ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ联合术前球蛋白及术后1、6个月血糖水平诊断肾移植术后高甘油三酯血症的效果较好(AUC=0.900)。ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ联合术后1、6个月他克莫司血药浓度及术后6个月血糖水平诊断肾移植术后高胆固醇血症的效果较好(AUC=0.931)。结论ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ与肾移植术后血脂、他克莫司血药浓度等指标存在不同程度的相关关系,但用于预测肾移植术后高脂血症尚无确切依据。提升机体免疫力、规范的血糖管理可能是控制高脂血症的有益因素。

BiPAP对OASHS合并代谢综合征患者视黄醇结合蛋白4和心踝指数的影响

目的探讨双水平气道正压通气(Bi PAP)对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAHS)合并代谢综合征(MS)患者视黄醇结合蛋白4(RBP4)、心踝指数(CAVI)的影响。方法收集368例OSAHS合并MS患者,按治疗方法分为对照组及Bi PAP治疗组;选择同期正常人群110例作为健康志愿组。给予对照组常规药物治疗,Bi PAP治疗组在此基础上加用Bi PAP治疗。比较健康志愿组、对照组与OSAHS合并MS组临床基线资料以及对照组和Bi PAP治疗组治疗前后AHI、RBP4、CAVI水平。结果 OSAHS合并MS组收缩压、舒张压、空腹血糖、总胆固醇、低密度脂蛋白、肌酐、高密度脂蛋白、甘油三酯、AHI、RBP4及CAVI高于健康志愿组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组及Bi PAP治疗组基线资料差异无统计学意义(P>0.05)。治疗6个月后,Bi PAP治疗组AHI、RBP4、CAVI均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Bi PAP可能通过降低RBP4、CAVI水平,达到减缓动脉硬化进程及改善临床预后的目的。

他克莫司转换为环孢素A改善肾移植后新发糖尿病

背景:肾移植后糖尿病的发生原因目前尚不明确,一般认为与患者种族、年龄、体质量、家族史、丙肝病毒感染及免疫抑制剂方案有关目的:探讨将他克莫司转换为环孢素A改善移植后新发糖尿病的有效性和安全性。方法:将42例符合入组标准的肾移植受者随机分为转换组(n=20)和对照组(n=22);转换组将他克莫司转换为环孢素A,对照组不转换。从对照组确诊为新发糖尿病、转换组他克莫司转换为环孢素A的时间开始随访1年,动态监测患者的血糖状况,同时监测患者体质量指数、血清肌酐、尿素氮、尿酸、肝功能、血脂、免疫抑制剂用量及浓度范围、尿微量白蛋白、急性排斥反应发生率、感染发生率、丙肝感染率、人/肾存活率等直至随访终点。结果与结论:随着时间的增长,转换组的空腹血糖及糖化血红蛋白逐渐改善,需要接受降糖治疗的患者例数逐渐减少,转换1年后,有11例(55%)新发糖尿病完全缓解,不需接受降糖药物治疗;而对照组,需要接受降糖药物治疗的患者例数逐渐增多,1年后所有患者均需接受治疗,而且空腹血糖及糖化血红蛋白控制情况均不如转换组。同时,转换组与对照组相比,血清肌酐、谷丙转氨酶、三酰甘油、胆固醇、尿酸等均无明显差异,而尿微量白蛋白在转换后6个月开始则明显少于对照组;两组的急性排斥反应发生率、感染发生率及人/肾存活率均无明显差异。将他克莫司转换为环孢素A,短期内(1年内)改善肾移植后新发糖尿病是安全而有效的。

霉酚酸酯联合他克莫司治疗激素抵抗型难治性肾病综合征的疗效观察

【目的】探讨霉酚酸酯（MMF）联合他克莫司（TAC）治疗激素抵抗型肾病综合征（SRNS）的疗效、不良反应。【方法】收集SRNS患者74例，其中微小病变（MCD）32例、局灶节段性肾小球硬化（FSGS）22例、弥漫性系膜增生（DMP）20例，所有患者采用 MMF 1 g/d和糖皮质激素50 mg（隔日一次）治疗（第一步治疗）；第一步治疗仍未实现临床缓解的患者，则自动进入第二步治疗方案，即停用激素，采用MMF 1 g/d联合T AC 3 mg/d治疗6个月，观察不同治疗方案和病理类型的疗效及不良反应。【结果】74例SRNS患者接受第一步治疗，24例（32．4％）患者达到完全缓解，4例（5．4％）部分缓解；余下46例未出现临床缓解的患者停用激素，接受第二步治疗，22例（47．8％）患者达到完全缓解，4例（8．7％）患者达到部分缓解。不同病理类型缓解率比较有显著性差异（ P＜0．05），其中MCD缓解率最高，FSGS缓解率最低。治疗过程中所有患者均无明显不良反应。【结论】MMF联合TAC治疗SRNS ，疗效满意，值得临床推广应用。

p-mTOR、eIF4E、p-4EBP1在侵袭性垂体瘤中的表达及相关性研究

目的观察磷酸化的哺乳动物雷帕霉素蛋白(phosphorylated mammal target of rapamycin,p-mTOR)、真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)和磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(phosphorylated eukaryotic initiation factor 4Ebinding protein 1,p-4EBP1)在侵袭性垂体瘤中的表达并进行相关性分析。方法选择侵袭性垂体瘤患者52例和非侵袭性垂体瘤患者49例,应用免疫组织化学方法检测p-mTOR、eIF4E和p-4EBP1的表达,比较2组p-mTOR、eIF4E和p-4EBP1的表达差异并分析三者在侵袭性垂体瘤中的相关性。结果在侵袭性垂体瘤中p-mTOR、eIF4E和p-4EBP1的表达阳性率分别为73.08%、63.46%和67.31%,高于非侵袭性垂体瘤的48.98%、38.78%及36.73%,差异有统计学意义(P<0.05);在侵袭性垂体瘤中p-mTOR、eIF4E与p-4EBP1表达呈正相关(r=0.520,P=0.000;r=0.360,P=0.041),eIF4E与p-4EBP1表达亦呈正相关(r=0.320,P=0.019)。结论在侵袭性垂体瘤中p-mTOR、eIF4E和p-4EBP1表达阳性率均高于非侵袭性垂体瘤,且在侵袭性垂体瘤中p-mTOR、eIF4E、p-4EBP1表达分别呈正相关。p-mTOR、eIF4E和p-4EBP1在垂体瘤的侵袭过程中可能发挥着促进其侵袭的作用。

急性冠脉综合征患者mTOR活化与调节性T细胞及细胞因子的关系

目的检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)在急性冠脉综合征(ACS)患者外周血T细胞中的活化状态,及其与调节性T细胞(Tregs)以及细胞因子的关系。方法选取ACS患者32例(ACS组),同期因胸痛症状为主诉但心电图及冠脉造影正常,排除冠心病的胸痛综合征(CPS)患者28例为对照组;采用蛋白免疫印迹法检测2组外周血T细胞中m TOR、p70S6KT389磷酸化(p-p70S6KT389)及AKTS473磷酸化(p-AKTS473)水平;酶联免疫吸附测定法测T细胞亚群相关细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-17及转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;流式细胞仪检测CD4+CD25+Fox P3+Tregs占CD4+T细胞的百分比;采用Spearman相关分析各指标之间的关联性。结果 ACS组m TOR及p-p70S6KT389表达量均高于对照组(均P<0.01);与对照组比较,ACS组IFN-γ、IL-17升高,Tregs百分比及TGF-β1减少(均P<0.05),而2组p-AKTS473、IL-4比较差异无统计学意义;相关分析显示p-p70S6KT389与IFN-γ及IL-17呈显著正相关(rs分别为0.91,0.92,均P<0.01),与Tregs及TGF-β1呈显著负相关(rs分别为-0.85,-0.80,均P<0.01)。结论 ACS患者外周血T细胞中m TORC1活化与Tregs减少及细胞因子失衡有关。

mTOR/P70S6K信号通路在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨m TOR/P70S6K信号通路在宫颈癌组织中的表达水平及其相关临床诊断、治疗意义。方法收集2012年1月—2014年1月手术切除或进行活检的正常宫颈组织65例,宫颈癌组织、癌旁组织各85例,提取组织中的mRNA,应用RT-PCR的方法来检测3种组织中m TOR和P70S6K mRNA的表达水平,并进行分析。结果宫颈癌组织中m TOR、P70S6K mRNA的表达明显高于癌旁组织及正常组织(P<0.05),m TOR、P70S6K mRNA水平在宫颈癌组织、癌旁组织及正常组织中均呈正相关(P<0.05)。结论 m TOR信号通路在宫颈癌组织中处于活化状态,其在宫颈癌的发生发展以及向其他部位转移中具有重要作用,是一个诊断和治疗的分子靶点。

应用组织芯片技术检测mTOR和VEGF在结肠癌中的表达

目的检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在结肠癌中的表达,并探讨其变化与结肠癌病理参数的关系。方法在含有63例结肠癌标本的组织芯片上,利用免疫组化检测mTOR和VEGF在结肠癌和结肠正常组织中的表达,并统计分析相关结果与结肠癌临床参数的关系。结果 mTOR和VEGF在结肠癌中总表达率分别为42.6%和60.3%,在正常结肠粘膜组织中的表达率分别为21.4%和40.5%。结肠癌组织中mTOR和VEGF的表达率显著高于其在正常结肠组织中的表达(P<0.05)。mTOR的表达率与性别和年龄均无明显关系(P>0.05)。mTOR和VEGF与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移与远处转移呈显著正相关,mTOR和VEGF之间亦存在正相关性。结论 mTOR和VEGF在结肠癌的发生发展中起到极其重要的作用,mTOR和VEGF可作为结肠癌治疗的靶点。

阿尔茨海默病患者血清中Apelin13和FKBP5的表达水平及临床意义

目的探究阿尔茨海默病(AD)患者血清中Apelin13和FK506结合蛋白51(FKBP5)的表达水平及意义。方法选取93例AD患者(AD组),同时选取同年龄层体检的90例健康者(对照组)。比较2组血清Apelin13、FKBP5 mRNA水平差异。Pearson相关分析Apelin13、FKBP5 mRNA与简易精神状态量表(MMSE)评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估Apelin13、FKBP5 mRNA对AD患者重度认知功能障碍的诊断价值。结果AD组患者MMSE评分、血清Apelin13水平较对照组降低,而FKBP5 mRNA水平较对照组升高(均P<0.01)。轻、中及重度组AD患者血清中Apelin13水平依次降低,而FKBP5 mRNA水平依次升高(均P<0.05)。二元Logistic回归分析显示,较高的MMSE评分、Apelin13是AD发生的保护因素,而较高的FKBP5 mRNA是AD发生的危险因素(均P<0.05)。AD患者MMSE评分与血清FKBP5 mRNA水平呈负相关,而与Apelin13水平呈正相关(均P<0.05)。ROC曲线显示,Apelin13联合FKBP5 mRNA诊断重度认知功能障碍的曲线下面积(AUC)及95%CI[0.884(0.808~0.961)]明显高于单一Apelin13[0.776(0.673~0.879)]或FKBP5 mRNA[0.801(0.699~0.902)],其敏感度和特异度分别为81.25%和86.89%(均P<0.05)。结论AD患者血清中Apelin13水平降低,而FKBP5 mRNA水平升高,Apelin13联合FKBP5 mRNA对AD患者重度认知功能障碍具有良好的诊断效能。

普罗布考对PAN致足细胞损伤模型中mTOR及氧化应激水平影响

目的观察普罗布考对氨基核苷嘌呤霉素(PAN)致小鼠永生化足细胞损伤模型哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及氧化应激水平的影响,探讨普罗布考的肾脏保护作用机制。方法 PAN刺激体外培养的足细胞24h,建立足细胞损伤模型。采用CCK-8方法检测不同浓度普罗布考作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。将足细胞随机分为正常组、PAN组(PAN 50mg/L)、普罗布考组(PAN 50mg/L+普罗布考40μmol/L),予以相应药物刺激24h。采用荧光酶标仪检测DCFH-DA荧光探针标记的足细胞中活性氧(ROS)水平的变化。采用荧光显微镜检测DCFH-DA荧光探针标记的足细胞荧光强度的变化。采用Western-blot方法检测各组足细胞mTOR蛋白表达水平。结果 CCK-8方法检测结果显示,PAN造成足细胞损伤后加入浓度为20、40、100μmol/L普罗布考均使足细胞活性上升,与0μmol/L普罗布考组比较,差异有显著性(F=1 959.00,P<0.05),其浓度为40μmol/L时作用最明显。荧光显微镜检测结果显示,PAN组足细胞内荧光强度增强。DCF荧光强度检测结果显示,PAN组细胞内ROS生成明显升高,与正常组比较,差异有显著性(F=33 525.19,P<0.05);普罗布考组ROS生成明显减少,与PAN组比较,差异有显著性(P<0.05)。Western-blot方法检测结果显示,PAN可使mTOR表达水平明显升高,与正常组比较,差异有显著性(F=179.55,P<0.05);普罗布考40μmol/L共处理细胞后,mTOR表达水平下降,与PAN组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论普罗布考可通过下调PAN导致的mTOR激活,降低ROS生成,减轻氧化应激水平,从而抑制足细胞损伤。

基于稠密网络的DNA结合蛋白质预测方法

提出了一种基于深度学习的DNA结合蛋白识别方法(DBP-DenseNet)。以稠密网络代替传统的金字塔式卷积神经网络(CNN)结构,将上一层的特征信息整合到下一层,利用层间的特征融合来学习整个氨基酸序列的综合特征;由双向长短期记忆网络(Bi-LSTM)负责在氨基酸序列上下文中获取长期依赖关系。实验结果表明,稠密连接可以有效提高模型的特征表达能力。

他克莫司预防经内镜逆行胰胆管造影术后胰腺炎的临床研究

[目的]探讨预防性应用他克莫司（Tacrolimus ，TAC）对经内镜逆行胰胆管造影术（endoscopic retrograde cholangiopancreatography ，ERCP）后胰腺炎（post-ERCP pancreatitis ，PEP）的影响。[方法]将本院符合纳入病例条件行ERCP检查的168例患者随机分为三组（每组56例）：A组为常规对照组，B组为奥曲肽组，C组为他克莫司组。A组不做任何特殊处理，B组术前30 min皮下注射奥曲肽0．1 mg ，C组术前2 h口服TAC 5 mg。观察三组患者术前、术后24 h血清淀粉酶水平，并评估比较ERCP术后胰腺炎和高淀粉酶血症发生率。[结果]三组患者ERCP术前血清淀粉酶均正常，ERCP术后24 h血清淀粉酶水平，C组低于A、B组，B组低于A组，且各组之间相比较差异均有显著性（ P＜0．01）。A组患者发生高淀粉酶血症比例为50％（28/56，其中17例患者发生PEP（17/56，30．1％），B组患者发生高淀粉酶血症比例为30．1％（17/56），其中8例患者发生PEP（8/56，14．2％），C组患者发生高淀粉酶血症比例为14．2％（8/56），其中2例患者发生PEP（2/56，3．5％），C组患者的胰腺炎及高淀粉酶血症发病率明显低于A、B组，B组患者的胰腺炎及高淀粉酶血症发病率明显低于A组，且各组之间相比较差异均有显著性（ P ＜0．05）。[结论]ERCP术前应用TAC和奥曲肽均可有效降低术后胰腺炎和高淀粉酶血症的发生率，但是T AC的效果更好，更具有临床应用价值。

基因多态性对原发性肾病综合征患者他克莫司个体化治疗的影响

他克莫司(tacrolimus, TAC,FK506)是一种高效免疫抑制剂,已越来越多地应用于原发性肾病综合征的治疗,但TAC的使用剂量过大或不足在临床实践中仍较为普遍。近期研究显示,细胞色素P450 3A4酶(cytochrome P450 family 3 subfamily A4,CYP3A4)、细胞色素P450 3A5酶(cytochrome P450 family 3 subfamily A5,CYP3A5)和ABC转运蛋白在TAC代谢和转运中起重要作用,且它们的单核苷酸基因多态性可部分解释个体间药代动力学行为的差异。本文拟就CYP3A4/3A5与ABC转运蛋白基因多态性对原发性肾病综合征患者TAC血药浓度的影响做一综述,为TAC在该人群的个体化治疗提供理论依据。

辛伐他汀对2型糖尿病认知功能障碍的保护作用及其机制研究

背景 2型糖尿病(T2DM)是常见的代谢紊乱性内分泌疾病,以高血糖为特征,长期高血糖状态可引起认知功能损害,表现为记忆和学习障碍、定向障碍、执行力障碍等。与T2DM常见并发症相比,关于中枢神经系统并发症的研究较少。目的观察辛伐他汀对T2DM大鼠学习记忆能力的影响,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路在辛伐他汀改善认知功能中的作用。方法于2016年9月采用随机数字表法将120只健康雄性SD大鼠分为对照组(40只)、糖尿病组(40只)和辛伐他汀组(40只),糖尿病组和辛伐他汀组采用腹腔注射链脲佐菌素分别成功制备T2DM大鼠模型38、37只;辛伐他汀组大鼠采用辛伐他汀灌胃,对照组和糖尿病组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠溶液。饲养至32周行Morris水迷宫实验评估大鼠的记忆能力;显微镜下观察各组大鼠海马组织结构的改变,行Western blotting对mTOR、p70S6K、tau、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)表达水平进行分析。结果糖尿病组和辛伐他汀组大鼠空腹血糖均高于对照组,体质量均低于对照组(P<0.01)。糖尿病组和辛伐他汀组第2、3、4、5天的逃避潜伏期均长于对照组(P<0.05);辛伐他汀组第2、3、4、5天的逃避潜伏期均短于糖尿病组(P<0.05)。显微镜观察显示,糖尿病组海马神经元数量减少,且排列紊乱,细胞膜皱褶,胞核缺失,细胞器减少;辛伐他汀组海马神经元细胞结构大致正常,数量略减少。糖尿病组和辛伐他汀组的p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K、p-tau/t-tau均高于对照组(P<0.01);辛伐他汀组的p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K、p-tau/t-tau均低于糖尿病组(P<0.01)。糖尿病组和辛伐他汀组的MDA/β-actin、GSH/β-actin均高于对照组(P<0.01);辛伐他汀组的MDA/β-actin、GSH/β-actin均低于糖尿病组(P<0.01)。结论辛伐他汀能够改善T2DM大鼠认知功能,可能与mTOR/p70S6K信号通路的抑制和氧化应激产物生成减少有关。

基于MeCP2蛋白和双酶信号放大的DNA甲基化电化学免疫分析

目的:探讨甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)和双酶信号放大电化学免疫传感器用于DNA甲基化定量检测的效果。方法:固定在纳米金(AuNPs)修饰电极表面的探针与靶DNA杂交后,将电极于37 ℃下与MeCP2蛋白溶液孵育,再与葡萄糖氧化酶(GOD)和辣根过氧化物酶(HRP)共同标记的MeCP2-His标签抗体(GOD-HRP/anti-His tag)反应;于含葡萄糖和对苯二酚的检测液中测试其电化学信号,建立电信号大小与DNA甲基化浓度之间的关系,确定该传感器的检测限,考察实验所设计的双酶信号放大策略的放大效果。结果:在1.0×10 -14 ~1.0×10 -7 mol/L范围内,电信号大小与DNA甲基化浓度的对数呈线性关系,回归方程为 I (峰电流值,μA)=1.038 lg C (DNA甲基化的浓度,mol/L)+16.598,相关系数 r 为0.993,检出限为0.1 fmol/L;双酶标记体系的DPV峰电流最高(9.105 μA),单独HRP标记体系的DPV峰电流为1.99 μA,单独GOD标记体系的电信号极其微弱、仅为0.969 μA;重复性实验得 RSD 为4.6%;将传感器置于pH 7.4的PBS中,4 ℃条件下放置28 d后,响应电流大小为最初的93.7%,表明该传感器具有较好的稳定性;与单酶标记体系相比,双酶标记体系产生的电化学信号更强。结论:采用基于MeCP2和双酶信号放大电化学免疫传感器具有较高的灵敏度,能实现痕量DNA甲基化的检测。

甲状腺滤泡细胞的自噬活性参与慢性淋巴细胞性甲状腺炎的发病机制

目的探讨甲状腺滤泡细胞自噬对慢性淋巴细胞性甲状腺炎(CLT)的影响及炎性因子干扰素⁃γ(IFN⁃γ)对甲状腺滤泡细胞自噬参与CLT的作用。方法2018年1—7月,选取新疆喀什地区第二人民医院24例CLT甲状腺切除的病人作为CLT组,并选择同期入院的24例单纯甲状腺肿(SG)甲状腺切除病人作为SG组;对人甲状腺滤泡细胞分离、培养、鉴定;流式细胞技术检测甲状腺组织中CD3+T细胞占比;放射性免疫法检测甲状腺滤泡细胞三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、甲状腺球蛋白(Tg)的水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测IFN⁃γ、环磷酸腺苷(cAMP)水平;蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白Be⁃cline、微管相关蛋白1轻链3⁃Ⅱ(LC3B⁃Ⅱ)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及不同浓度IFN⁃γ对Becline、LC3B⁃Ⅱ、mTOR蛋白的影响。结果成功分离出人甲状腺滤泡上皮细胞,倒置显微镜下观察,可见人甲状腺滤泡细胞在贴壁之前呈圆形或椭圆形或不规则形状,CLT病人组织切片可见多个淋巴生发中心,大量淋巴细胞浸润,甲状腺滤泡细胞萎缩。SG病人甲状腺组织甲状腺滤泡细胞未见明显炎症浸润。流式细胞分析结果显示,CLT组甲状腺滤泡上皮细胞内浸润的CD3+淋巴细胞数所占百分比(25.76±4.05)%明显高于SG组(10.35±4.21)%,两组间比较差异有统计学意义(n=24,P<0.001)。与SG组比较,CLT组中T3、T4、Tg、INF⁃γ及cAMP水平[甲状腺组织:(6.70±0.32)nmol/L,(44.05±0.39)nmol/L,(0.65±0.01)μg/L,(15.84±1.43)μg/L,(3.680±0.046)μmol/L;血清:(9.89±0.32)nmol/L,(39.25±0.27)nmol/L,(1.86±0.42)μg/L,(16.32±0.31)μg/L,(4.325±0.012)μmol/L]均升高,差异有统计学意义。CLT组织与SG组织相比自噬水平低下,表现为Becline,LC3B⁃Ⅱ蛋白低表达[Becline蛋白:(7.16±0.15);LC3B⁃Ⅱ蛋白:(0.82±0.01)],mTOR蛋白高表达(12.26±0.16)。IFN⁃γ干预后,甲状腺滤泡细胞中自噬蛋白Be⁃cline,mTOR,LC3B⁃Ⅱ被诱导,表现为Becline,LC3B⁃Ⅱ水平高表达[250 U/mL组:(7.80±0.07),(1.51±0.05);500 U/mL组:(8.50±0.10),(1.82±0.04);1000 U/mL:(9.16±0.14),(2.47±0.09)],mTOR水平低表达[250 U/mL组:(12.26±0.16);500 U/mL组:(0.84±0.13);1000 U/mL组:(9.66±0.07)],随着IFN⁃γ浓度的增加,诱导作用愈明显。结论甲状腺滤泡细胞自噬参与CLT的发展,且作用机制可能与炎性因子IFN⁃γ有关。

贝前列素钠联合他克莫司治疗原发性肾病综合征的临床效果及对NLRP3炎症小体的影响

目的探究贝前列素钠联合他克莫司治疗原发性肾病综合征(PNS)的临床效果及对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的影响。方法选择2019年10月至2020年11月我院收治的124例PNS患者,按照随机数字表法将其分为治疗组(62例,贝前列素钠片联合他克莫司胶囊)及对照组(62例,他克莫司胶囊)。比较两组的临床效果。结果治疗后,两组的NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平均降低,且治疗组低于对照组(P<0.01)。治疗后,两组的血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平及24 h尿蛋白定量(24 h UPQ)均降低,白蛋白(ALB)水平均升高,且治疗组优于对照组(P<0.01)。治疗组的治疗总有效率显著高于对照组(P=0.023)。两组的不良反应总发生率无显著差异(P>0.05)。治疗组的复发率低于对照组(P=0.012)。结论贝前列素钠联合他克莫司治疗PNS具有较好的效果,可明显改善患者的临床症状,提高肾功能,降低疾病复发率,这可能与其有效抑制NLRP3介导的炎症反应密切相关。

BXSB狼疮小鼠外周血及脾肾组织干扰素-酌表达水平以及FK506对其表达的影响

目的探讨干扰素(IFN)-酌在狼疮小鼠表达和分泌的动态变化以及他克莫司(FK506)对其表达和分泌的影响。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测不同周龄BXSB小鼠(狼疮模型)和C57BL/6小鼠(正常对照)血清IFN-酌水平以及脾、肾组织IFN-酌mRNA表达量,并对比了FK506处理BXSB小鼠和未处理BXSB小鼠IFN-酌表达的差异;此外本研究还检测各组动物血浆抗dsDNA抗体水平以及尿蛋白浓度。结果BXSB小鼠血IFN-酌水平以及脾、肾组织IFN-酌mRNA表达量均显著高于C57BL/6小鼠;各周龄BXSB小鼠血清IFN-酌水平以及脾组织IFN-酌mRNA表达量差异无统计学意义,而16周龄以后肾组织IFN-酌mRNA表达量开始显著增高。他克莫司能显著降低BXSB小鼠IFN-酌分泌水平以及脾、肾组织IFN-酌mRNA表达量,也能显著降低血清抗dsDNA抗体水平以及尿蛋白浓度。结论全身循环及肾组织局部IFN-酌的高表达和高分泌在系统性红斑狼疮(SLE)的发生和发展以及肾损伤过程中起重要的作用;FK506可作为治疗SLE的免疫抑制剂之一,通过IFN-酌的作用可能是本药治疗SLE的重要作用机制之一。